人胃腸癌類器官藥物敏感性測試管理規(guī)范2025-12-29發(fā)布2026-07-01實(shí)施江西省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14縮略語 25倫理要求 36類器官要求 37類器官管理要求 48類器官藥敏測試 5附錄A(資料性附錄)類器官存活率檢測-鈣黃綠素AM染色法 8附錄B(資料性附錄)類器官組織病理檢測-石蠟切片和冰凍切片法 9附錄C(資料性附錄)類器官基因變異檢測 附錄D(資料性附錄)類器官STR鑒定 附錄E(資料性附錄)成瘤性評價-人胃腸癌類器官皮下成瘤實(shí)驗(yàn) 參考文獻(xiàn) 本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起本文件由江西省衛(wèi)生健康委員會提出。本文件由江西省衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(JX/TC037)歸口。本文件起草單位：南昌大學(xué)、南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院、廣州國家實(shí)驗(yàn)室、中國科學(xué)院動物研究所、中國計(jì)量科學(xué)研究院、廣州華醫(yī)再生科技有限公司、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院、南昌市第二人民醫(yī)院、南昌市第三人民醫(yī)院、南昌大學(xué)附屬康復(fù)醫(yī)院、江西省腫瘤醫(yī)院、宜春市人民醫(yī)院、上饒市人民醫(yī)院、贛南醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院。本文件主要起草人：陳曄光、方芝、熊建萍、王亞龍、洪帆、譚榕輝、黃霞、鄧軍、李葉華、趙冰、趙同標(biāo)、傅博強(qiáng)、田軍、劉安文、曹家慶、余勇、萬德惠、王農(nóng)榮、宋榮峰、陳金平、饒敏超、王祥財(cái)。11范圍本文件規(guī)定了人胃腸癌患者來源的腫瘤類器官倫理要求、類器官要求、類器官管理要求和類器官藥敏測試要求。本文件適用于人胃腸癌患者來源的腫瘤類器官藥敏測試的操作規(guī)范、流程管理和使用指引。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T37864生物樣本庫質(zhì)量和能力通用要求WS213丙型肝炎診斷WS293艾滋病和艾滋病病毒感染診斷WS299乙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國藥典(2025年版)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。由干細(xì)胞或前體細(xì)胞體外培養(yǎng)形成的，包含組織器官特異性的多種細(xì)胞，能自我更新，具有特定器官關(guān)鍵結(jié)構(gòu)和功能特性的三維(3D)細(xì)胞培養(yǎng)物。由患者的腫瘤組織或其他含腫瘤細(xì)胞的樣本中提取的腫瘤細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)而成的，可以在體外擴(kuò)增并重現(xiàn)原始腫瘤病理形態(tài)、遺傳特征和治療反應(yīng)特征的類器官。人胃癌類器官humangastriccancerorga由病理診斷為胃癌患者的胃腫瘤細(xì)胞在基質(zhì)膠中培養(yǎng)而成的具有胃癌特征的腫瘤類器官。由病理診斷為腸癌患者的腸腫瘤細(xì)胞在基質(zhì)膠中培養(yǎng)而成的具有腸癌特征的腫瘤類器官。體外培養(yǎng)的類器官經(jīng)過物理、化學(xué)或生物等處理方法，將原有類器官分成更小細(xì)胞簇甚至是單細(xì)胞，重新接種到與原培養(yǎng)條件相同的新培養(yǎng)體系中進(jìn)行體外培養(yǎng)的過程。2結(jié)構(gòu)變異(如易位、倒位、融合)等，可發(fā)生于單個核苷酸位點(diǎn)、外顯子、基因片段或染色體水平，并BRAF:B-Raf原癌基因(B-RafProto-Oncogene)CA19-9:糖抗原19-9(CarbohydrateAntigen19-9)HIV:人免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus)Ki67:增殖相關(guān)核抗原(Ki67Antigen)KRAS:Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KirstenRatSarcomaViralOnco3NTRK1:神經(jīng)營養(yǎng)酪氨酸激酶受體1(NePBS:磷酸鹽緩沖液(PhosphatePIK3CA:磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亞單位α(PhosphatidyliTP53:腫瘤抑制蛋白p53(TumorProteinp53)5.1人胃癌和人腸癌類器官的倫理審查要求依照國家衛(wèi)生健康行政部門、教育部門、科中醫(yī)藥管理部門發(fā)布的《涉及人的生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法》(2023年版)進(jìn)行審查。5.2應(yīng)與類器官原組織供者簽署書面的合法有效的知情同意通知書，5.3人胃癌和腸癌組織的采集、人胃癌和腸癌類器官的生產(chǎn)、以及利用人胃癌和腸癌類器官開展科學(xué)5.4開展胃癌、腸癌類器官研究的人員應(yīng)具備相應(yīng)專業(yè)能力，并應(yīng)接受科技倫理、數(shù)據(jù)保護(hù)、生物安6.2.2應(yīng)對類器官進(jìn)行相關(guān)標(biāo)志物檢測，檢測結(jié)果應(yīng)與原腫瘤組織結(jié)果基本一人胃癌類器官檢測的標(biāo)志物包括但不限于CDX2、CEA、CA19-9和Ki67,人腸癌類器官檢測的標(biāo)志物包括但不限于CDX2、CK20、CK7和Ki67。6.2.3可按照附錄B檢測類器官的組織病理學(xué)特征。46.3.1應(yīng)對類器官進(jìn)行基因變異檢測，檢測結(jié)果應(yīng)與同一區(qū)域的原腫瘤組織的基因變異結(jié)果過濾SNP后一致性大于80%,應(yīng)注意不同腫瘤區(qū)域腫瘤組織的突變特征存在空間異質(zhì)性差異。人胃癌類器官和人6.3.2可按照附錄C檢測類器官的基因變異。6.3.4可按照附錄D對類器官的STR進(jìn)行鑒定。6.4.1初次體外培養(yǎng)成的人胃腸癌類器官應(yīng)能在體外維持培養(yǎng)2個月或類器官傳代3代以上，且數(shù)量6.4.2類器官傳代后應(yīng)能重新生長成新的類器官。新生長的類器官與傳代前的類器官在形態(tài)學(xué)特征、6.5.1類器官復(fù)蘇后存活率應(yīng)不低于50%,且應(yīng)進(jìn)行至少三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證存活率的一致性。6.6.2支原體按照《中華人民共和國藥典》(2025年版)中“3301支原體檢查法”檢測。6.6.3細(xì)菌及真菌按照《中華人民共和國藥典》(2025年版)中“1101無菌檢查法”檢測。6.6.4HIV按照WS293核酸法檢測。6.6.6HCV按照WS213核酸法檢驗(yàn)。6.6.7外源病毒因子按照《中華人民共和國藥典》(2025年版)中“3302外源病毒因子檢查法”檢測。6.7.1當(dāng)人胃腸癌類器官通過體內(nèi)異種移植的方式接種于免疫缺7.1.2應(yīng)建立人胃腸癌類器官的唯一標(biāo)識。此唯一標(biāo)識應(yīng)包括類器官名稱、類器官的來源、類器官在7.1.3應(yīng)記錄人胃腸癌類器官培養(yǎng)信息，包括但不限于培養(yǎng)時間、培養(yǎng)人員、培養(yǎng)方法、類器官名稱7.2.1應(yīng)建立人胃腸癌類器官凍存規(guī)范，類器官規(guī)范應(yīng)包括：凍存前準(zhǔn)備、消化處理、凍存分裝、記7.2.2類器官凍存過程應(yīng)控制細(xì)胞密度(8×10?個細(xì)胞/mL~1×10?個細(xì)胞/mL)、凍存前的細(xì)胞活率(≥90%)等，并選擇使用適當(dāng)?shù)膬龃姹Ｗo(hù)劑，并對凍存過程進(jìn)行記錄，包括但不限于：類器官名稱、批號、57.2.3應(yīng)參照GB/T37864要求對人胃腸癌類器官進(jìn)行儲存。7.2.4應(yīng)對每批儲存的人胃腸癌類器官相應(yīng)的信息進(jìn)行記錄，記錄內(nèi)容包括但不限于類器官名稱、批號、儲存日期、儲存位置和存儲數(shù)量。7.3.1供應(yīng)方應(yīng)制定人胃腸癌類器官運(yùn)輸規(guī)程并實(shí)施。運(yùn)輸規(guī)程包括：運(yùn)輸前準(zhǔn)備、包裝要求、運(yùn)輸過程控制、接收與檢查。7.3.2應(yīng)參照GB/T37864要求進(jìn)行運(yùn)輸，并根據(jù)人胃腸癌類器官的使用需求選擇適當(dāng)?shù)倪\(yùn)輸方式和運(yùn)輸條件。7.3.3人胃腸癌類器官應(yīng)以凍存狀態(tài)或以生長狀態(tài)的方式運(yùn)輸，根據(jù)規(guī)程控制運(yùn)輸條件包括但不限于：溫度、防污染措施、適當(dāng)?shù)陌b等，并告知接收方相關(guān)信息。7.3.4人胃腸癌類器官的運(yùn)輸應(yīng)記錄以下方面，包括但不限于：運(yùn)輸方式和條件、運(yùn)輸路線、聯(lián)系方式和收件人信息等。7.3.5應(yīng)在必要時檢查運(yùn)輸中的包裹，并在可能的情況下添加新的冷凍源(如干冰和液氮)以保持適宜的運(yùn)輸溫度。7.4使用說明7.4.1應(yīng)按照GB/T37864要求進(jìn)行人胃腸癌類器官分發(fā)管理。7.4.2使用前，應(yīng)由人胃腸癌類器官接收方提交申請，并經(jīng)供應(yīng)方根據(jù)其正式程序進(jìn)行審批。7.4.3供應(yīng)方與用戶簽署MTA或同等條款和條件文件。7.4.4供應(yīng)方應(yīng)向用戶提供相關(guān)信息包括但不限于：可追溯的批號、質(zhì)量證明、培養(yǎng)方法、凍存方法、凍存日期、建庫日期、微生物檢測數(shù)據(jù)、匿名化的類器官供者的知情同意書副本等。8類器官藥敏測試8.1藥物板8.1.1應(yīng)建立人胃腸癌類器官藥物板的管理規(guī)范，包括但不限于：藥物配制時間、藥物配制人員、取用記錄和藥物板維護(hù)等相關(guān)類器官藥物篩選的規(guī)程。8.1.2應(yīng)建立人胃腸癌類器官藥物板的詳細(xì)標(biāo)識，此標(biāo)識表包括但不限于藥物名稱、藥物位置、藥物濃度范圍、藥物體積、配制日期、有效期記錄、配制人員等。8.1.3應(yīng)結(jié)合藥物種類、藥物溶劑、藥物的有效儲存條件等選擇合適的藥物儲存條件，存儲條件控制內(nèi)容包括但不限于：存儲溫度、防污染措施、封膜處理等，并記錄相應(yīng)儲存條件下藥物的有效期、儲存日期、儲存位置等信息。且應(yīng)對每批儲存的藥物板進(jìn)行記錄，記錄內(nèi)容包括但不限于：藥物板名稱、藥物數(shù)目、藥物批號等。8.1.4供應(yīng)方應(yīng)制定人胃腸癌類器官藥物板的運(yùn)輸規(guī)程并實(shí)施。根據(jù)藥物板的使用需求選擇適當(dāng)?shù)倪\(yùn)輸方式和運(yùn)輸條件，必要時檢查運(yùn)輸中的包裹，并在可能的情況下添加新的冷凍源以保持適宜的運(yùn)輸溫度。且應(yīng)記錄藥物板運(yùn)輸記錄，包括但不限于：運(yùn)輸方式和條件、運(yùn)輸路線、聯(lián)系方式和收件人信息等。8.2類器官用于臨床藥敏測試的人胃腸癌類器官應(yīng)符合第6章的技術(shù)要求，且類器官代數(shù)應(yīng)不超過20。8.3操作流程8.3.1儀器和設(shè)備準(zhǔn)備應(yīng)提前準(zhǔn)備好微孔板(通量至少達(dá)384)、移液工作站/自動分液器(精度應(yīng)控制在微升及以上)、自動微量加樣器(精度應(yīng)控制在納升及以上)、化學(xué)發(fā)光細(xì)胞活性分析系統(tǒng)(通量至少達(dá)384,且能檢測化學(xué)發(fā)光)等儀器設(shè)備。68.3.2試劑準(zhǔn)備應(yīng)提前準(zhǔn)備好基質(zhì)膠、人胃腸癌類器官培養(yǎng)基、藥物板、ATP活性檢測試劑、星形孢菌素、蛋白酶抑制劑Mg132。8.3.3檢測步驟收集數(shù)目合適且生長狀態(tài)良好的人胃腸癌類器官，用PBS洗去基質(zhì)膠后，離心收集類器官。采用機(jī)械或酶解法消化人胃腸癌類器官成單細(xì)胞，用預(yù)混5%~100%基質(zhì)膠的人胃腸癌類器官培養(yǎng)基重懸細(xì)胞或用基質(zhì)膠預(yù)先包被板底后鋪入單細(xì)胞懸液。使用自動分液器將單細(xì)胞混液按合適數(shù)目進(jìn)行鋪板，孔間細(xì)胞密度要求一致。根據(jù)藥物的有效抑制濃度范圍合理設(shè)計(jì)藥物工作劑量梯度，并預(yù)設(shè)好藥物板上各藥物的位置及濃度分布孔位。按藥物說明書選擇合適溶劑溶解藥物配成合適的儲液濃度，將儲液藥物依次稀釋到相應(yīng)的工作劑量濃度并移至對應(yīng)的藥物板空位，且應(yīng)注意設(shè)置溶劑對照，避免溶劑本身的細(xì)胞毒性混淆。8.3.4藥物處理提前設(shè)置好藥物處理分組，陰性對照組、藥物處理組和陽性對照組。提前預(yù)設(shè)好人胃腸癌類器官單細(xì)胞板上藥物處理的組別、濃度和加樣位置。在藥物處理前后觀察且記錄類器官的生長特征，用微量加樣器將藥物板上對應(yīng)的藥液按相應(yīng)濃度移至上述細(xì)胞板位置。8.3.5細(xì)胞活性檢測應(yīng)按ATP化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒說明書對細(xì)胞活性進(jìn)行檢測?？刹捎萌刑烨嗟葻晒饣盍Ψ治鎏结樧鳛锳TP法的補(bǔ)充性檢測策略。使用化學(xué)發(fā)光細(xì)胞活性檢測儀對加入細(xì)胞活性ATP檢測試劑的細(xì)胞進(jìn)行檢測，得到各實(shí)驗(yàn)藥物組細(xì)胞化學(xué)發(fā)光數(shù)值并分析上述各組的CV。8.3.6結(jié)果分析與判讀藥物溶劑和空白組為陰性對照組，藥物處理組為各濃度梯度的藥物，蛋白酶抑制劑Mg132(有效濃度為4μM~10μM)或星形孢菌素(有效濃度為0.2μM~2μM)處理組為陽性對照組。陰性對照組細(xì)胞活性應(yīng)最強(qiáng)。類器官細(xì)胞活性按照公式(1)進(jìn)行計(jì)算。CV一類器官細(xì)胞相對活力；CV藥物一藥物處理組類器官細(xì)胞活力；CV對照一陰性對照組類器官細(xì)胞活力；CV空白一板孔空白組類器官細(xì)胞活力，用于消除背景噪音影響。每孔信號值需扣除空白對照孔(無細(xì)胞、只含培養(yǎng)基及試劑)的平均值，以消除背景信號干擾。如果孔間信號的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差>15%,則該孔數(shù)據(jù)需重復(fù)檢測或剔除，異常值可通過Grubbs檢驗(yàn)或箱線圖方法判定并剔除。8.3.7計(jì)算與分析按上式計(jì)算各藥物濃度劑量下的細(xì)胞活力，保證至少三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，結(jié)合藥物濃度，繪制劑量反應(yīng)曲線，得出IC5。8.3.8結(jié)果判讀類器官藥物反應(yīng)結(jié)果與臨床療效的一致性參考意義結(jié)合臨床實(shí)際應(yīng)用情況判讀。8.4流程管理8.4.1應(yīng)記錄人胃腸癌類器官藥物篩選信息，包括但不限于類器官名稱、類器官代數(shù)、類器官的數(shù)目、測試藥物名稱、測試藥物數(shù)目、藥物篩選人員等。78.4.2應(yīng)建立人胃腸癌類器官藥敏測試實(shí)驗(yàn)規(guī)范，應(yīng)按照《腫瘤類器官診治平臺的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)中國專家共識(2022年版)》和《類器官藥物敏感性測試指導(dǎo)腫瘤精準(zhǔn)治療臨床應(yīng)用專家共識(2022年版)》 (以下簡稱“共識”)要求進(jìn)行藥敏測試，包括但不限于：患者知情同意授權(quán)、入組患者人群、藥物測試選擇、藥物測試結(jié)果判讀、患者個性化治療方案選擇等。8.4.3應(yīng)按照共識要求記錄人胃腸癌類器官藥敏實(shí)驗(yàn)，記錄內(nèi)容包括但不限于：人胃腸癌組織原代處理圖片、類器官培養(yǎng)成功圖片、類器官的數(shù)目/直徑變化、用藥前后類器官的形態(tài)學(xué)變化、藥效劑量變化曲線、細(xì)胞活力量化結(jié)果統(tǒng)計(jì)等。8.4.4應(yīng)按照共識要求在具有測試資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)或第三方檢測單位進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，測試結(jié)束后應(yīng)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果出具測試報告，報告內(nèi)容包括但不限于腫瘤生長抑制率、半數(shù)抑制濃度、二分類法或三分類法區(qū)分出藥物抑制效果等。8.4.5由于胃腸癌的復(fù)雜性，應(yīng)按照共識要求在臨床診療過程中進(jìn)行多學(xué)科討論，依據(jù)患者具體病情、病理結(jié)果及患者原始癌組織的基因測試結(jié)果綜合判斷胃癌或腸癌類器官藥敏報告，為患者制定安全、潛在獲益的單藥或聯(lián)合用藥策略。8(資料性附錄)類器官存活率檢測-鈣黃綠素AM染色法A.1儀器和設(shè)備倒置熒光顯微鏡、光學(xué)顯微鏡、細(xì)胞培養(yǎng)箱。A.2.3儲存液的配制(鈣黃綠素AM溶液):用細(xì)胞級別DMSO制備2mmol/L的鈣黃綠AM素溶液。A.2.4除特別說明外，所用試劑均為分析純，檢測用水均為去離子水。A.3檢測步驟A.3.1類器官總數(shù)量計(jì)數(shù)體外三維培養(yǎng)類器官，可使用光學(xué)顯微鏡觀察，光學(xué)顯微鏡的倍數(shù)參照類器官的直徑大小選擇，可使用40×或是100×的光學(xué)顯微鏡記錄類器官的形態(tài)特征和狀態(tài)，通過肉眼觀察來確定類器官是否存活。A.3.2活類器官數(shù)量計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)時，取出已經(jīng)配置好的鈣黃綠素AM儲存液，加入鈣黃綠素AM溶液到培養(yǎng)基中至終濃度為0.2μmol/L。隨后在37℃條件下孵育60min。到達(dá)時間后，用PBS緩慢清洗掉帶有鈣黃綠素AM的培養(yǎng)基，加入新鮮培養(yǎng)基。用490nm激發(fā)波長，515nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察類器官并斷層掃描拍照?；铑惼鞴僭跓晒怙@微鏡下顯示為綠色且邊緣清晰。對直徑≥20μm的活類器官計(jì)數(shù)。A.4類器官存活率計(jì)算符合6.1類器官形態(tài)要求，對直徑≥20μm的類器官計(jì)數(shù)。類器官存活率按照公式(A.1)進(jìn)行計(jì)算。X=(N活/N總)×100%.................................(A.1)式中：X一類器官存活率；N活一活類器官數(shù)量；N總一總類器官數(shù)量。A.5計(jì)算與分析按照A.3步驟再重復(fù)兩次，計(jì)算三次活類器官比率結(jié)果的平均值，記為類器官平均存活率。A.6精密度在重復(fù)性條件下獲得的三次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。9(資料性附錄)類器官組織病理檢測-石蠟切片和冰凍切片法B.1儀器和設(shè)備石蠟包埋儀、石蠟切片機(jī)、組織攤片機(jī)、冰凍切片機(jī)、-80℃冰箱、熒光顯微鏡、光學(xué)顯微鏡。B.2試劑B.2.1石蠟切片制備試劑：按照相應(yīng)要求配制石蠟包埋需要試劑，包括固定液、乙醇脫水液、石蠟、脫蠟液、復(fù)水液、乙醇、二甲苯、中性樹脂。B.2.2H&E染色試劑：蘇木精、伊紅。B.2.3冰凍切片樣本制備試劑：按照相應(yīng)要求配制冰凍切片樣本需要試劑，包括固定液、蔗糖脫水液、OCT、TritonX-100溶液、抗熒光淬滅劑。B.2.4除特別說明外，所用試劑均為分析純，檢測用水均為去離子水。B.3檢測步驟B.3.1樣品準(zhǔn)備和固定取體外培養(yǎng)的類器官，用移液器吸出類器官和基質(zhì)膠混合物，轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)，離心棄上清，用4%多聚甲醛固定類器官15min~30min。B.3.2類器官石蠟切片制作按照石蠟切片制作方法對類器官樣品進(jìn)行固定，脫水，透明后浸入石蠟中，用石蠟包埋儀器進(jìn)行包埋。用石蠟切片機(jī)切成標(biāo)準(zhǔn)厚度，制成石蠟切片。B.3.3類器官冰凍切片制作按照冰凍切片制作方法對類器官樣品進(jìn)行固定，脫水后，用預(yù)冷的OCT包埋類器官，并用冰凍切片機(jī)切成標(biāo)準(zhǔn)厚度，制成冰凍切片。將類器官石蠟切片進(jìn)行脫蠟，復(fù)水，用蘇木精染色，分化后沖水。接著用伊紅染色，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。B.3.5免疫熒光染色將類器官冰凍切片直接進(jìn)行用PBS清洗，抗原修復(fù)后，加入0.1%TritonX-100透膜，加封閉液進(jìn)行封閉。加一抗孵育，PBS清洗。加對應(yīng)熒光二抗，PBS清洗。用DAPI復(fù)染細(xì)胞核，加抗熒光淬滅劑封片。完整的類器官可以直接在孔板中按上述流程進(jìn)行操作染色，石蠟切片需進(jìn)行脫蠟、復(fù)水后再按上述流程操作。B.3.6免疫組化染色將類器官石蠟切片進(jìn)行脫蠟，復(fù)水，抗原修復(fù)，加封閉液進(jìn)行封閉。加一抗孵育，PBS清洗。加對應(yīng)二抗，PBS清洗。用DAB進(jìn)行顯色，加水終止顯色反應(yīng)。蘇木精襯染，鹽酸透明后沖水。乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。B.4結(jié)果分析得到的檢測結(jié)果由具有病理診斷資質(zhì)的人員分析和判定，并與原腫瘤組織組織病理檢測結(jié)果具有一致性。(資料性附錄)類器官基因變異檢測C.1儀器和設(shè)備離心機(jī)、-80℃冰箱、超微量分光光度計(jì)。C.2試劑按相應(yīng)要求準(zhǔn)備的細(xì)胞DNA抽提試劑盒。C.3樣品保存樣品制備好后，于-80℃以下保存。C.4檢測步驟C.4.1樣品制備將類器官在基質(zhì)膠中培養(yǎng)至穩(wěn)定生長狀態(tài)，用移液器吹打基質(zhì)膠，至基質(zhì)膠破碎后，混合液收集于離心管中，離心收集類器官，棄上清。按細(xì)胞DNA抽提試劑盒說明書對類器官基因組DNA進(jìn)行提取，提取后的DNA使用超微量分光光度計(jì)進(jìn)行濃度和質(zhì)量檢測。C.4.3測序?qū)㈩惼鞴貲NA樣本和原腫瘤組織送至具有臨床基因檢測資質(zhì)的機(jī)構(gòu)進(jìn)行一代測序或二代測序檢測，C.5結(jié)果分析分析基因變異位點(diǎn)，比較類器官測序和原腫瘤組織測序結(jié)果的一致性。(資料性附錄)類器官STR鑒定D.1儀器和設(shè)備離心機(jī)、PCR儀、毛細(xì)管電泳儀、微量紫外分光光度計(jì)、-80℃冰箱。D.2試劑細(xì)胞DNA抽提試劑盒、STR細(xì)胞鑒定試劑盒。D.3樣品保存樣品制備好后，于-80℃以下保存。D.4檢測步驟D.4.1樣品制備將類器官在基質(zhì)膠中培養(yǎng)至穩(wěn)定生長狀態(tài)，用移液器吹打基質(zhì)膠，至基質(zhì)膠破碎后，混合液收集于離心管中，離心收集類器官，棄上清。D.4.2.1按細(xì)胞DNA抽提試劑盒說明書對類器官和原腫瘤組織基因組DNA進(jìn)行提??；D.4.2.2紫外分光光度計(jì)檢測提取后的DNA的吸光度A260/A280的比值在1.8~2.0之間；D.4.3PCR擴(kuò)增D.4.3.1按照標(biāo)準(zhǔn)PCR擴(kuò)增方法對STR位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，也可以按照經(jīng)過質(zhì)檢合格的商業(yè)化試劑盒說明書進(jìn)行。D.4.3.2設(shè)置陰性對照組、樣本檢測組和陽性對照組。陰性對照組采用無菌水為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，樣本檢測組以類器官和原腫瘤組織樣本提取的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，陽性對照組采用DNA模板進(jìn)行擴(kuò)D.4.3.3采用瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物、陰性對照組和陽性對照組。陰性對照組無目的條帶，陽性對照組有清晰的目的條帶。D.4.4STR基因分型檢測使用毛細(xì)管電泳基因分析儀對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測，并得到STR遺傳圖譜數(shù)據(jù)。陽性對照組有清晰的目的峰形。應(yīng)檢測至少15個STR基因位點(diǎn)，且類器官STR圖譜與原腫瘤組織STR圖譜在≥80%的STR位點(diǎn)上應(yīng)保持一致。D.5結(jié)果分析D.5.1當(dāng)STR位點(diǎn)的等位基因含有相同重復(fù)次數(shù)時，圖譜僅出現(xiàn)1個等位基因峰；當(dāng)含有不同重復(fù)次數(shù)時，圖譜會出現(xiàn)2個等位基因峰。且當(dāng)陰性對照組無等位基因峰出現(xiàn)，陽性對照組檢測結(jié)果與其標(biāo)準(zhǔn)基因分型數(shù)據(jù)一致時視為有效檢測。D.5.2在檢測有效的前提下，若受檢樣本STR位點(diǎn)出現(xiàn)2個以上的等位基因峰，經(jīng)過重復(fù)實(shí)驗(yàn)排除引物結(jié)合區(qū)突變等干擾因素后，判定受檢樣本存在交叉污染。接種針、游標(biāo)卡尺、體重秤、4℃冰箱。NSG(NODscidgamma)或NCG(NODCRISPRPrkdcI12rgamma)免疫缺陷小鼠，4周~6周鼠齡。收集生長狀態(tài)良好且數(shù)量合適的人胃腸癌類器官，并通過50%基質(zhì)膠進(jìn)行重懸，置于4℃?zhèn)溆?。用接種針將人胃腸癌類器官注射到周齡為4周~6周的免疫缺陷小鼠皮下，每個類器官樣本需要保證至少兩個生物學(xué)重復(fù)，并在注射后每7days觀察、記錄并測量小鼠皮下腫瘤的生長情況。V=1/2×L×W2.................................V一腫瘤體積，單位為cm3;L一腫瘤最長徑，腫塊最長兩點(diǎn)的距離；W一腫瘤最短徑，腫塊最短兩點(diǎn)的距離。[1]科技教育司，國家衛(wèi)生健康委員會科技教育司.涉及人的生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究倫理審查辦法[Z].[2]科學(xué)技術(shù)部等四部門.科技倫理審查辦法(試行)[Z].國科發(fā)監(jiān)〔2023〕167號，2023.[3]國家科技倫理委員會生命科學(xué)倫理分委員會.人源類器官研究倫理指引[S].北京：科學(xué)技術(shù)部，[4]國家市場監(jiān)督管理總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T37864-2019生物樣本庫質(zhì)量和能力通用要求[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2019.[5]國家市場監(jiān)督管理總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T42466-2023生物樣本庫多能干細(xì)胞管理技術(shù)規(guī)范[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2023.[6]中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會.T/CSCB0001-2020干細(xì)胞通用要求[S].北京，2020.[7]中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會.T/CSCB0005-2022人腸道類器官[S].北京，2022.[8]中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會.T/CSCB0006-2022人腸癌類器官[S].北京，2022.[9]中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會.T/CSCB0022-2024人胃癌類器官[S].北京，2024.[10]中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會.T/CSCB0023-2024人胃類器官[S].北京，2024.[11]中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會.T/CSCB0009-2022人干細(xì)胞研究倫理審查技術(shù)規(guī)范[S].北京，2022.[12]中國臨床腫瘤學(xué)會指南工作委員會.中國臨床腫瘤學(xué)會(CSCO)胃癌診療指南2023[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2023.[13]中國抗癌協(xié)會腫瘤多學(xué)科診療專業(yè)委員會，中國抗癌協(xié)會腫瘤內(nèi)分泌專業(yè)委員會.腫瘤類器官診治平臺的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中國專家共識(2022年版)[J].中國癌癥雜志，2022,32(07):657-668.[14]類器官藥物敏感性檢測指導(dǎo)腫瘤精準(zhǔn)治療臨床應(yīng)用專家共識(2022年版)[J].中國癌癥防治雜志，2022,14(03):234-239.[15]藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測技術(shù)指南(試行)概要[J].實(shí)用器官移植電子雜志，2015,3(05):257-267.[16]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2020年版)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020