淀粉酶產(chǎn)生菌的分離第四小組淀粉酶：是指一類能催化分解淀粉分子中糖苷鍵的酶的總稱，主要包括α－淀粉酶和β-淀粉酶等，α-淀粉酶可從淀粉分子內(nèi)部切斷淀粉的α-1,4糖苷鍵，形成麥芽糖、含有6個(gè)葡萄糖單位的寡糖和帶有支鏈的寡糖，是淀粉的粘度下降，因此又稱為液化型淀粉酶。淀粉遇碘呈藍(lán)色。這種淀粉-碘復(fù)合物在660nm處有較大的吸收峰，可用分光光度計(jì)測定。隨著酶的不斷分作用，淀粉長鏈被切斷，生成小分子的糊精，使其對碘的藍(lán)色反應(yīng)逐漸消失，因此可以根據(jù)一定時(shí)間內(nèi)藍(lán)色消失的程度為指標(biāo)來測定α-淀粉酶的活力。實(shí)驗(yàn)原理：土壤中含有大量的微生物，將土壤稀釋液涂在不同類型的培養(yǎng)基上，在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)幾天，細(xì)菌或者是其他的微生物便能在平板上生長繁殖，形成菌落。將初次篩選得到的微生物接到淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)，因?yàn)橹挥心軌虍a(chǎn)生淀粉酶的細(xì)菌才能夠利用培養(yǎng)基中的淀粉成分來完成自身的生命活動，才能夠生存。故在淀粉培養(yǎng)基上長出的菌便是淀粉產(chǎn)生菌。在培養(yǎng)基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不顯現(xiàn)藍(lán)色，出現(xiàn)透明圈，可以通過透明圈的大小來初步判斷菌

種產(chǎn)淀粉的能力。實(shí)驗(yàn)器材料及試劑：

材料：河南科技學(xué)院花園土壤。

培養(yǎng)基：

（1）分離培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl

5g、溶于1000mL蒸餾水中，再加入15g瓊脂粉，pH調(diào)至7.2，121℃滅菌15min，待冷卻至50℃左右時(shí)，于超凈工作臺倒平板）

（2）篩選培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基（可溶性淀粉

20g,

硝酸鉀

1g,

磷酸氫二鉀

0.5g,

氯化鈉

0.5g,

硫酸鎂

0.5g,

硫酸亞鐵

0.01g,

瓊脂

20g,

水

1000毫升，調(diào)整pH值到7.2～7.4。）

（3）搖瓶培養(yǎng)：淀粉培養(yǎng)液。試劑：碘液、2%可溶性淀粉、pH6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、標(biāo)準(zhǔn)糊精溶液、0.5mol/L乙酸、0.85%生理鹽水。

4、器材：

培養(yǎng)皿、錐形瓶、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)。

器材：

培養(yǎng)皿、錐形瓶、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)。實(shí)驗(yàn)步驟：

淀粉產(chǎn)生菌的篩選：

（1）采集土樣，并用無菌水稀釋成菌懸液；

（2）配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基及淀粉培養(yǎng)基，倒平板備用；

（3）將制好的菌懸液與超凈工作臺上涂到牛肉膏蛋白胨平板上，于37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一天；

（4）挑取整個(gè)菌落，將其移入淀粉培養(yǎng)基中，繼續(xù)放在37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩天；

（5）將碘液滴在平板上，觀察透明圈的大小。酶活力測定：

（1）選產(chǎn)生透明圈最大的菌株進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，將菌溶于5ml無菌生理鹽水中，吸取此培養(yǎng)液加入淀粉培養(yǎng)液中，30攝氏度搖瓶培養(yǎng)72h。

（2）酶液稀釋：

取發(fā)酵液進(jìn)行4000r/min離心5min，取上清液，用緩沖液適當(dāng)稀釋。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：

準(zhǔn)備七支試管，按照下表配置混合液。使用分光光度計(jì)策規(guī)定各管溶液在660nm下的OD值。然后以淀粉濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

管號1234567淀粉稀釋液/ml2(0%)2(0.2%)2(0.5%)2(1.0%)2(1.5%)2(2.0%)2(2.0%)緩沖液/ml111111140攝氏度水浴保溫5min蒸餾水/ml1111110粗酶液/ml000000140攝氏度水浴保溫30min，然后放入沸水浴5min稀碘液/ml1111111（4）酶活力測定取稀釋的粗酶液也按照下表中七號管的要求配置混合液，測得吸光度后，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的淀粉濃度，求出被酶消耗的淀粉量。