1四角蛤蜊種質(zhì)本文件給出了四角蛤蜊[Mactraveneriformis]的名稱與分類、主要形態(tài)特征、繁殖生物學(xué)特征、細(xì)胞遺傳學(xué)特性、分子遺傳學(xué)特性、檢測方法和判定規(guī)則。本文件適用于四角蛤蜊的種質(zhì)檢測與鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T18654.2養(yǎng)殖魚類種質(zhì)檢測第二部分：抽樣方法。GB/T32757貝類染色體組型分析3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4名稱與分類4.1學(xué)名四角蛤蜊[Mactraveneriformis(Reeve,1853)]。4.2分類地位蛤蜊屬（Mactra）。5主要形態(tài)特征5.1外部形態(tài)貝殼堅厚，略成四角形；兩殼極膨脹；殼頂突出，位于背緣中央略靠前方，尖端向前彎；小月面及楯面極明顯，呈心形；外韌帶細(xì)薄，不明顯；貝殼具外皮，頂部白色，幼小個體呈淡紫色，近腹緣為黃褐色，腹面邊緣常有1條很窄的邊緣。生長線明顯粗大，形成凹凸不平的同心環(huán)紋；貝殼2片，左右對稱；貝殼內(nèi)面白色，鉸合部寬大，左殼具一個分叉的主齒，右殼具有2個排列成“八”字形的主齒；內(nèi)韌帶發(fā)達(dá)，呈三角形，位于殼頂后方斜三角形韌帶槽內(nèi)。四角蛤蜊的外部形態(tài)見圖1。2圖1四角蛤蜊外部形態(tài)5.2內(nèi)部構(gòu)造由左右外膜附著殼內(nèi)面包圍整個肉體形成外套腔，套膜分邊緣、中央兩部分；邊緣部分肌肉發(fā)達(dá)較肥厚、中央部分薄而透明。外套膜在后端腹側(cè)著，形成兩個水管，水管短而粗，兩個水管緊靠，出水管較入水管細(xì)而短，位于入水管背面；兩水管的末端具有觸手。體中部稍后方左右兩側(cè)有兩個鰓瓣，鰓前方左右各有兩片唇瓣、唇瓣之間為口。外套腔偏前方有一略呈扁形的內(nèi)臟塊，其腹面為呈斧刀狀的足。心臟位于殼頂下方，內(nèi)臟塊背側(cè)偏后，呈梭形帶透明狀。5.3可數(shù)性狀5.3.1貝殼2片，左右對稱。5.3.2外套膜2片，左右兩葉。5.3.3鰓瓣左右各2片。5.3.4左殼具主齒1枚，右殼具主齒2枚。6繁殖生物學(xué)特性6.1性成熟年齡與性腺特征雌雄異體，雌雄性腺肉眼觀察無區(qū)別；首次性成熟年齡為1齡，成熟季節(jié)，雌、雄性生殖腺均為乳6.2性比雌雄性比約為1:1.08，雄性多于雌性。6.3繁殖期周年2次繁殖期。6.4產(chǎn)卵量1齡～2齡四角蛤蜊第一次產(chǎn)卵量為1.3×106?！?.8×109粒。6.5精卵特征沉性卵，卵徑為70μm～80μm。精子分為頭部、中段和尾部三部分。7細(xì)胞遺傳學(xué)特性7.1染色體數(shù)二倍體體細(xì)胞染色體數(shù)：2n=38.7.2核型公式染色體組核型公式：14M+14SM+10ST/T,NF=66。8分子遺傳學(xué)特性8.1線粒體COⅠ基因序列片段（658bp，GeneBank序列號：MN317133）1aactctttattttgttttttcttattgagctggtttagttgggactgcttttagttctat61tattcgtttagaattggctgttcctggtgaaagattgcttgatggtcagctctataattt121ggttgtgacagcacatgctttagttataattttttttttagtaatacctataatgatggg181aggttttggaaactggttagttcctttaatactaaaagttcctgatatgagttttcctcg241tataaacaatattagtttttgacttcttcctgtgtctatgttactgttattcgcttcagc301ttatgttgaaagaggggcaggaactgggtgaactatttatcctcctttatctagccatat361aggtcatcctgggcctgctatggattatgttattttttctcttcatgttggtggtctctc421ttcaattttagcttctattaatttttttactactttcttgagaatgcgtttgaaggtgat481gtctttatatcgtgtcccattattcgtatggtgtattgctgttactaggtttttattaat541agtagctatgcctgttttagctggtgctcttacgatattacttactgatcgtaattttaa601tacttctttttttgacccaaatggaatgggtgacactattttatttgttcatttgttt8.2線粒體16srRNA基因序列片段（306bp，GeneBank序列號：MN317133）1gcaataaattgtcctttaattggggaaatgaatgaaggggttgacgagggggaagctgtc61tttttaatatagtccgaagttttcttttatgtgaaaagacttagattttacaataagaag121agaagaccccggcgagcttgttaaggtttaataacgtttattaattattgatttttgttg181gggcaacgcaaagggaaaaaaactcctttgtattaaataaggatccactcagagtgaatc241aagcaaaagctaccgtggggataacagcgcaattttttcagagagttcatatcgaagaga301aagctt9檢測方法9.1抽樣4參照GB/T18654.2的規(guī)定執(zhí)行。9.2主要形態(tài)構(gòu)造檢測9.2.1外部形態(tài)光線充足時，肉眼觀察。9.2.2可量性狀殼高和殼長按照定義描述用游標(biāo)卡尺測量。9.2.3內(nèi)部構(gòu)造光線充足時，解剖后用解剖鏡或肉眼觀察。9.3細(xì)胞遺傳學(xué)檢測9.3.1抽樣參照GB/T18654.2的規(guī)定執(zhí)行。9.3.2染色體和核型9.3.2.1染色體標(biāo)本制備參照GB/T32757的規(guī)定執(zhí)行。9.3.2.2核型分析觀察100個左右的分散良好的中期分裂相，記數(shù)確定二倍體數(shù)。從中挑選10個分散良好、形態(tài)清晰的中期分裂相進(jìn)行顯微攝影、放大、測量，按GB/T32757的分類標(biāo)準(zhǔn)對染色體分類。9.4分子遺傳學(xué)檢測9.4.1DNA提取取斧足肌肉30mg，剪碎至糜狀，DNA提取試劑盒或常規(guī)酚-氯仿方法提取總DNA,滅菌雙蒸水溶解備9.4.2引物序列COⅠ：LCO1490：5,-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3,，HCO2198：5,-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3,；16SrRNA：16S3L：5,-TGAGCGTGCTAAGGTAGC-3,，16S4H：5,-AGCCAACATCGAGGTCGC-3,。9.4.3PCR反應(yīng)體系DNA模板50ng～100ng、10×Buffer（500mmol/LKCl；100mmol/LTris-HCl，pH8.3；15mmol/L9.4.4PCR反應(yīng)程序59.4.4.1COⅠ基因PCR反應(yīng)程序反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，45℃退火40s，72℃延伸1min，循環(huán)35次；72℃延伸10min。每組PCR均設(shè)陰性對照來檢測是否污染。9.4.4.216SrRNA基因PCR反應(yīng)程序反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，50℃退火30s，72℃延伸40s，循環(huán)35次；72℃延伸5min。每組PCR均設(shè)陰性對照來檢測是否污染。9.4.5測序產(chǎn)物直接測序，為了保證