ICS67.080.20DB14山西省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB14/T1774—2019前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14設施和用具 15人員要求 26菌液制備 27蠶蛹選擇與準備 28蠶蛹接種 29接種后管理 2 3 3DB14/T1774—2019本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由山西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實施。本標準由山西省農(nóng)業(yè)標準化技術(shù)委員會歸口。本標準起草單位：山西省蠶業(yè)科學研究院。本標準主要起草人：盧建珍、韓紅發(fā)、王玉玨、王建偉、劉有志、韓淑鴻、張超虹、杜利梅、黃凡哲、沈琦、李淑芳、景雅蘭、靳月琴、韓敏、張娟、毛鈴哲。DB14/T1774—20191斜面菌種培育桑蠶蛹蟲草技術(shù)規(guī)程本標準規(guī)定了斜面菌種培育桑蠶蛹蟲草培育技術(shù)的設施和用具、人員要求、菌液制備、蠶蛹選擇與準備、蠶蛹接種、接種后管理、采收、烘干和分級包裝。本標準適用于斜面菌種培育桑蠶人工蛹蟲草。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T12728食用菌術(shù)語NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY/T5010無公害農(nóng)產(chǎn)品種植業(yè)產(chǎn)地環(huán)境條件NY/T2798.5無公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)量安全控制技術(shù)規(guī)范第5部分：食用菌中華人民共和國食品安全法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1桑蠶蛹蟲草桑蠶蛹蟲草是蛹蟲草中的一種，是人工將蟲草菌種接種到鮮活桑蠶蛹體內(nèi)培育而成。4設施和用具4.1設施應選擇生態(tài)環(huán)境良好、無污染的生產(chǎn)區(qū)域，培養(yǎng)設施干凈、整潔、無雜菌污染。桑蠶蛹蟲草的設施及潔凈程度應符合NY/T5010和NY/T2798.5的規(guī)定。4.2接種針蠶蛹接種針使用注射量程為5μL～10μL的尖頭微量移液器。4.3培養(yǎng)器具接種后存放蠶蛹及后期進行菌絲培育和子實體培養(yǎng)的器具。DB14/T1774—201925人員要求5.1接種前工作人員應經(jīng)過專業(yè)技術(shù)培訓。5.2工作人員應配備專用、提前消毒的工作服。5.3接種前，工作人員應用酒精消毒雙手，佩戴口罩。6菌液制備6.1菌種選用抗逆性強、出草快的優(yōu)良菌株。6.2PDA培養(yǎng)基制備取去掉外皮的小塊土豆200g，加水煮25min，過濾后取澄清液加水至1000mL，依次放入瓊脂20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、VB10.05g、檸檬酸三銨1g，充分攪拌，溶化后裝入1.8cm×18cm試管，裝管量約1/5～1/4（10mL）處，加蓋棉塞，高壓121℃滅菌30min，趁培養(yǎng)基還是液體狀態(tài)時，擺成斜面凝固后制成斜面培養(yǎng)基，用于菌種活化和母種擴繁。6.3菌種活化和擴繁母種在無菌條件下接入斜面培養(yǎng)基，在23℃恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，待菌絲布滿整個培養(yǎng)基表面后給以散射光光照，直至菌絲呈現(xiàn)淡黃色，保存?zhèn)溆谩?.4菌種液制作無菌條件下，用無菌鏟刮下經(jīng)擴繁后的1支試管菌種斜面上的菌苔，放入研磨缽內(nèi)，加無菌生理水或無菌水10mL均勻研磨，直至研磨缽內(nèi)菌絲分布均勻，液體混濁，制備成菌懸液。7蠶蛹選擇與準備7.1選擇25℃保護，上簇后7d左右、大小均勻的健康桑蠶蛹。7.2接種前用75%的食用酒精均勻噴灑蛹體，保持蛹體體表濕潤，均勻消毒后，用無菌水清洗蛹體，在超凈工作臺內(nèi)晾干。8蠶蛹接種無菌條件下用10μL微量移液器吸取6μL～7μL接種液，在蛹腹面倒數(shù)第二腹節(jié)間膜處，用尖頭微量移液器平行扎入蛹體注射，針頭旋轉(zhuǎn)拔出，接種后的蠶蛹消毒后單層擺放平鋪于培養(yǎng)器中，封口膜封口，送入培養(yǎng)室。9接種后管理9.1發(fā)菌培養(yǎng)期9.1.1溫度DB14/T1774—20193前期溫度18℃,蛹體變硬出現(xiàn)白色絨毛狀菌絲時室溫保持22℃~23℃繼續(xù)培養(yǎng)1～2d。9.1.2濕度室內(nèi)濕度保持在65%～70%左右。9.1.3光線保持黑暗，蠶蛹感染菌液7～10d后硬化，13d左右在蠶蛹體側(cè)氣門處出現(xiàn)白色菌絲。9.2轉(zhuǎn)色培養(yǎng)期每天感光12h左右，白天自然光，陰天或傍晚補充日光燈照射，光照強度100lex～200lex，晚上保持黑暗；白天室內(nèi)溫度保持在21℃~23℃,夜晚15℃~16℃;室內(nèi)相對濕度75%；3d后菌絲變成淡黃色，7～10d后，蛹體表面菌絲體變成桔黃色，并且菌蕾原基顯現(xiàn)。9.3出草管理期9.3.1溫度溫度控制在20℃~23℃。9.3.2濕度室內(nèi)相對濕度80%～85%。9.3.3光照光照時間12h/d，光照強度200lex。子實體形成后及時調(diào)整培養(yǎng)瓶與光的方向。9.3.4氧氣封口膜上扎孔給子實體補充氧氣,培養(yǎng)10d左右子實體達到3cm，每天開窗換氣2次，每次30min。子實體培養(yǎng)至40d左右，長至5cm～8