2025年免疫組化試題參考答案一、單項選擇題（每題2分，共40分）1.免疫組化技術(shù)的基本原理是（）A.抗原與抗體特異性結(jié)合B.化學反應C.物理吸附D.分子間引力答案：A。免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及相對定量的研究。2.以下哪種物質(zhì)不能作為免疫組化的抗體標記物（）A.熒光素B.酶C.放射性核素D.多糖答案：D。常用的抗體標記物有熒光素（如FITC等）、酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、放射性核素等，多糖一般不用于抗體標記。3.免疫組化染色中，為了減少非特異性染色，可采取的措施是（）A.增加抗體濃度B.延長孵育時間C.用非免疫動物血清封閉D.提高孵育溫度答案：C。用非免疫動物血清封閉可以封閉組織中可能與抗體非特異性結(jié)合的位點，從而減少非特異性染色。增加抗體濃度、延長孵育時間和提高孵育溫度可能會增加非特異性結(jié)合，導致非特異性染色加重。4.免疫組化中，蘇木精復染的目的是（）A.增強特異性染色B.顯示細胞核，便于定位和觀察組織結(jié)構(gòu)C.使陽性結(jié)果更明顯D.去除背景染色答案：B。蘇木精是一種常用的細胞核染色劑，在免疫組化中復染可以顯示細胞核，有助于觀察組織結(jié)構(gòu)和確定陽性染色的位置。5.以下哪種抗原修復方法適用于大多數(shù)抗原（）A.酶消化法B.微波修復法C.高壓蒸汽修復法D.水浴加熱修復法答案：C。高壓蒸汽修復法能產(chǎn)生高溫高壓，使抗原決定簇充分暴露，適用于大多數(shù)抗原的修復，是目前應用較為廣泛的抗原修復方法。6.免疫組化結(jié)果判斷時，陽性對照的作用是（）A.排除非特異性染色B.驗證實驗方法的可靠性C.確定陰性結(jié)果的準確性D.觀察背景染色情況答案：B。陽性對照是已知含有目標抗原的組織，通過陽性對照可以驗證免疫組化實驗方法的可靠性，確保實驗過程和試劑的有效性。7.免疫組化中，DAB顯色液的主要成分是（）A.3,3'-二氨基聯(lián)苯胺B.4-氯-1-萘酚C.堿性磷酸酶底物D.吖啶酯答案：A。DAB即3,3'-二氨基聯(lián)苯胺，是免疫組化中常用的顯色劑，在辣根過氧化物酶的作用下可產(chǎn)生棕色沉淀。8.免疫組化染色切片出現(xiàn)大片背景染色，可能的原因是（）A.抗體濃度過低B.孵育時間過短C.組織固定不充分D.洗滌時間過長答案：C。組織固定不充分會導致抗原彌散，容易出現(xiàn)大片背景染色?？贵w濃度過低和孵育時間過短可能導致陽性染色減弱或不顯色，洗滌時間過長一般不會導致大片背景染色。9.以下哪種細胞角蛋白主要存在于腺上皮細胞（）A.CK5B.CK7C.CK14D.CK20答案：B。CK7主要存在于腺上皮細胞和移行上皮細胞，CK5和CK14主要存在于復層鱗狀上皮，CK20主要存在于胃腸道、泌尿道等上皮細胞。10.免疫組化中，用于檢測雌激素受體（ER）的抗體屬于（）A.多克隆抗體B.單克隆抗體C.基因工程抗體D.自身抗體答案：B。目前臨床上檢測雌激素受體（ER）常用的是單克隆抗體，其特異性強、靈敏度高。11.免疫組化結(jié)果中，“+”表示（）A.強陽性B.中度陽性C.弱陽性D.可疑陽性答案：C。在免疫組化結(jié)果判斷中，“+”通常表示弱陽性，“++”表示中度陽性，“+++”表示強陽性。12.免疫組化實驗中，脫蠟的目的是（）A.去除組織中的石蠟，使抗體能夠進入組織細胞B.使組織細胞固定更牢固C.增強抗原抗體的結(jié)合力D.減少背景染色答案：A。組織標本在制作過程中用石蠟包埋，脫蠟可以去除石蠟，使抗體能夠順利進入組織細胞與抗原結(jié)合。13.以下哪種組織化學染色方法不屬于免疫組化（）A.PAS染色B.免疫熒光染色C.免疫酶染色D.親和組織化學染色答案：A。PAS染色是一種經(jīng)典的組織化學染色方法，主要用于顯示多糖和糖蛋白，不屬于免疫組化方法。免疫熒光染色、免疫酶染色和親和組織化學染色都屬于免疫組化的范疇。14.免疫組化中，抗體孵育的最佳溫度和時間一般為（）A.4℃，過夜B.25℃，2小時C.37℃，1小時D.56℃，30分鐘答案：A。4℃過夜孵育可以使抗體充分與抗原結(jié)合，且能減少非特異性結(jié)合，是抗體孵育常用的條件。15.以下哪種抗原是腫瘤標志物（）A.細胞角蛋白B.波形蛋白C.癌胚抗原（CEA）D.結(jié)蛋白答案：C。癌胚抗原（CEA）是一種腫瘤標志物，在多種惡性腫瘤中可升高，常用于腫瘤的輔助診斷、病情監(jiān)測和預后評估。細胞角蛋白、波形蛋白和結(jié)蛋白主要用于組織來源的鑒別診斷。16.免疫組化染色切片出現(xiàn)陽性染色呈細顆粒狀，可能的原因是（）A.抗體濃度過高B.抗原修復過度C.顯色時間過長D.組織中有內(nèi)源性酶答案：A?？贵w濃度過高可能導致陽性染色呈細顆粒狀。抗原修復過度可能導致抗原破壞，顯色時間過長可能使陽性染色加深、背景染色加重，組織中有內(nèi)源性酶可能導致非特異性染色。17.免疫組化中，用于檢測細胞增殖的標志物是（）A.Ki-67B.p53C.Bcl-2D.CD34答案：A。Ki-67是一種與細胞增殖相關(guān)的核抗原，其陽性表達率反映了細胞的增殖活性，常用于腫瘤的分級、預后評估等。p53是一種腫瘤抑制基因，Bcl-2是一種凋亡相關(guān)蛋白，CD34主要用于標記血管內(nèi)皮細胞和造血干細胞。18.免疫組化實驗中，使用封閉血清的作用是（）A.封閉內(nèi)源性酶B.封閉非特異性結(jié)合位點C.增強抗原抗體的結(jié)合力D.促進顯色反應答案：B。封閉血清可以封閉組織中可能與抗體非特異性結(jié)合的位點，減少非特異性染色。19.以下哪種免疫組化技術(shù)可以實現(xiàn)多色染色（）A.免疫酶染色B.免疫熒光染色C.親和組織化學染色D.免疫金染色答案：B。免疫熒光染色可以使用不同顏色的熒光素標記不同的抗體，從而實現(xiàn)多色染色，在一張切片上同時觀察多種抗原的表達情況。20.免疫組化結(jié)果判斷時，陰性對照的作用是（）A.驗證陽性結(jié)果的準確性B.排除內(nèi)源性酶的干擾C.確定陽性染色的強度D.觀察背景染色情況答案：B。陰性對照是用非免疫血清代替一抗，通過陰性對照可以排除內(nèi)源性酶、非特異性結(jié)合等因素的干擾，確保陽性結(jié)果的特異性。二、多項選擇題（每題3分，共30分）1.免疫組化技術(shù)的優(yōu)點包括（）A.特異性強B.靈敏度高C.可定位D.可定量E.可同時檢測多種抗原答案：ABCD。免疫組化技術(shù)具有特異性強、靈敏度高、可定位、可相對定量等優(yōu)點，但目前還難以實現(xiàn)絕對定量。雖然可以通過多色免疫熒光等技術(shù)同時檢測多種抗原，但選項E表述不準確，這里主要強調(diào)的是免疫組化本身的典型優(yōu)點，故答案選ABCD。2.免疫組化中常用的抗體類型有（）A.多克隆抗體B.單克隆抗體C.基因工程抗體D.自身抗體E.異嗜性抗體答案：ABC。免疫組化中常用的抗體類型有多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體。自身抗體是機體針對自身抗原產(chǎn)生的抗體，異嗜性抗體是一類與種屬特異性無關(guān)的、能與不同種屬動物組織抗原發(fā)生反應的抗體，一般不用于免疫組化實驗。3.抗原修復的方法有（）A.酶消化法B.微波修復法C.高壓蒸汽修復法D.水浴加熱修復法E.化學試劑修復法答案：ABCD。常見的抗原修復方法包括酶消化法、微波修復法、高壓蒸汽修復法和水浴加熱修復法等，化學試劑修復法一般不單獨作為一種典型的抗原修復方法，故答案選ABCD。4.免疫組化染色切片出現(xiàn)假陰性結(jié)果的可能原因有（）A.抗體濃度過低B.孵育時間過短C.抗原修復不充分D.組織固定過度E.顯色時間過短答案：ABCDE?？贵w濃度過低、孵育時間過短、抗原修復不充分、組織固定過度和顯色時間過短等都可能導致抗原抗體結(jié)合不充分或顯色不足，從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。5.免疫組化中常用的顯色劑有（）A.DABB.AECC.4-氯-1-萘酚D.堿性磷酸酶底物E.吖啶酯答案：ABCD。DAB、AEC、4-氯-1-萘酚和堿性磷酸酶底物都是免疫組化中常用的顯色劑，吖啶酯主要用于化學發(fā)光免疫分析，不是免疫組化常用的顯色劑。6.免疫組化結(jié)果判斷時，需要考慮的因素有（）A.陽性染色的強度B.陽性染色的分布C.陽性細胞的數(shù)量D.背景染色情況E.陽性對照和陰性對照的結(jié)果答案：ABCDE。在判斷免疫組化結(jié)果時，需要綜合考慮陽性染色的強度、分布、陽性細胞數(shù)量、背景染色情況以及陽性對照和陰性對照的結(jié)果，以確保結(jié)果的準確性和可靠性。7.以下哪些抗原可用于鑒別上皮源性腫瘤和間葉源性腫瘤（）A.細胞角蛋白B.波形蛋白C.結(jié)蛋白D.S-100蛋白E.CD34答案：AB。細胞角蛋白主要表達于上皮細胞，波形蛋白主要表達于間葉細胞，通過檢測這兩種抗原可以鑒別上皮源性腫瘤和間葉源性腫瘤。結(jié)蛋白主要用于鑒別肌源性腫瘤，S-100蛋白主要用于神經(jīng)源性腫瘤等的診斷，CD34主要用于標記血管內(nèi)皮細胞和造血干細胞。8.免疫組化實驗中，可能影響實驗結(jié)果的因素有（）A.組織固定B.脫水透明C.抗原修復D.抗體質(zhì)量E.顯色時間答案：ABCDE。組織固定、脫水透明、抗原修復、抗體質(zhì)量和顯色時間等因素都會對免疫組化實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。組織固定不充分或過度會影響抗原的保存和暴露，脫水透明不當會影響切片質(zhì)量，抗原修復不佳會導致抗原決定簇不能充分暴露，抗體質(zhì)量差會影響特異性和靈敏度，顯色時間過長或過短會影響陽性染色的強度。9.免疫組化技術(shù)在腫瘤診斷中的應用包括（）A.腫瘤的組織來源判斷B.腫瘤的分級和分期C.腫瘤的預后評估D.指導腫瘤的治療E.檢測腫瘤的微小轉(zhuǎn)移灶答案：ABCDE。免疫組化技術(shù)在腫瘤診斷中具有重要作用，可以用于判斷腫瘤的組織來源、進行腫瘤的分級和分期、評估腫瘤的預后、指導腫瘤的治療以及檢測腫瘤的微小轉(zhuǎn)移灶等。10.免疫熒光染色的優(yōu)點有（）A.可實現(xiàn)多色染色B.靈敏度高C.可觀察細胞的動態(tài)變化D.結(jié)果可長期保存E.操作簡單答案：ABC。免疫熒光染色可以使用不同顏色的熒光素標記不同的抗體，實現(xiàn)多色染色；靈敏度高；通過熒光顯微鏡可以觀察細胞的動態(tài)變化。但免疫熒光染色結(jié)果不能長期保存，需要及時觀察，且操作相對復雜。三、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述免疫組化實驗的基本步驟。答：免疫組化實驗的基本步驟如下：（1）組織標本處理：-取材：選取合適的組織標本，盡量新鮮，避免組織自溶和壞死。-固定：常用10%中性福爾馬林固定，使組織保持生前的形態(tài)結(jié)構(gòu)，防止組織腐敗和自溶，同時使抗原保持免疫原性。-脫水：通過梯度酒精脫水，去除組織中的水分，便于透明和浸蠟。-透明：用透明劑（如二甲苯）使組織進一步透明，為浸蠟做準備。-浸蠟：將組織放入熔化的石蠟中，使其完全被石蠟浸透。-包埋：將浸蠟后的組織放入包埋模具中，加入熔化的石蠟，制成石蠟塊。（2）切片與脫蠟水化：-切片：用切片機將石蠟塊切成適當厚度的切片（一般4-6μm），并將切片貼附在載玻片上。-脫蠟：將切片放入二甲苯中，使石蠟溶解，然后通過梯度酒精水化，使切片從有機溶劑環(huán)境過渡到水溶液環(huán)境。（3）抗原修復：由于組織固定過程中可能使抗原決定簇被掩蓋，需要進行抗原修復，常用的方法有高壓蒸汽修復法、微波修復法、酶消化法等，以暴露抗原決定簇，增強抗原與抗體的結(jié)合能力。（4）封閉：用非免疫動物血清封閉組織中可能與抗體非特異性結(jié)合的位點，減少非特異性染色。（5）一抗孵育：將切片與特異性一抗在適當?shù)臏囟群蜁r間下孵育，使一抗與組織中的抗原特異性結(jié)合。（6）洗滌：用緩沖液充分洗滌切片，去除未結(jié)合的一抗。（7）二抗孵育：加入與一抗種屬匹配的二抗，二抗可以與一抗結(jié)合，并帶有標記物（如酶、熒光素等）。（8）洗滌：再次用緩沖液洗滌切片，去除未結(jié)合的二抗。（9）顯色：根據(jù)二抗標記物的類型，加入相應的顯色劑進行顯色反應。如二抗標記的是辣根過氧化物酶，可加入DAB顯色液，在酶的作用下產(chǎn)生棕色沉淀；若標記的是堿性磷酸酶，可加入相應的底物顯色。（10）復染：用蘇木精等染料對細胞核進行復染，便于觀察組織結(jié)構(gòu)和定位陽性染色。（11）脫水透明封片：通過梯度酒精脫水，再用二甲苯透明，最后用封片劑封片，以便在顯微鏡下觀察。2.簡述免疫組化結(jié)果判斷的要點。答：免疫組化結(jié)果判斷需要綜合考慮以下要點：（1）陽性對照和陰性對照結(jié)果：-陽性對照：使用已知含有目標抗原的組織作為陽性對照。如果陽性對照結(jié)果為陰性，說明實驗過程或試劑可能存在問題，需要重新檢查實驗步驟、抗體質(zhì)量等。只有陽性對照結(jié)果為陽性，才能認為實驗方法可靠。-陰性對照：用非免疫血清代替一抗作為陰性對照。如果陰性對照出現(xiàn)陽性染色，可能存在內(nèi)源性酶、非特異性結(jié)合等干擾因素，需要進一步排查并采取相應措施，如使用酶阻斷劑、增加封閉時間等，以確保陽性結(jié)果的特異性。（2）陽性染色的強度：-一般將陽性染色強度分為弱陽性（+）、中度陽性（++）和強陽性（+++）。染色強度反映了抗原的表達水平，但需要注意避免因抗體濃度過高、孵育時間過長等因素導致的假陽性增強。（3）陽性染色的分布：-觀察陽性染色在組織細胞中的分布情況，如細胞核、細胞質(zhì)、細胞膜等。不同的抗原在細胞內(nèi)有特定的分布位置，了解其分布有助于準確判斷抗原的表達情況和生物學意義。例如，雌激素受體（ER）主要表達于細胞核，若出現(xiàn)細胞質(zhì)或細胞膜染色，可能提示結(jié)果異常。（4）陽性細胞的數(shù)量：-統(tǒng)計陽性細胞在整個視野或特定區(qū)域內(nèi)的比例，陽性細胞數(shù)量的多少可以反映抗原在組織中的表達范圍。在某些情況下，陽性細胞數(shù)量的變化與疾病的發(fā)生、發(fā)展和預后相關(guān)。例如，在腫瘤組織中，Ki-67陽性細胞數(shù)量增多可能提示腫瘤細胞增殖活躍，預后較差。（5）背景染色情況：-背景染色應均勻且較弱，過高的背景染色會影響陽性結(jié)果的觀察和判斷。背景染色可能由非特異性結(jié)合、內(nèi)源性酶、組織固定不當?shù)仍蛞?。如果背景染色過深，需要分析原因并采取相應的解決措施，如調(diào)整抗體濃度、增加洗滌次數(shù)、優(yōu)化組織固定方法等。四、論述題（每題20分，共20分）論述免疫組化技術(shù)在腫瘤診斷和研究中的應用及局限性。答：免疫組化技術(shù)是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及相對定量的研究。該技術(shù)在腫瘤診斷和研究中具有重要的應用價值，但也存在一定的局限性。（一）免疫組化技術(shù)在腫瘤診斷中的應用1.腫瘤的組織來源判斷：-不同組織來源的腫瘤具有不同的抗原表達特征。例如，細胞角蛋白（CK）是上皮細胞的標志物，在上皮源性腫瘤（如肺癌、乳腺癌等）中呈陽性表達，而波形蛋白（Vimentin）主要表達于間葉細胞，在間葉源性腫瘤（如肉瘤等）中呈陽性表達。通過檢測這些標志物，可以幫助判斷腫瘤是上皮源性還是間葉源性，對于腫瘤的分類和診斷具有重要意義。-此外，一些特異性的標志物還可以進一步明確腫瘤的具體組織來源。如甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（TTF-1）在甲狀腺癌和肺腺癌中常呈陽性表達，有助于這兩種腫瘤的診斷和鑒別診斷。2.腫瘤的分級和分期：-某些抗原的表達水平與腫瘤的分級和分期相關(guān)。例如，Ki-67是一種與細胞增殖相關(guān)的核抗原，其陽性表達率越高，提示腫瘤細胞增殖越活躍，腫瘤的分級可能越高，預后可能越差。在乳腺癌中，高Ki-67表達與腫瘤的侵襲性和復發(fā)風險增加有關(guān)。-免疫組化還可以檢測腫瘤組織中某些轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表達，如E-鈣黏蛋白（E-cadherin），其表達降低與腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強有關(guān)，有助于判斷腫瘤的分期和預后。3.腫瘤的預后評估：-多種免疫組化標志物可以用于評估腫瘤患者的預后。除了Ki-67外，p53基因是一種重要的腫瘤抑制基因，其突變或過表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預后密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌中，p53陽性表達的患者預后相對較差。-雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）的表達情況對于乳腺癌患者的預后評估和治療方案的選擇具有重要意義。ER和PR陽性的乳腺癌患者通常對內(nèi)分泌治療敏感，預后相對較好。4.指導腫瘤的治療：-免疫組化結(jié)果可以為腫瘤的個體化治療提供依據(jù)。例如，人表皮生長因子受體2（HER-2）在乳腺癌、胃癌等多種腫瘤中存在過表達，HER-2陽性的乳腺癌患者可以使用曲妥珠單抗等靶向治療藥物，顯著提高治療效果。-錯配修復蛋白（MMR）的檢測可以指導結(jié)直腸癌患者的治療。dMMR（錯配修復缺陷）或MSI-H（高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定）的結(jié)直腸癌患者可能對免疫檢查點抑制劑治療敏感。（二）免疫組化技術(shù)在腫瘤研究中的應用1.腫瘤發(fā)生機制的研究：-通過免疫組化技術(shù)可以檢測腫瘤組織中各種信號通路相關(guān)蛋白的表達和分布情況，有助于深入了解腫瘤的發(fā)生機制。例如，檢測Wnt/β-catenin信號通路中相關(guān)蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)該信號通路的異常激活與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。-研究腫瘤干細胞標志物的表達，如CD44、CD133等，有助于揭示腫瘤干細胞的生物學特性和在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、復發(fā)和轉(zhuǎn)移中的作用，為腫瘤的治療提供新的靶點。2.腫瘤分子分型的研究：-免疫組化可以檢測腫瘤組織中多種分子標志物的表達，根