(19)中華人民共和國國家知識產(chǎn)權(quán)局(72)發(fā)明人王齊劉春俠楊俊李曉蕾G01N21/64(2006.01)基于銀納米共振瑞利散射光譜法測定大麻本發(fā)明公開了一種基于銀納米共振瑞利散法步驟為：于比色管中依次加入聚乙二醇溶液、再加入大麻二酚溶液，定容混勻后于水浴中反21.基于銀納米共振瑞利散射光譜法測定工業(yè)提取大麻二酚含量的方法，包括如下步(1)制備大麻二酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液體系：于10mL比色管中，依次加入1.0mL質(zhì)量百分比為0.1~1.0%的聚乙二醇溶液，1.0mL0.1～1.0g/L的硝酸銀溶液，0.5mL0.1～1.0g/L的氫氧化鈉溶液，0.5mL質(zhì)量百分比為0.1～1.0%的氨水溶液，混勻后再加入1.0mL0.001～0.020mg/mL的大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水定容混勻后于50℃水浴中反應(yīng)40min;(2)按照步驟(1)的方法制備不加大麻二酚的空白對照體系；(3)取標(biāo)準(zhǔn)溶液體系和空白對照體系的溶液分別置于石英比色皿中，在熒光分光光度計上，以激發(fā)光波長與發(fā)射光波長一致并同步掃描獲得共振瑞利散射法光譜，測定450nm處標(biāo)準(zhǔn)溶液的散射峰強(qiáng)度為I,同時測定空白對照體系的散射峰強(qiáng)度Io,計算△I=I-Io;(4)以△I對大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度關(guān)系作標(biāo)準(zhǔn)曲線；(5)取mmg工業(yè)提取大麻二酚樣品用分析純乙醇溶解定容于VmL容量瓶，按照步驟(1)的方法制備待測樣品溶液，其中加入的大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液替換為樣品溶液，并按步驟(3)的方法測定樣品溶液的共振瑞利散射峰強(qiáng)度I樣；(6)根據(jù)步驟(4)的工作曲線，計算出樣品溶液中大麻二酚的濃度C樣，通過公式：含量3技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及基于銀納米共振瑞利散射光譜法測定工業(yè)提取大麻二酚含量的方法。背景技術(shù)[0002]大麻二酚是一種從工業(yè)大麻中提取分離鑒別的非成癮性生物組分，現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究表明，其能阻礙大麻中成癮性組分四氫大麻酚對人體神經(jīng)系統(tǒng)影響，并具有抗痙攣、抗[0003]對大麻二酚含量的測定方法中現(xiàn)報道的有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)、氣相色譜(GC-FID)、高效用到色譜方法進(jìn)行分離后測定，方法繁瑣，儀器設(shè)備硬件條件要求高。[0004]對工業(yè)高純度提取物中大麻二酚含量的測定需要快速、簡便、準(zhǔn)備的檢測方法，為此有必須尋找操作簡單，準(zhǔn)確快速可行的方法。發(fā)明內(nèi)容[0005]本發(fā)明目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種方法簡單、準(zhǔn)確性高、易操作的基于共振瑞利散射光譜法測定大麻二酚含量的方法。該方法具有靈敏度高、選擇性好、方法簡便快捷、成本低廉等有點(diǎn)，在工業(yè)高純度提取物中大麻二酚含量的測定中有良好的應(yīng)用前[0006]實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是：[0007]基于銀納米共振瑞利散射光譜法測定工業(yè)提取大麻二酚含量的方法，包括如下步[0008](1)制備大麻二酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液體系：于10mL比色管中，依次加入1.0mL質(zhì)量百分比為0.1～1.0%的聚乙二醇溶液，1.0mL0.1～1.0g/L的硝酸銀溶液，0.5mL0.1～1.0g/L的氫氧化鈉溶液和0.5mL質(zhì)量百分比為0.1～1.0%的氨水溶液，混勻后再加入1.0mL0.001~0.020mg/mL的大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水定容混勻后于50～90℃水浴中反應(yīng)40min;[0009](2)按照步驟(1)的方法制備不加大麻二酚的空白對照體系；[0010](3)取標(biāo)準(zhǔn)溶液體系和空白對照體系的溶液分別置于石英比色皿中，在熒光分光光度計上，以激發(fā)光波長與發(fā)射光波長一致并同步掃描獲得共振瑞利散射法光譜，測定450nm處標(biāo)準(zhǔn)溶液的散射峰強(qiáng)度為I,同時測定空白對照體系的散射峰強(qiáng)度Io,計算△I=I-Io;[0011](4)以△I對大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度關(guān)系作標(biāo)準(zhǔn)曲線；[0012](5)取mmg工業(yè)提取大麻二酚樣品用分析純乙醇溶解定容于VmL容量瓶，按照步驟(1)的方法制備待測樣品溶液，其中加入的大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液替換為樣品溶液，并按步驟(3)的方法測定樣品溶液的共振瑞利散射峰強(qiáng)度I樣；[0013](6)根據(jù)步驟(4)的工作曲線，計算出樣品溶液中大麻二酚的濃度C樣，通過公式：4含量(%)=C×V÷m×100,可計算出提取物中大麻二酚含量。[0014]原理：在本發(fā)明的條件下，大麻二酚中酚羥基在堿性條件下轉(zhuǎn)化為醌從而有還原性，這種還原性能夠?qū)y氨溶液中的銀離子還原為銀納米微粒，從而在310～650nm出現(xiàn)特征共振瑞利散射光譜，且隨著大麻二酚濃度的增加而散射峰線性增加。采用熒光分光光度計對該反應(yīng)得到的溶液進(jìn)行吸收掃描得到共振瑞利散射光譜，依照共振瑞利散射光譜峰值與大麻二酚濃度的線性關(guān)系，快速測定工業(yè)高純度提取物中大麻二酚含量。[0015]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：與已有的方法相比，本測定方法儀器要求簡單，操作簡便，試劑附圖說明[0016]圖1為實施例1中大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液體系的共振瑞利散射光譜圖；[0017]圖2為實施例1中大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液體系的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；[0018]圖3為實施例1中0.012mg/mL大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)生成的銀納米微粒的透射電具體實施方式[0019]以下通過實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為本發(fā)明的限制。[0021]基于銀納米共振瑞利散射光譜法測定提取物中大麻二酚含量的方法，包括如下步[0022](1)大麻二酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液體系制備：取6支10mL比色管，每支比色管中均依次加入氧化鈉溶液和0.5mL質(zhì)量百分比為0.1%的氨水溶液，分別搖勻，再向6支比色管中分別加入1.0mL濃度不同的大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，每支比色管中所加大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為0.002、0.004、0.006、0.008、0.010、0.012mg/mL,用蒸餾水定40min(0.012mg/mL大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)生成的銀納米微粒的透射電鏡圖如圖3所示);[0023](2)按照步驟(1)的方法制備不加大麻二酚的空白對照體系；[0024](3)取標(biāo)準(zhǔn)溶液體系和空白對照體系的溶液分別置于石英比色皿中，在熒光分光光度計上，以激發(fā)光波長與發(fā)射光波長一致并同步掃描獲得共振瑞利散射光譜(標(biāo)準(zhǔn)溶液體系的共振瑞利散射光譜圖如圖1所示),測定450nm處標(biāo)準(zhǔn)溶液的散射峰強(qiáng)度為I,同時測定空白對照體系的散射峰強(qiáng)度Io,計算△I=I-Io;[0025](4)以△I對大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度關(guān)系作標(biāo)準(zhǔn)曲線：△I=130713C-70.907(R2=0.9970),大麻二酚濃度C的單位為mg/mL,線性范圍為0.002～0.012mg/mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如圖2所示；[0026](5)取5.0mg工業(yè)提取大麻二酚樣品用分析純乙醇溶解定容于500mL容量瓶制得大麻二酚樣品乙醇溶液，取10mL比色管，依次加入1.0mL質(zhì)量百分比為0.1%的聚乙二醇溶液、1.0mL0.1g/L的硝酸銀溶液、0.5mL0.1g/L的氫氧化鈉溶液、0.5mL質(zhì)量百分比為0.1%的氨水溶液和1.0mL大麻二酚樣品乙醇溶液，用蒸餾水定容混勻后，于50℃水浴中反應(yīng)40min,制5得待測的樣品溶液，按步驟(3)的方法測定樣品溶液的共振瑞利散射峰強(qiáng)度I樣=1122.5;[0027](6)根據(jù)步驟(4)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品溶液中大麻二酚的濃度C樣=0.00913mg/mL,通過公式：含量(%)=C.×500÷5.0×100,可計算出提取物中大麻二酚含量為91.3%,6個平行樣品的RSD(n=6)為7.2%。[0028]實施例2[0029]基于銀納米共振瑞利散射光譜法測定提取物中大麻二酚含量的方法，包括如下步[0030](1)大麻二酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液體系制備：取8支10mL比色管，每支比色管中均依次加入氧化鈉溶液和0.5mL質(zhì)量百分比為1.0%的氨水溶液，分別搖勻，再向8支比色管中分別加入1.0mL濃度不同的大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，每支比色管中所加大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為℃水浴中反應(yīng)40min;[0031](2)按照步驟(1)的方法制備不加大麻二酚的空白對照體系；[0032](3)取標(biāo)準(zhǔn)溶液體系和空白對照體系的溶液分別置于石英比色皿中，在熒光分光光度計上，以激發(fā)光波長與發(fā)射光波長一致并同步掃描獲得共振瑞利散射光譜，測定450nm處標(biāo)準(zhǔn)溶液的散射峰強(qiáng)度為I,同時測定空白對照體系的散射峰強(qiáng)度Io,計算△I=I-Io;[0033](4)以△I對大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度關(guān)系作標(biāo)準(zhǔn)曲線：△I=115231C-40.574(R2=0.9943),大麻二酚濃度C的單位為mg/mL,線性范圍為0.002～0.016mg/mL;[0034](5)取2.0mg工業(yè)提取大麻二酚樣品用分析純乙醇溶解定容于200mL容量瓶制得大麻二酚樣品乙醇溶液，取10mL比色管，依次加入1.0mL質(zhì)量百分比為1.0%的聚乙二醇溶液、1.0mL1.0g/L的硝酸銀溶液、0.5mL1.0g/L的氫氧化鈉溶液、0.5mL質(zhì)量百分比為1.0%的氨水溶液和1.0mL大麻二酚樣品乙醇溶液，用蒸餾水定容混勻后，于90℃水浴中反應(yīng)40min,制得待測的樣品溶液，按步驟(3)的方法測定樣品溶液的共振瑞利散射峰強(qiáng)度I樣=934.3;[0035](6)根據(jù)步驟(4)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品溶液中大麻二酚的濃度C樣=0.00846mg/mL,通過公式：含量(%)=C4×200÷2.0×100,可計算出提取物中大麻二酚含量為84.6%,6個平行樣品的RSD(n=6)為6.2%。[0036](7)用步驟(5)制備的樣品溶液為樣本，制備濃度為0.0115mg/mL的回收率考察溶液，計算回收率為89.1%,RSD(n=6)為7.5%。[0037]實施例3[0038]基于銀納米共振瑞利散射光譜法測定提取物中大麻二酚含量的方法，包括如下步[0039](1)大麻二酚的分析體系制備：取10支10mL比色管，每支比色管中均依次加入氧化鈉溶液和0.5mL質(zhì)量百分比為0.8%的氨水溶液，分別搖勻，再向10支比色管中分別加入1.0mL濃度不同的大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，每支比色管中所加大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度分別為6[0040](2)按照步驟(1)的方法制備不加大麻二酚的空白對照體系；[0041](3)取標(biāo)準(zhǔn)溶液體系和空白對照體系的溶液分別置于石英比色皿中，在熒光分光光度計上，以激發(fā)光波長與發(fā)射光波長一致并同步掃描獲得共振瑞利散射光譜，測定450nm處標(biāo)準(zhǔn)溶液的散射峰強(qiáng)度為I,同時測定空白對照體系的散射峰強(qiáng)度Io,計算△I=I-Io;[0042](4)以△I對大麻二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度關(guān)系作標(biāo)準(zhǔn)曲線：△I=157283C-105.554(R2=0.9914),大麻二酚濃度C的單位為mg/mL,線性范圍為0.002～0.020mg/mL;[0043](5)取5.0mg工業(yè)提取大麻二酚樣品用分析純乙醇溶解定容于500mL容量瓶制得大麻二酚樣品乙醇溶液，取10mL比色管，依次加入1.0mL質(zhì)量百分比為0.2%的聚乙二醇溶液、1.0mL0.5g/L的硝酸銀溶液、0.5mL0.7g/L的氫氧化鈉溶液、0.5mL質(zhì)量百分比為0.8%的氨水溶液和1.0mL大麻二酚樣品乙醇溶液，用蒸餾水定容混勻后，于70℃水浴中反應(yīng)40min,制得待測的樣品溶液，按步驟(3)的方法測定樣品溶液的共振瑞利散射峰強(qiáng)度I樣=1310.0;[0044](6)根據(jù)步驟(4)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品溶液中大麻二酚的濃度C樣=0.0090mg/mL,通過公式：含量(