演講人：日期:檢驗(yàn)科血液常規(guī)檢驗(yàn)操作指南目錄CATALOGUE01檢驗(yàn)前準(zhǔn)備02樣本處理流程03檢測(cè)項(xiàng)目操作04質(zhì)量控制要點(diǎn)05結(jié)果審核與報(bào)告06后續(xù)處理規(guī)范PART01檢驗(yàn)前準(zhǔn)備樣本接收與信息核對(duì)樣本完整性檢查檢驗(yàn)項(xiàng)目確認(rèn)患者信息匹配核對(duì)樣本管標(biāo)簽是否清晰、無(wú)破損，確認(rèn)樣本量充足且無(wú)溶血、凝塊或脂血等異常情況，避免影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。嚴(yán)格核對(duì)申請(qǐng)單與樣本管上的患者姓名、性別、年齡、唯一標(biāo)識(shí)碼等信息，確保數(shù)據(jù)一致，防止樣本混淆或誤檢。根據(jù)臨床申請(qǐng)單核對(duì)檢驗(yàn)項(xiàng)目是否與樣本類(lèi)型匹配（如EDTA抗凝血用于血常規(guī)），避免因樣本類(lèi)型錯(cuò)誤導(dǎo)致檢測(cè)失敗。儀器開(kāi)機(jī)與狀態(tài)確認(rèn)儀器啟動(dòng)與自檢按標(biāo)準(zhǔn)流程啟動(dòng)全自動(dòng)血液分析儀，觀(guān)察儀器自檢程序是否通過(guò)，檢查各模塊（如進(jìn)樣針、混勻裝置、檢測(cè)通道）運(yùn)行狀態(tài)是否正常。背景計(jì)數(shù)與空白測(cè)試執(zhí)行儀器背景計(jì)數(shù)檢測(cè)，確保白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板等參數(shù)的本底值符合廠(chǎng)商規(guī)定的閾值范圍，避免污染干擾。質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)審核運(yùn)行當(dāng)日質(zhì)控品，比對(duì)質(zhì)控結(jié)果與預(yù)設(shè)靶值及允許偏差范圍，確認(rèn)儀器性能穩(wěn)定后方可進(jìn)行樣本檢測(cè)。試劑有效期與庫(kù)存確認(rèn)采樣針、反應(yīng)杯、廢液袋等耗材充足且無(wú)污染，檢查廢液桶容量是否滿(mǎn)足當(dāng)日檢測(cè)需求，防止檢測(cè)過(guò)程中斷。耗材完備性校準(zhǔn)品與質(zhì)控品準(zhǔn)備根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目要求準(zhǔn)備相應(yīng)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，確保其儲(chǔ)存條件符合要求（如避光、低溫），并記錄批號(hào)及開(kāi)瓶日期。檢查溶血?jiǎng)?、稀釋液、染色液等試劑的有效期及剩余量，確保試劑無(wú)沉淀、變色或污染，避免因試劑變質(zhì)導(dǎo)致檢測(cè)偏差。試劑耗材準(zhǔn)備檢查PART02樣本處理流程抗凝劑比例標(biāo)準(zhǔn)化EDTA抗凝劑使用規(guī)范抗凝管質(zhì)量驗(yàn)證肝素抗凝的適用場(chǎng)景血液常規(guī)檢驗(yàn)需采用EDTA-K2或EDTA-K3作為抗凝劑，嚴(yán)格按1.5-2.2mg/mL血液的比例添加，避免過(guò)量導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變或不足引起樣本凝固。對(duì)于特殊檢測(cè)項(xiàng)目（如血?dú)夥治觯?，需使用肝素鈉或肝素鋰抗凝，比例控制在15-30IU/mL血液，確保抗凝效果的同時(shí)不影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。每批次抗凝管需進(jìn)行空白對(duì)照試驗(yàn)，驗(yàn)證抗凝劑濃度及管壁涂層均勻性，避免因生產(chǎn)差異導(dǎo)致樣本質(zhì)量波動(dòng)。01混勻手法與次數(shù)采集后需立即輕柔顛倒混勻8-10次，避免劇烈震蕩導(dǎo)致溶血，確?？鼓齽┡c血液充分接觸。樣本混勻操作規(guī)范02靜置時(shí)間控制混勻后樣本需靜置5分鐘再檢測(cè)，使抗凝劑完全溶解，但不得超過(guò)4小時(shí)，以防細(xì)胞代謝影響結(jié)果。03自動(dòng)化混勻設(shè)備校準(zhǔn)使用機(jī)械混勻儀時(shí)，需定期校準(zhǔn)轉(zhuǎn)速（15-20rpm）和時(shí)間（5分鐘），并記錄設(shè)備運(yùn)行參數(shù)以備追溯。推片與染色標(biāo)準(zhǔn)化推片角度與速度載玻片與推片夾角保持30°-45°，勻速推動(dòng)形成血膜，確保厚度均勻且尾部分布適宜顯微鏡觀(guān)察。瑞氏-吉姆薩染色流程染色液需現(xiàn)配現(xiàn)用（pH6.4-6.8），先滴加瑞氏染液1分鐘，再緩沖液稀釋后吉姆薩染液復(fù)染10分鐘，避免染色過(guò)深或偏色。染色質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)每批次染色需同步制備質(zhì)控片，鏡檢確認(rèn)中性粒細(xì)胞分葉核清晰、紅細(xì)胞無(wú)染料沉淀，染色不合格需重新制片。PART03檢測(cè)項(xiàng)目操作血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀操作儀器校準(zhǔn)與質(zhì)控每日開(kāi)機(jī)后需執(zhí)行校準(zhǔn)程序，使用配套質(zhì)控品驗(yàn)證儀器精密度和準(zhǔn)確性，確保白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血小板（PLT）等參數(shù)檢測(cè)結(jié)果在允許誤差范圍內(nèi)。樣本預(yù)處理與上機(jī)檢測(cè)采集EDTA抗凝靜脈血后輕柔混勻8-10次，避免凝血或溶血，將樣本置于進(jìn)樣架，選擇全血模式啟動(dòng)檢測(cè)，注意觀(guān)察儀器報(bào)警提示（如凝塊、異常細(xì)胞等）。結(jié)果審核與異常處理核對(duì)儀器報(bào)告的直方圖和散點(diǎn)圖，識(shí)別異常細(xì)胞分布（如紅細(xì)胞碎片、血小板聚集），必要時(shí)手動(dòng)復(fù)檢或推片染色鏡檢。氰化高鐵血紅蛋白法每批次檢測(cè)需包含高、低值質(zhì)控品，吸光度讀數(shù)需在0.2-0.8線(xiàn)性范圍內(nèi)，若樣本存在脂血或高膽紅素需采用空白校正。質(zhì)量控制要點(diǎn)臨床意義解讀成年男性參考值120-160g/L，女性110-150g/L，低于下限提示貧血，高于上限需排查真性紅細(xì)胞增多癥或脫水狀態(tài)。取20μl全血加入5ml轉(zhuǎn)化液（含氰化鉀、鐵氰化鉀），混勻靜置5分鐘使血紅蛋白完全轉(zhuǎn)化為氰化高鐵血紅蛋白，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算濃度。血紅蛋白測(cè)定步驟推片制備與染色取3-5μl全血于載玻片一端，以30°角推片形成頭體尾三部分，瑞氏-吉姆薩染色5-10分鐘，流水沖洗后晾干，要求紅細(xì)胞均勻分布且無(wú)染色沉淀。血涂片鏡檢規(guī)程顯微鏡檢查流程先用低倍鏡（10×）觀(guān)察全片細(xì)胞分布及染色質(zhì)量，轉(zhuǎn)油鏡（100×）分類(lèi)計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，記錄中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等比例，同時(shí)評(píng)估紅細(xì)胞形態(tài)（如大小不均、靶形紅細(xì)胞）和血小板聚集情況。異常結(jié)果報(bào)告發(fā)現(xiàn)幼稚細(xì)胞、瘧原蟲(chóng)、異常淋巴細(xì)胞等需標(biāo)注并通知臨床，紅細(xì)胞緡錢(qián)狀排列提示多發(fā)性骨髓瘤可能，需結(jié)合其他檢查綜合判斷。PART04質(zhì)量控制要點(diǎn)每日室內(nèi)質(zhì)控執(zhí)行質(zhì)控品選擇與處理使用與患者樣本同批號(hào)的質(zhì)控品，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求復(fù)溶、分裝和保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致質(zhì)控值漂移。質(zhì)控品應(yīng)涵蓋高、中、低三個(gè)濃度水平，確保檢測(cè)系統(tǒng)的線(xiàn)性范圍覆蓋臨床常見(jiàn)結(jié)果區(qū)間。030201質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)記錄與分析每日檢測(cè)前、中、后均需運(yùn)行質(zhì)控，記錄檢測(cè)結(jié)果并繪制Levey-Jennings質(zhì)控圖。采用Westgard多規(guī)則（如1-3s、2-2s等）判斷是否失控，對(duì)連續(xù)6次同側(cè)趨勢(shì)或周期性波動(dòng)需啟動(dòng)系統(tǒng)性誤差排查。失控處理流程若質(zhì)控結(jié)果超出允許范圍，立即暫停患者樣本檢測(cè)，檢查試劑有效期、儀器狀態(tài)、環(huán)境溫濕度等因素，必要時(shí)更換試劑或執(zhí)行儀器維護(hù)。糾正后重新運(yùn)行質(zhì)控，確認(rèn)在控后方可繼續(xù)檢測(cè)。當(dāng)白細(xì)胞計(jì)數(shù)低于參考范圍下限或高于上限時(shí)，需推片鏡檢確認(rèn)是否存在異常細(xì)胞或血小板聚集干擾。血紅蛋白與紅細(xì)胞壓積結(jié)果矛盾時(shí)，應(yīng)檢查樣本有無(wú)溶血或脂血干擾，必要時(shí)重新采集樣本。異常結(jié)果復(fù)檢規(guī)則血細(xì)胞計(jì)數(shù)復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)若血小板計(jì)數(shù)低于臨界值，需采用枸櫞酸鈉抗凝管復(fù)測(cè)，排除EDTA依賴(lài)性假性血小板減少。同時(shí)鏡檢觀(guān)察血小板聚集情況，并記錄復(fù)檢方法與結(jié)果差異。血小板假性減少處理所有復(fù)檢結(jié)果需在報(bào)告中注明“復(fù)檢確認(rèn)”，并附原始結(jié)果供臨床參考。復(fù)檢過(guò)程需詳細(xì)記錄于實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)中，包括復(fù)檢原因、方法、操作人員及最終審核意見(jiàn)。復(fù)檢結(jié)果報(bào)告規(guī)范儀器維護(hù)校準(zhǔn)記錄每日維護(hù)內(nèi)容執(zhí)行開(kāi)機(jī)自檢與本底測(cè)試，清潔進(jìn)樣針、混勻裝置及計(jì)數(shù)池，檢查廢液管路是否通暢。記錄試劑余量、壓力及溫度參數(shù)，確保鞘液、溶血?jiǎng)┑汝P(guān)鍵試劑供應(yīng)穩(wěn)定。定期校準(zhǔn)與驗(yàn)證每月使用標(biāo)準(zhǔn)微粒或新鮮全血校準(zhǔn)儀器，驗(yàn)證白細(xì)胞三分群、血紅蛋白吸光度等關(guān)鍵參數(shù)。校準(zhǔn)后需運(yùn)行質(zhì)控品確認(rèn)性能，校準(zhǔn)系數(shù)變更需經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主管審核并歸檔。故障維修與追蹤儀器報(bào)錯(cuò)時(shí)立即停用并粘貼標(biāo)識(shí)，聯(lián)系工程師排查硬件或軟件問(wèn)題。維修后需執(zhí)行性能驗(yàn)證測(cè)試，記錄故障現(xiàn)象、解決方案及驗(yàn)證數(shù)據(jù)，確保修復(fù)效果符合臨床檢測(cè)要求。PART05結(jié)果審核與報(bào)告數(shù)據(jù)異常值識(shí)別儀器報(bào)警信息分析結(jié)合血細(xì)胞分析儀提供的報(bào)警信息（如紅細(xì)胞碎片、血小板聚集等），判斷異常值是否由檢測(cè)干擾引起，必要時(shí)進(jìn)行人工復(fù)檢或涂片鏡檢確認(rèn)。01歷史數(shù)據(jù)對(duì)比將當(dāng)前檢測(cè)結(jié)果與患者既往數(shù)據(jù)進(jìn)行縱向比對(duì)，若某項(xiàng)指標(biāo)短期內(nèi)波動(dòng)超過(guò)生理變化范圍（如血紅蛋白驟降），需排查標(biāo)本溶血、稀釋或疾病進(jìn)展等因素。02多參數(shù)邏輯關(guān)聯(lián)驗(yàn)證根據(jù)血液學(xué)參數(shù)間的相關(guān)性（如紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積的比值）驗(yàn)證數(shù)據(jù)合理性，若出現(xiàn)矛盾（如高紅細(xì)胞計(jì)數(shù)但低血紅蛋白），需檢查儀器校準(zhǔn)或標(biāo)本狀態(tài)。03臨界值復(fù)核流程預(yù)設(shè)閾值觸發(fā)機(jī)制當(dāng)檢測(cè)結(jié)果達(dá)到預(yù)設(shè)的醫(yī)學(xué)決定水平（如白細(xì)胞計(jì)數(shù)低于2.0×10?/L或高于30×10?/L），系統(tǒng)自動(dòng)標(biāo)記并觸發(fā)復(fù)核程序，由資深檢驗(yàn)師進(jìn)行二次檢測(cè)。多方法學(xué)交叉驗(yàn)證對(duì)臨界值標(biāo)本采用不同檢測(cè)方法（如人工顯微鏡計(jì)數(shù)輔助流式細(xì)胞術(shù)）進(jìn)行交叉驗(yàn)證，排除儀器誤差或干擾因素影響。臨床溝通與記錄復(fù)核確認(rèn)后，立即聯(lián)系申請(qǐng)醫(yī)師告知結(jié)果，并在LIS系統(tǒng)中詳細(xì)記錄溝通內(nèi)容、時(shí)間及接收人，確保危急值管理的可追溯性。初級(jí)檢驗(yàn)師與審核者分工初級(jí)檢驗(yàn)師完成初步審核后，需提交至具備中級(jí)以上職稱(chēng)的審核者進(jìn)行二次復(fù)核，重點(diǎn)核查異常結(jié)果、臨界值及與臨床診斷的符合性。電子簽名與責(zé)任綁定LIS系統(tǒng)強(qiáng)制要求雙人電子簽名方可簽發(fā)報(bào)告，簽名需關(guān)聯(lián)工號(hào)并加密存檔，確保責(zé)任可追溯至具體操作人員。不一致結(jié)果處理規(guī)范若雙簽過(guò)程中出現(xiàn)意見(jiàn)分歧，需啟動(dòng)第三方專(zhuān)家仲裁流程，必要時(shí)重新采樣檢測(cè)或組織多學(xué)科會(huì)診討論。報(bào)告簽發(fā)雙簽制度PART06后續(xù)處理規(guī)范全血樣本保存要求分離后血清/血漿處理特殊檢測(cè)樣本要求樣本保存溫度及時(shí)限全血樣本需在特定溫度范圍內(nèi)保存，通常冷藏條件下可維持細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定性，避免溶血或凝血現(xiàn)象影響檢測(cè)結(jié)果。特殊項(xiàng)目如凝血功能檢測(cè)需在室溫下短期保存。離心后的血清或血漿樣本若需延遲檢測(cè)，應(yīng)分裝至無(wú)菌凍存管，標(biāo)明保存條件。長(zhǎng)期保存需冷凍，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白變性或酶活性喪失。如血培養(yǎng)、血涂片等需根據(jù)檢測(cè)方法調(diào)整保存條件，部分微生物檢測(cè)樣本需避免冷藏以維持病原體活性。生物廢物處置標(biāo)準(zhǔn)使用過(guò)的采血針、玻片等需立即棄入專(zhuān)用防刺穿銳器盒，裝載量不超過(guò)容器的3/4，密封后交由專(zhuān)業(yè)醫(yī)療廢物處理機(jī)構(gòu)焚燒。銳器類(lèi)廢物處理沾染血液的棉球、紗布等感染性廢物需裝入黃色醫(yī)療垃圾袋，雙層包裝并標(biāo)注“生物危害”標(biāo)識(shí)，與普通垃圾嚴(yán)格區(qū)分。污染耗材分類(lèi)廢棄血清或血液需用含氯消毒劑浸泡處理，達(dá)到規(guī)定接觸時(shí)間后再排入專(zhuān)用污水處理系統(tǒng)，確保病原體滅活。