實(shí)驗(yàn)動物血清采集規(guī)范指南血清作為實(shí)驗(yàn)研究中關(guān)鍵的生物樣本，其采集過程的規(guī)范性直接影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性，同時關(guān)系到實(shí)驗(yàn)動物的福利與倫理合規(guī)。本指南結(jié)合實(shí)驗(yàn)動物學(xué)理論與實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，從前期準(zhǔn)備、操作流程、質(zhì)量控制到倫理遵循，系統(tǒng)梳理血清采集的核心要點(diǎn)，為科研工作者提供可落地的實(shí)操參考。一、采集前準(zhǔn)備（一）動物選擇與預(yù)處理實(shí)驗(yàn)動物的品種、健康狀態(tài)及生理周期需與實(shí)驗(yàn)?zāi)康钠ヅ?。采集前禁?-8小時（避免脂血干擾檢測，具體時長依動物種屬調(diào)整，如小鼠禁食4小時、家兔禁食6小時），禁水不超過2小時（防止脫水）。需確認(rèn)動物無感染、外傷，體重符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（如SPF級大鼠體重____g為宜）。（二）器材準(zhǔn)備1.采血器具：根據(jù)動物體型選擇注射器（小鼠用1ml、大鼠用2-5ml、家兔用5-10ml），或微量采血管（適用于眼眶、尾尖采血）；需提前檢查注射器氣密性與針頭鋒利度（避免反復(fù)穿刺致組織損傷）。2.抗凝/促凝工具：若需抗凝血清，選擇對應(yīng)抗凝劑（肝素鈉、EDTA-K?等），按“每毫升血加10-20IU肝素”或“EDTA終濃度0.1-0.2%”配制抗凝管；促凝管需提前激活（37℃預(yù)溫30分鐘）。3.輔助用品：75%醫(yī)用酒精、碘伏、無菌棉球/紗布、止血鉗、體溫計(jì)（監(jiān)測動物應(yīng)激后體溫變化）、動物保定裝置（如小鼠固定筒、家兔保定箱）。（三）環(huán)境與人員準(zhǔn)備操作環(huán)境需安靜、避光，溫度控制在22-25℃（哺乳類動物）、濕度50-60%。操作人員需穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套，提前熟悉動物習(xí)性（如大鼠易受驚，操作需輕柔），多人協(xié)作時明確分工（保定、采血、記錄）。二、常見實(shí)驗(yàn)動物血清采集方法（一）嚙齒類動物（小鼠、大鼠）1.眼眶后靜脈叢采血（少量多次，≤0.5ml/次）操作：動物輕握于掌心，拇指、食指固定頭部（使眼球外突）；取肝素化毛細(xì)管（或微量采血管）從內(nèi)眥沿眶壁向眼球后方向旋轉(zhuǎn)刺入（深度：小鼠2-3mm、大鼠3-5mm），待血液自然流入管內(nèi)后緩慢退出，棉球壓迫止血。注意：避免刺入過深損傷眼球或顱內(nèi)血管，同一動物間隔≥7天，總采血量不超過體重的10%（如20g小鼠單次≤0.2ml）。2.心臟采血（大量采血，需麻醉）定位：大鼠左側(cè)第3-4肋間、胸骨左緣1-2mm處；小鼠第2-3肋間。操作：戊巴比妥鈉腹腔麻醉（劑量：大鼠40mg/kg、小鼠50mg/kg），仰臥固定；75%酒精消毒胸壁，注射器垂直或稍向左傾斜刺入（深度：大鼠2-3cm、小鼠1-2cm），回抽見血后緩慢抽?。ù笫髥未巍?ml、小鼠≤1ml），拔針后棉球壓迫3-5分鐘。3.腹主動脈采血（終末采血，解剖后）操作：麻醉后仰臥，剪開腹部皮膚、肌肉，暴露腹主動脈（腰椎前方、腸系膜上動脈分支處）；用注射器沿血管走向向心端刺入，快速采血（大鼠≤10ml、小鼠≤2ml），適用于病理剖檢時同步采集。（二）家兔1.耳緣靜脈采血（少量，≤5ml/次）操作：耳緣靜脈剪毛（或涂二甲苯擴(kuò)張血管），75%酒精消毒；注射器沿靜脈走向平行刺入（角度15-30°），緩慢抽血，拔針后棉球壓迫止血。注意：避免同一部位反復(fù)穿刺，可交替使用雙耳，間隔≥3天。2.心臟采血（大量，需麻醉）定位：胸骨左緣第3-4肋間、距胸骨約1cm處。操作：戊巴比妥鈉靜脈麻醉（劑量30mg/kg），仰臥保定；注射器垂直刺入（深度2-3cm），回抽見血后采集（單次≤10ml），拔針后壓迫止血5分鐘以上。（三）豚鼠1.心臟采血（常用，需麻醉）定位：胸骨左緣第3肋間、劍突上方2cm處。操作：水合氯醛腹腔麻醉（劑量10%溶液0.5ml/100g），仰臥固定；消毒后注射器垂直刺入（深度1-2cm），回抽見血后采集（單次≤5ml），拔針后壓迫止血。2.腹主動脈采血（終末，解剖后）同大鼠操作，麻醉后解剖暴露腹主動脈，向心端采血（單次≤8ml）。（四）犬、非人靈長類（猴）1.前肢/后肢靜脈采血（少量多次）犬：前肢頭靜脈（腕關(guān)節(jié)上方），剪毛消毒后，注射器沿靜脈走向刺入（角度20-30°），采集（單次≤20ml，總血量≤體重10%）。猴：后肢股靜脈（腹股溝處），助手固定后，消毒皮膚，注射器垂直刺入（深度1-2cm），回抽見血后采集（單次≤15ml）。2.頸靜脈采血（大量，需麻醉）犬：戊巴比妥鈉靜脈麻醉（劑量25mg/kg），側(cè)臥保定，剪毛消毒頸部；注射器沿胸鎖乳突肌內(nèi)側(cè)向心刺入（深度2-3cm），采集（單次≤30ml）。猴：同犬操作，注意避免損傷頸動脈。三、操作規(guī)范與質(zhì)量控制（一）保定與消毒保定需穩(wěn)定且避免過度壓迫（如小鼠固定時勿捏緊胸廓，防止窒息）；消毒范圍直徑≥5cm，酒精待干后采血（避免酒精入血致溶血）。（二）采血技巧進(jìn)針角度：靜脈采血15-30°，心臟采血垂直或稍傾斜；深度以“回抽見血”為度，避免反復(fù)穿刺。血量控制：嚴(yán)格遵循“單次≤體重10%，總采血量≤體重20%”（如200g大鼠單次≤2ml、總≤4ml），防止動物休克。（三）樣本處理抗凝血清：采血后立即顛倒抗凝管5-8次（避免局部凝血），室溫靜置30分鐘后4℃離心（3000rpm，10分鐘）分離血清。促凝血清：采血后室溫靜置1-2小時（或37℃加速凝固），待血塊收縮后離心分離。防溶血：避免注射器內(nèi)氣泡、劇烈振蕩樣本，離心前檢查是否有溶血（血清呈紅色提示溶血，需重新采集）。（四）樣本標(biāo)識與保存標(biāo)簽需標(biāo)注動物編號、種屬、采集時間、抗凝劑類型、實(shí)驗(yàn)分組；血清分離后-20℃短期保存（≤1周）、-80℃長期保存，避免反復(fù)凍融。四、注意事項(xiàng)與應(yīng)急處理（一）動物福利操作前15分鐘可給予鎮(zhèn)靜劑（如氯丙嗪，大鼠5mg/kg腹腔注射）減少應(yīng)激；采血時間≤3分鐘，避免動物長時間掙扎。（二）應(yīng)急處理出血不止：棉球壓迫無效時，用止血鉗夾閉血管（限手術(shù)采血），或局部涂止血粉（如云南白藥）；嚴(yán)重出血需補(bǔ)液（如生理鹽水腹腔注射，大鼠5ml/次）。動物休克：采血后出現(xiàn)呼吸急促、黏膜蒼白，立即停止操作，保暖（紅外燈照射）、腹腔注射生理鹽水（大鼠10ml/次），必要時注射腎上腺素（0.1ml/100g）。（三）重復(fù)采血間隔嚙齒類動物間隔≥7天，家兔、犬間隔≥14天，猴間隔≥21天，確保動物恢復(fù)（可通過體重監(jiān)測：體重回升至采血前水平方可再次采集）。（四）廢棄物處理針頭放入利器盒，血液污染物用含氯消毒劑（1:1000）浸泡30分鐘，動物尸體按生物安全要求冷凍后焚燒或深埋。五、倫理與法規(guī)遵循實(shí)驗(yàn)前需通過機(jī)構(gòu)動物倫理委員會審查（提交方案含采血方法、血量、福利措施），遵循《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》《GB/T____實(shí)驗(yàn)動物福利倫理審查指南》。踐行3R原則：替代（如細(xì)胞模型替代