2025年大腸菌群試題及答案一、單項選擇題（每題1分，共30分。每題只有一個正確答案，請將正確選項字母填入括號內(nèi)）1.大腸菌群在伊紅美藍瓊脂（EMB）平板上典型菌落的中心顏色為（）A.金屬綠色光澤B.橙黃色C.無色透明D.粉紅色答案：A2.GB4789.32016第一法（MPN計數(shù)法）初發(fā)酵所用培養(yǎng)基為（）A.月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯B.EC肉湯C.BGLB肉湯D.營養(yǎng)肉湯答案：A3.若10mL原液、1mL原液、0.1mL原液接種量對應的陽性管數(shù)分別為320，則MPN值為（）A.93B.150C.75D.43答案：A4.大腸菌群在44.5℃EC肉湯中產(chǎn)氣，可初步判定為（）A.總大腸菌群B.耐熱大腸菌群C.大腸桿菌D.檸檬酸桿菌答案：B5.下列哪項不是大腸菌群生化特征（）A.發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣B.氧化酶陽性C.革蘭陰性D.需氧或兼性厭氧答案：B6.在VRBA平板上，大腸菌群菌落直徑通常大于（）A.0.1mmB.0.5mmC.1.0mmD.2.0mm答案：B7.GB4789.32016規(guī)定，復發(fā)酵證實試驗培養(yǎng)溫度為（）A.36℃±1℃B.30℃±1℃C.42℃±1℃D.44.5℃±0.2℃答案：A8.若樣品為含抑菌劑的酸性飲料，前處理應加入（）A.無菌磷酸鹽緩沖液B.無菌1%蛋白胨水C.無菌3%NaClD.無菌0.1%吐溫80答案：B9.MPN結(jié)果報告單位為（）A.CFU/mLB.MPN/100mLC.MPN/gD.個/mL答案：C10.下列哪種情況可直接判定為“大腸菌群檢出”而無需復發(fā)酵（）A.VRBA平板計數(shù)≥1CFU且典型菌落≥1B.LST產(chǎn)氣但革蘭染色陽性C.BGLB不產(chǎn)氣D.EC不產(chǎn)氣答案：A11.關(guān)于大腸菌群與糞鏈球菌比值（FC/FS）>4，可推測污染來源為（）A.溫血動物糞便B.土壤C.植物表面D.工業(yè)廢水答案：A12.若樣品為冷凍熟制蝦仁，檢樣前解凍條件為（）A.4℃18hB.25℃2hC.45℃30minD.60℃5min答案：A13.在LSTMUG法中，MUG被β葡萄糖醛酸酶分解產(chǎn)物在紫外燈下呈（）A.藍色熒光B.綠色熒光C.黃色D.紅色答案：A14.下列哪項不是VRBA培養(yǎng)基成分（）A.膽鹽B.中性紅C.結(jié)晶紫D.亞碲酸鉀答案：D15.若1:10稀釋液3管均產(chǎn)氣，1:100稀釋液3管均不產(chǎn)氣，則結(jié)果報告為（）A.＞1100MPN/gB.430MPN/gC.75MPN/gD.＜30MPN/g答案：A16.關(guān)于大腸菌群平板計數(shù)法，下列說法正確的是（）A.每個稀釋度接種0.1mL于2個無菌平皿B.傾注溫度控制在55℃±1℃C.凝固后無需覆蓋D.培養(yǎng)24h即可計數(shù)答案：B17.若樣品為奶粉，檢樣制備需加入預熱至（）的無菌稀釋液A.45℃±1℃B.36℃±1℃C.25℃±1℃D.60℃±1℃答案：A18.下列哪項屬于大腸菌群屬水平鑒定靶基因（）A.lacZB.uidAC.phoDD.invA答案：A19.若VRBA平板菌落計數(shù)為85CFU，其中10個典型菌落復發(fā)酵8個陽性，則最終計數(shù)為（）A.68CFU/gB.85CFU/gC.8.5×101CFU/gD.6.8×101CFU/g答案：A20.關(guān)于最大可能數(shù)（MPN）的95%置信區(qū)間，下列說法正確的是（）A.隨陽性管數(shù)增加而變窄B.與接種體積無關(guān)C.僅與稀釋倍數(shù)有關(guān)D.無法計算答案：A21.若樣品為即食生菜，采樣后運輸溫度應控制在（）A.1–4℃B.6–8℃C.10–15℃D.室溫答案：A22.下列哪項不是大腸菌群快速檢測的免疫學方法（）A.膠體金層析B.酶聯(lián)免疫吸附C.熒光偏振D.環(huán)介導等溫擴增答案：D23.若實驗室使用自動MPN儀，陽性判讀依據(jù)為（）A.培養(yǎng)基顏色變化+熒光B.僅產(chǎn)氣C.僅渾濁D.僅酸度答案：A24.關(guān)于VRBA培養(yǎng)基中膽鹽作用，錯誤的是（）A.抑制革蘭陽性菌B.促進大腸菌群生長C.提高選擇性D.作為碳源答案：D25.若樣品為醬油，需調(diào)節(jié)pH至（）后再檢測A.6.8±0.2B.7.0±0.2C.7.4±0.2D.無需調(diào)節(jié)答案：B26.下列哪項屬于大腸菌群生物膜形成相關(guān)基因（）A.csgAB.stx1C.eaeD.aggR答案：A27.若樣品為熟制醬鹵肉，檢測前表面消毒采用（）A.75%酒精擦拭B.無菌水沖洗C.紫外線照射D.火焰灼燒答案：A28.關(guān)于大腸菌群質(zhì)控菌株ATCC25922，下列說法正確的是（）A.屬于大腸桿菌B.屬于肺炎克雷伯菌C.屬于陰溝腸桿菌D.屬于弗勞地檸檬酸桿菌答案：A29.若樣品為碳酸飲料，需經(jīng)（）除氣處理A.超聲波5minB.45℃水浴30minC.冷凍1hD.過濾答案：A30.關(guān)于大腸菌群檢測實驗室質(zhì)量控制，下列說法錯誤的是（）A.每批次需做空白對照B.每季度進行能力驗證C.可使用過期培養(yǎng)基D.陽性對照需同步答案：C二、多項選擇題（每題2分，共20分。每題有兩個或兩個以上正確答案，多選、少選、錯選均不得分）31.下列哪些屬于大腸菌群可能的生化反應（）A.乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣B.吲哚陽性C.甲基紅陽性D.VP陽性E.枸櫞酸鹽陽性答案：ABC32.關(guān)于GB4789.32016第二法（平板計數(shù)法），正確的是（）A.使用VRBA培養(yǎng)基B.覆蓋一層培養(yǎng)基防蔓延C.培養(yǎng)18–24hD.選取15–150CFU平板E.需復發(fā)酵證實答案：ABCDE33.下列哪些因素會影響MPN結(jié)果準確性（）A.稀釋液分布不均B.培養(yǎng)溫度波動C.試管密封不嚴D.接種量誤差E.培養(yǎng)基pH答案：ABCDE34.關(guān)于大腸菌群快速檢測的分子生物學方法，正確的是（）A.可檢測死菌B.需提取DNAC.可用uidA基因D.可用lacZ基因E.可用PMA抑制死菌信號答案：BCDE35.下列哪些樣品需進行前處理去除抑菌活性（）A.泡菜B.酒精飲料C.酸性果汁D.高糖蜜餞E.冷凍生魚答案：ABCD36.關(guān)于大腸菌群生物膜危害，正確的是（）A.增強抗消毒劑能力B.提高熱耐受C.促進交叉污染D.降低營養(yǎng)需求E.增加設備腐蝕答案：ABCE37.下列哪些屬于大腸菌群屬（）A.EscherichiaB.KlebsiellaC.EnterobacterD.CitrobacterE.Salmonella答案：ABCD38.關(guān)于大腸菌群檢測記錄，必須包含（）A.樣品編號B.培養(yǎng)基批號C.培養(yǎng)溫度D.陽性管數(shù)E.檢驗員簽名答案：ABCDE39.下列哪些情況需復檢（）A.空白對照陽性B.陽性對照陰性C.菌落蔓延無法計數(shù)D.培養(yǎng)基干裂E.結(jié)果異常高答案：ABCDE40.關(guān)于大腸菌群檢測廢棄物處理，正確的是（）A.121℃高壓滅菌30minB.使用含氯消毒劑浸泡C.直接丟棄D.分類收集E.記錄處理臺賬答案：ABDE三、判斷題（每題1分，共10分。正確打“√”，錯誤打“×”）41.大腸菌群在EC肉湯中44.5℃產(chǎn)氣即可判定為大腸桿菌。（）答案：×42.VRBA培養(yǎng)基中的中性紅為酸堿指示劑，大腸菌群產(chǎn)酸使菌落呈紅色。（）答案：√43.MPN法結(jié)果可報告為CFU/g。（）答案：×44.若樣品為冰塊，可直接取樣檢測無需解凍。（）答案：×45.使用微量生化鑒定系統(tǒng)時，接種菌懸液濃度應調(diào)至0.5McFarland。（）答案：√46.大腸菌群檢測實驗室潔凈級別應不低于100000級。（）答案：√47.若VRBA平板無典型菌落，可直接報告“未檢出”。（）答案：×48.使用袋裝培養(yǎng)基時，需檢查是否脹袋。（）答案：√49.大腸菌群檢測可用無菌采樣袋內(nèi)置培養(yǎng)基直接培養(yǎng)。（）答案：√50.若樣品為罐頭，需先經(jīng)55℃水浴30min后無菌開罐。（）答案：√四、填空題（每空1分，共20分）51.GB4789.32016中，LST肉湯發(fā)酵管倒立________管，以觀察產(chǎn)氣。答案：杜漢氏52.大腸菌群在VRBA上的典型菌落直徑通常大于________mm。答案：0.553.MPN法接種量分別為1mL、0.1mL、0.01mL時，對應稀釋度為________、________、________。答案：10?1、10?2、10?354.若樣品為奶酪，需以無菌刀切取________g加入________mL稀釋液。答案：25，22555.復發(fā)酵證實試驗所用培養(yǎng)基為________肉湯。答案：BGLB56.大腸菌群革蘭染色結(jié)果為________性，形態(tài)為________桿菌。答案：陰，短57.使用自動菌落計數(shù)儀時，需設置________閾值以區(qū)分菌落與氣泡。答案：灰度58.若樣品為速凍水餃，解凍后均質(zhì)時間設定為________s。答案：60–12059.報告MPN結(jié)果時，若所有管均陰性，結(jié)果應表示為________MPN/g。答案：＜360.實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制頻次為每月至少________次。答案：1五、簡答題（每題6分，共30分）61.簡述GB4789.32016第一法（MPN法）檢測步驟。答案：（1）樣品制備：無菌稱取25g樣品加入225mL無菌稀釋液，均質(zhì)；（2）初發(fā)酵：選取3個適宜稀釋度，每個稀釋度接種3管LST肉湯，36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，觀察產(chǎn)氣；（3）復發(fā)酵：將產(chǎn)氣管接種至BGLB肉湯，36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，觀察產(chǎn)氣；（4）結(jié)果查表：根據(jù)陽性管數(shù)查MPN表，計算MPN值；（5）以MPN/g或MPN/mL報告結(jié)果。62.說明VRBA培養(yǎng)基中各主要成分的功能。答案：（1）膽鹽：抑制革蘭陽性菌，提高選擇性；（2）結(jié)晶紫：抑制革蘭陽性菌；（3）中性紅：酸堿指示劑，大腸菌群產(chǎn)酸使菌落呈紅色；（4）乳糖：可發(fā)酵碳源，用于鑒別；（5）蛋白胨：提供氮源及生長因子；（6）瓊脂：凝固劑。63.列舉造成MPN結(jié)果假陽性的常見原因及糾正措施。答案：原因：（1）培養(yǎng)基污染；（2）試管密封不嚴導致外界微生物進入；（3）產(chǎn)氣誤判，如溶解氣體釋放；（4）非目標菌利用乳糖產(chǎn)氣。糾正：（1）空白對照同步；（2）使用新鮮培養(yǎng)基；（3）杜漢氏管排氣徹底；（4）復發(fā)酵證實；（5）革蘭染色鏡檢排除革蘭陽性菌。64.說明大腸菌群平板計數(shù)法選取計數(shù)范圍及計算方法。答案：選取菌落數(shù)在15–150CFU之間的平板，且典型菌落不少于1/5。計算：N=∑C/(n?+0.1n?)d其中∑C為兩個連續(xù)稀釋度典型菌落總數(shù)，n?為第一稀釋度平板數(shù)，n?為第二稀釋度平板數(shù)，d為第一稀釋度。結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。65.簡述分子生物學方法檢測大腸菌群的優(yōu)勢與局限。答案：優(yōu)勢：（1）快速，24h內(nèi)可報告；（2）特異性高，可區(qū)分屬種；（3）可定量（qPCR）；（4）適合復雜樣品。局限：（1）儀器成本高；（2）需專業(yè)操作；（3）不能區(qū)分活/死菌（除非用PMA等前處理）；（4）抑制物可能干擾PCR；（5）標準尚不統(tǒng)一。六、案例分析題（每題10分，共40分）66.某實驗室對即食紫菜進行檢測，取樣25g，均質(zhì)后按GB4789.32016第一法操作，10?1、10?2、10?3稀釋度各接種3管LST，結(jié)果如下：10?1：3/3產(chǎn)氣；10?2：2/3產(chǎn)氣；10?3：0/3產(chǎn)氣。復發(fā)酵：10?13管均陽性；10?22管陽性；10?30管陽性。計算MPN值并報告結(jié)果，同時分析可能污染環(huán)節(jié)。答案：查MPN表320，對應93MPN/100mL，換算為93MPN/g。93MPN/g。污染環(huán)節(jié)：紫菜可能受海水或加工用水污染；包裝車間環(huán)境控制不足；員工手部衛(wèi)生不良；設備清洗消毒不徹底。67.某品牌鮮榨橙汁250mL瓶裝，實驗室采用第二法（平板計數(shù)），10?1平板85CFU，10?2平板12CFU，典型菌落比例80%，復發(fā)酵8/10陽性。計算最終結(jié)果并評價產(chǎn)品是否符合GB71012022對大腸菌