溫度脅迫對(duì)幼苗生長(zhǎng)的影響實(shí)證研究摘要通過(guò)扦插培養(yǎng)銀杏幼苗的方法，研究不同溫度4℃、22℃和37℃脅迫下銀杏幼苗的生理生化性質(zhì)。測(cè)定葉綠素含量、MDA含量、可溶性蛋白含量、SOD活性和POD活性來(lái)觀測(cè)溫度脅迫對(duì)銀杏幼苗的影響。其結(jié)果表明，在于22℃對(duì)照下，銀杏幼苗的葉綠素含量在4℃下下降了為21.57%；在37℃葉綠素含量下降了9.59%，在低溫下葉綠素含量下降顯著?？扇苄缘鞍缀吭?℃下下降了44.59%；37℃下下降了31.02%，在低溫下可溶性蛋白含量下降顯著。MDA含量在4℃下上升了35.74%；在37℃下上升了22.38%。在低溫下，MDA含量上升顯著。SOD活性4℃下下降了47.21%；在高溫下上升了12.16%，SOD活性在高溫下上升在低溫下下降，猜測(cè)常溫不是SOD最適溫度，但還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。POD活性在4℃下下降了48.51%；在37℃下下降了87.83%。POD活性在高溫下下降顯著。關(guān)鍵詞：葉綠素含量；銀杏幼苗；可溶性蛋白；溫度脅迫；可溶性蛋白 目錄1緒論 緒論植物正常生長(zhǎng)需要許多基本元素，包括溫度。溫度不僅僅對(duì)植物的正常生長(zhǎng)有所影響，還對(duì)植物的形態(tài)建成有著極大的影響，一般表現(xiàn)位溫度形態(tài)建成[1]、光形態(tài)建成，生理形態(tài)建成有所影響。植物的蒸騰作用、水分吸收、新陳代謝以及體內(nèi)化學(xué)反應(yīng)都會(huì)對(duì)溫度變化產(chǎn)生反應(yīng)[2]。任何植物的生物活動(dòng)都必須在一定的溫度范圍下進(jìn)行，過(guò)熱或過(guò)冷對(duì)植物的生長(zhǎng)不利，超出了允許的溫度，不僅會(huì)造成葉片灼燒枯黃，還會(huì)使其生長(zhǎng)發(fā)育放緩，嚴(yán)重時(shí)甚至停滯;而當(dāng)溫度低于溫度下限時(shí)，往往會(huì)造成冷害或者寒害[3]，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)斐蓤@林植物的死亡。故而了解各種園林植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程的溫度要求，有利于采取防寒等措施從而最大限度滿足園林植物對(duì)溫度的要求。近年來(lái)，地球的氣候變暖，氣溫變化越來(lái)越強(qiáng)烈，溫度對(duì)植物的影響越來(lái)越顯著。當(dāng)溫度變化超出一定的限度時(shí)，就會(huì)使植物受到相應(yīng)的脅迫，所以研究植物應(yīng)對(duì)不同溫度之間的反應(yīng)機(jī)制和應(yīng)對(duì)極端溫度的抵抗力是非常重要的[4]。目前，從擬南芥和冬季的作物上取得了植物冷適應(yīng)機(jī)制的突破性進(jìn)展，具體是其與冷適應(yīng)相關(guān)聯(lián)的部分代謝通道已被人們知曉，其中涉及了多個(gè)基因的表達(dá)與調(diào)控[5]。位光山[6]重點(diǎn)研究了植物對(duì)溫度脅迫的響應(yīng)機(jī)制，包括熱、冷脅迫對(duì)植物的影響，熱、冷相關(guān)基因的表達(dá)和調(diào)控，以及基因表達(dá)后的細(xì)胞響應(yīng)等等。1.1銀杏簡(jiǎn)介銀杏是銀杏屬的落葉喬木，銀杏幼年時(shí)樹(shù)皮幼年時(shí)有淺而小的縱向裂紋，樹(shù)皮上有深而厚的縱向裂紋。銀杏的樹(shù)冠在幼年時(shí)呈圓錐形，成年期與幼年期一致，但在老年時(shí)呈寬卵形。銀杏的葉子是扇形長(zhǎng)柄，淺綠色，無(wú)毛，春夏嫩綠，秋黃。有著美麗的樹(shù)形，它們常被用作行道樹(shù)和庭院樹(shù)。銀杏有著悠久的早期發(fā)展歷史。銀杏分為雄性和雌性，但雄性不結(jié)果實(shí)。因此，為了縮短栽培時(shí)間，在栽培區(qū)常用嫁接幼苗、移栽莖苗等方式進(jìn)行栽培，使其提前開(kāi)花結(jié)果。1.2溫度脅迫對(duì)植物的傷害冷害和凍害是低溫對(duì)植物造成脅迫的表現(xiàn)，冷害的直接表現(xiàn)在葉片失綠、邊皮變色和局部壞死等，間接表現(xiàn)為迫使細(xì)胞膜的選擇性和透過(guò)性的降低，使得進(jìn)出細(xì)胞的物質(zhì)受到的控制減少，如膜內(nèi)的物質(zhì)將會(huì)大量外滲；原生質(zhì)層的物質(zhì)流動(dòng)減緩甚至停止；吸水能力下降和蒸騰作用減弱使得植物體的水分代謝進(jìn)一步失調(diào)；凍害則是植物嫩葉和嫩莖出現(xiàn)冰漬狀的直接表現(xiàn)，隨后組織壞死，在嚴(yán)重的情況下甚至導(dǎo)致整個(gè)植物的死亡[7]，而凍害的間接表現(xiàn)與冷害有許多相似之處，如細(xì)胞膜的選擇性和透過(guò)性的降低，就會(huì)有部分鹽類物質(zhì)從細(xì)胞內(nèi)部流出到細(xì)胞外部。高溫對(duì)植物的傷害多直接表現(xiàn)在植物的開(kāi)花結(jié)果異常、葉片灼燒變黃和根莖的灼傷等。間接表現(xiàn)則是在促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)部某些酶的活性，進(jìn)而抑制另一類酶的活性，使得細(xì)胞內(nèi)的某些生理生化反應(yīng)發(fā)生異常，如高溫使細(xì)胞膜上的特異性識(shí)別蛋白質(zhì)變性，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)法識(shí)別特異性物質(zhì)，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。溫度脅迫對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響十分的大，不論是低溫抑制植物的生長(zhǎng)還是高溫對(duì)植物的灼傷。都會(huì)使得植物在某一階段的生長(zhǎng)發(fā)育表現(xiàn)出異常，而植物的生長(zhǎng)發(fā)育所需的一切生理生化反應(yīng)都需要在一定的溫度下才能夠進(jìn)行，只有在該生理生化反應(yīng)最適溫度下，該生理生化反應(yīng)才能夠良好的進(jìn)行；在低溫下或高溫下，該生理生化反應(yīng)就會(huì)受到抑制。如在植物生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)，超過(guò)其所需要的最高或者最低溫度植物的生長(zhǎng)發(fā)育就會(huì)停止。1.3植物對(duì)溫度脅迫的適應(yīng)植物用來(lái)對(duì)抗某些不利環(huán)境的性狀被稱為植物的抗逆性。，植物在抵抗溫度脅迫時(shí)，對(duì)低溫具有抗寒性、對(duì)高溫具有抗熱性等。溫度抗性的誕生是植物長(zhǎng)期適應(yīng)溫度脅迫的一種結(jié)果，如在沙漠中的植物只在雨季生長(zhǎng)；如改變細(xì)胞中自由水的含量，進(jìn)而儲(chǔ)存或釋放水分，以求自身在溫度適宜時(shí)進(jìn)行生長(zhǎng)發(fā)育或在溫度脅迫時(shí)度過(guò)嚴(yán)寒酷暑。又或者在光合作用中，Rubisco酶對(duì)溫度的響應(yīng)，多個(gè)研究表明，在低溫光照的條件下處理植株，會(huì)導(dǎo)致Rubisco酶的活性喪失，導(dǎo)致光合作用受到影響。而不同的植物的最適溫度也會(huì)有不同，如在高溫下，C3植物中Rubisco酶的活性變化最大，C4和CAM植物中的Rubisco酶活性變化小。而在光呼吸中，Rubisco酶的活性還與CO2和O2之間的含量有關(guān)，CO2濃度高時(shí)，抑制光呼吸，CO2濃度低時(shí)，則是促進(jìn)光呼吸。隨著溫度的增高，為了保護(hù)植物的光合器官不受到高溫的傷害，光呼吸也會(huì)加強(qiáng)[8]。1.4本研究的意義銀杏樹(shù)是孑遺樹(shù)種，本文對(duì)銀杏在溫度脅迫下的生理和生化反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了研究，希望可以幫助人們?cè)谥参镌苑N和保護(hù)植物方面有所建樹(shù)。銀杏不僅在醫(yī)藥方面有著不俗的藥用價(jià)值，既可以清肺止咳還可以強(qiáng)身健體，具有一定的保健效果。還在環(huán)境方面和藝術(shù)方面有些不俗的價(jià)值，在環(huán)境方面上銀杏不僅是優(yōu)良的園林行道樹(shù)、庭院樹(shù)，還是理想的防風(fēng)林樹(shù)種。銀杏還是我國(guó)特有的樹(shù)種，故而藝術(shù)方面，有著我國(guó)特有的銀杏枝干制作的藝術(shù)品。光合作用既能夠?yàn)樯锶μ峁┪镔|(zhì)和能量的來(lái)源，還能夠維持生態(tài)圈碳氧的平衡。而溫度又是光合作用中不可缺少的一部分，所以研究不同溫度脅迫下對(duì)植物造成的影響不論是對(duì)人類還是對(duì)整個(gè)地球來(lái)說(shuō)都是十分重要的。2．試驗(yàn)材料與方法2.1試驗(yàn)植株的選用從長(zhǎng)勢(shì)一致的銀杏樹(shù)上，選擇粗細(xì)一致，長(zhǎng)度一致，帶有的莖節(jié)一致的當(dāng)年生枝條進(jìn)行扦插培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為6周。此時(shí)的獲得的扦插苗即為本次試驗(yàn)所用的銀杏幼苗。2.2主要的試驗(yàn)試劑及設(shè)備霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液、130mmol/L甲硫氨酸溶液（Met）、人工氣候培養(yǎng)箱、0.1mol/LHCL或0.1mol/LNaOH、750μmol/L氯化硝基四氮唑藍(lán)（NBT）溶液、增氧泵、石油醚溶液、分光光度計(jì)、95%乙醇、50mmol/L磷酸緩沖液、、考馬斯亮藍(lán)G-250、硫代巴比妥酸（TBA）、100μmol/L乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）溶液、氮藍(lán)四唑溶液、愈創(chuàng)木酚溶液等等。2.3試驗(yàn)方法從扦插苗中選擇長(zhǎng)勢(shì)一致的銀杏幼苗，如營(yíng)養(yǎng)葉均為5片等。消毒并沖洗后將其移入霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液中培養(yǎng)。7d后，將銀杏幼苗轉(zhuǎn)入完全營(yíng)養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為14d。銀杏幼苗在經(jīng)過(guò)霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)后轉(zhuǎn)入人工氣候培養(yǎng)箱中進(jìn)行溫度處理，溫度設(shè)置為：高溫（37℃）、對(duì)照（22℃）、低溫（4℃）。每個(gè)溫度處理植物為5株，并分別標(biāo)號(hào)記錄。處理期間不僅需要觀察銀杏幼苗的生長(zhǎng)情況，還需要對(duì)其進(jìn)行pH的測(cè)定，使用0.1mol/LHCL或0.1mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至銀杏幼苗正常生長(zhǎng)所需要的需要pH。即為5~5.5，營(yíng)養(yǎng)液每3d換一次，并使用增氧泵為人工氣候培養(yǎng)箱通氣24h，處理時(shí)間為30d，30d后進(jìn)行所需指標(biāo)的測(cè)定。測(cè)定葉綠素含量采用浸泡法和石油醚研磨法結(jié)合的方式；測(cè)定丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸（TBA）法；測(cè)定可溶性蛋白采用考馬斯亮藍(lán)G-250法；測(cè)定SOD的活性采用氮藍(lán)四唑(NBT)光還原法；測(cè)定POD活性采用愈創(chuàng)木酚法。2.4試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定過(guò)程2.4.1葉綠素含量的測(cè)定采用浸泡法與研磨法結(jié)合的方式進(jìn)行葉綠素的提取。浸泡液采用1：3體積比的石油醚和95%乙醇的混合溶液[9]。（1）取鮮重銀杏葉片，分別稱取新鮮樣品1g。將其浸入裝有40mL的1：3體積比的石油醚和95%乙醇的混合溶液試管中，浸泡并標(biāo)號(hào)。（2）分別將試管用瓶塞封住，置于37℃（高溫）、22℃（常溫）和4℃（低溫）的恒溫環(huán)境中放置保存4h。（3）將1號(hào)樣品從試管中用取出，置于加入石油醚的研缽中，研磨到組織呈現(xiàn)出白色。（4）將研磨液濾入100mL的量瓶中，在使用將浸泡液沖洗研缽。（5）使用石油醚少量多次清洗濾紙上，最后用石油醚定容。（6）將提取液倒入比色杯，比色杯不宜過(guò)滿。以石油醚為空白對(duì)照，測(cè)定波長(zhǎng)為645nm下的吸光度，將波長(zhǎng)調(diào)節(jié)為663nm后重復(fù)該步驟。（7）根據(jù)下列公式計(jì)算。Ca=12.72*A663-2.59*A645。Cb=22.88*A663-4.67*A645。C=Ca+Cb。（8）取出2號(hào)，3號(hào)試管中的樣品，重復(fù)以上步驟，測(cè)定葉綠素的總含量。2.4.2可溶性蛋白的測(cè)定1.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：按照表1進(jìn)行配置2.測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的含量：（1）樣品提取：稱取銀杏幼苗葉片0.2g，研磨后將研缽中所有的溶液都倒入10mL容量瓶進(jìn)行定容。取少量勻漿液放置于離心管中，離心管不宜過(guò)滿，在設(shè)置為5000g下進(jìn)行離心10min操作，離心結(jié)束后，離心管中表層清液即為所需提取液。（2）取0.1mL提取液和0.9mL蒸餾水于試管中，加入5mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑，搖勻后將其放在試管架中，靜置2min。在595nm下，對(duì)倒入比色杯中的溶液進(jìn)行比色操作并記錄。最后通過(guò)回歸方程計(jì)算。（3）按照下列公式進(jìn)行計(jì)算。樣品中的蛋白質(zhì)含量（mg/gFW）=C*V1/（FW*V2*1000）表1標(biāo)準(zhǔn)曲線試劑制作試劑試管號(hào)123456標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（mL）00.81.0蒸餾水（mL）1.00.20G-250（mL）555555蛋白質(zhì)含量（μg）020406080100從圖1計(jì)算得出，回歸方程為y=0.005-7x+0.0012.4.3MDA含量的測(cè)定（1）提取MDA：在研缽中加入2mL的10%的三氯乙酸和二氧化硅。稱新鮮的銀杏葉片1g，剪碎，加入研缽研磨，之后使用8mL的三氯乙酸進(jìn)行清洗研缽，一塊倒入試管中，最后轉(zhuǎn)入離心管中。在設(shè)置為4000r/min下進(jìn)行離心操作10min。此時(shí)的離心管中的表層清液即為樣品的提取液。（2）吸取表層清液2mL，對(duì)照組加入2mL的蒸餾水，實(shí)驗(yàn)組加入2mL的0.6%的硫代巴比妥酸。后將兩組均置于沸水上，進(jìn)行水浴加熱15min，待冷卻后在進(jìn)行離心操作。提取表層清液在波長(zhǎng)為532nm、600nm和450nm的時(shí)測(cè)定吸光度。（3）據(jù)公式計(jì)算。MDA（μmol/g）=[6.452*（A532-A600）-0.559*A450]*Vt/（Vs*FW）2.4.4超氧化物歧化酶活性的測(cè)定表2反應(yīng)試劑測(cè)定管光下對(duì)照暗中對(duì)照1234550mmol/L磷酸緩沖液1.51.5130mmol/LMet溶液0.30.3750μmol/LNBT溶液0.30.3100μmol/LEDTA-Na0.30.320μmol/L核黃素0.30.3粗酶液0.00.0蒸餾水0.60.6（1）稱取0.5g銀杏葉片，放入裝有2mL的磷酸緩沖液的研缽中進(jìn)行冰浴研磨，研磨液倒入10mL容量瓶中進(jìn)行定容。后提取5mL提取液在4℃下10000r/min離心15min，此時(shí)的表層清液即為SOD提取液。（2）取試管5支，其中測(cè)定管2支、光下對(duì)照試管2支和暗中對(duì)照試管1支，并按照表2加入反應(yīng)顯色的試劑。（3）5號(hào)試管在加入核黃素后，立刻用黑色的硬紙進(jìn)行遮蓋，避免光下核黃素光下分解。待全部的試劑加完后，搖勻，之后將試管置于4000lx熒光燈下照射15min，讓其充分反應(yīng)。終止反應(yīng)時(shí)應(yīng)以黑色布罩遮蓋試管。最后以5號(hào)試管作為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)為560nm下測(cè)定1號(hào)試管到4號(hào)試管的吸光度，記錄數(shù)據(jù)并按照公式計(jì)算。SOD活性[U/（g*FW*min）]=（A0-As）*Vt/（A0*0.5*FW*Vs*t）2.4.5過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定（1）取1g銀杏葉片于研缽中，加入少量二氧化硅、少量磷酸緩沖液和碳酸鈣在冰浴中進(jìn)行研磨，研磨后轉(zhuǎn)入離心管，在3000g下離心10min，將離心管中表層清液轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中。用5mL磷酸緩沖液提取下層中的沉淀，將提取到的表層清液轉(zhuǎn)入容量瓶中，定容。該試劑需要在低溫下進(jìn)行保存。（2）在試管中依次加入0.05mol/L磷酸緩沖液的2.9mL;2%濃度的H2O2的1.0mL;0.05mol/L愈創(chuàng)木酚的1.0mL和0.1mL的酶液。對(duì)照組設(shè)置為加熱煮沸5min的酶液，加入酶液后，需要在34℃水浴中保溫3min，保溫后迅速將其稀釋1倍，在波長(zhǎng)為470nm時(shí)進(jìn)行比色，每隔1min記錄1次，共記錄5次。（3）按照公式進(jìn)行計(jì)算。POD活性（U/g*min-1）=（A0-As）Vt/（FW*Vs*0.01*t）3．試驗(yàn)結(jié)果與分析3.1溫度脅迫對(duì)銀杏幼苗生長(zhǎng)的影響常溫（22℃）處理的24d后的銀杏幼苗葉片中有5%的葉片出現(xiàn)了萎蔫。與常溫處理下的銀杏幼苗相比，在高溫（37℃）處理與低溫處理（4℃）7d時(shí)，銀杏幼苗并正常生長(zhǎng)發(fā)育，沒(méi)有明顯的不適癥狀，而當(dāng)處理時(shí)間達(dá)到14d時(shí)，1號(hào)和3號(hào)銀杏幼苗開(kāi)始表現(xiàn)明顯的不適癥狀，如部分葉片出現(xiàn)從葉脈開(kāi)始，進(jìn)而擴(kuò)散到葉基的失綠癥狀；根系顏色開(kāi)始變深，葉基出現(xiàn)卷縮癥狀。而當(dāng)處理時(shí)間與常溫組相同時(shí)即處理時(shí)間達(dá)到24d時(shí)，葉片同樣出現(xiàn)了萎蔫現(xiàn)象，但比例高于常溫組。根系由棕褐色變?yōu)樯钭厣蜏亟M的銀杏幼苗葉片除了出現(xiàn)萎蔫還有部分掉落。而高溫組的是銀杏幼苗葉片并未出現(xiàn)，但在銀杏幼苗的莖基部出現(xiàn)白色的絮狀物。后經(jīng)過(guò)對(duì)3組的統(tǒng)計(jì)，觀測(cè)到溫度脅迫對(duì)銀杏幼苗的株高沒(méi)有顯著性差異，與常溫組進(jìn)行對(duì)比，3組株高差異并不大。低溫脅迫下，對(duì)銀杏幼苗的葉、根和莖的生物量進(jìn)行與常溫組對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，其葉、根和莖的生物量都有所下降，但下降的程度并不相同，其中葉和莖的下降程度高于根部的下降程度；在高溫脅迫下，對(duì)銀杏幼苗的葉、根和莖的生物量進(jìn)行與常溫組對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，其葉、根和莖的生物量都有所下降，下降的程度仍然是不相同，其中葉和莖的下降程度高于根部的下降程度。由上可知，不論是高溫還是低溫都會(huì)對(duì)銀杏幼苗的生長(zhǎng)造成不良的影響，且銀杏幼苗在低溫下的受到的影響大于在高溫下受到的影響。3.2溫度脅迫下銀杏幼苗葉綠素含量的影響在植物的眾多的光合色素中，葉綠素是最重要的一類，葉綠素能直接影響到光合作用，故而對(duì)葉綠素的含量進(jìn)行分析，能夠在一定程度上，直觀的反應(yīng)出溫度脅迫對(duì)銀杏幼苗生長(zhǎng)的影響，進(jìn)而了解溫度對(duì)植物造成的傷害。由表3可以看出，隨著溫度的升高，銀杏幼苗的葉綠素含量呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)，其葉綠素含量下降了9.59%。隨著溫度的下降，銀杏幼苗的葉綠素含量呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。其葉綠素質(zhì)含量下降了21.57%。據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，在低溫下，葉綠素a含量下降幅度為18.78%小于葉綠素b含量在高溫下的下降幅度，葉綠素b在低溫下下降了30%。在高溫下，葉綠素a含量下降了9.59%，葉綠素b含量下降了29.14%。表3不同溫度下銀杏葉片的葉綠素含量溫度葉綠素含量4℃22℃37℃葉綠素a含量1.008±0.038a1.241±0.334a1.122±0.121a葉綠素b含量0.322±0.015a0.460±0.120a0.326±0.103a葉綠素總含量1.334±0.049a1.701±0.454a1.538±0.134a3.3溫度脅迫對(duì)銀杏幼苗可溶性蛋白的影響可溶性蛋白質(zhì)一般通過(guò)對(duì)細(xì)胞的保水能力的影響進(jìn)而影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育以及代謝過(guò)程等等。而通過(guò)考馬斯亮藍(lán)法能夠定量對(duì)植物體中的可溶性蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。從圖2可以看出，在溫度脅迫下，銀杏的可溶性蛋白含量呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)，在不同溫度脅迫中，低溫脅迫下的銀杏的可溶性蛋白含量下降的更多。高溫脅迫下的銀杏的可溶性蛋白含量下降僅為31.02%。低溫脅迫下的銀杏的可溶性蛋白含量十分明顯，達(dá)到了44.59%。3.4溫度脅迫對(duì)銀杏幼苗MDA的影響植物在不利于生長(zhǎng)發(fā)育的環(huán)境下受到傷害時(shí)會(huì)產(chǎn)生丙二醛，而丙二醛與體內(nèi)活性氧積累進(jìn)而誘發(fā)的膜質(zhì)過(guò)氧化作用有著密切聯(lián)系。所以可以通過(guò)測(cè)定丙二醛含量，來(lái)判斷細(xì)胞受到的毒害作用[10]，進(jìn)而通過(guò)測(cè)定丙二醛的含量來(lái)觀測(cè)溫度脅迫對(duì)銀杏幼苗的影響。由圖3可看出，對(duì)比常溫組，高溫脅迫下，丙二醛的含量提高了22.38%，低溫脅迫下，丙二醛的含量提高了35.74%。由表可知，在溫度脅迫中，高溫脅迫對(duì)銀杏的傷害低于低溫脅迫對(duì)銀杏的傷害。3.5溫度脅迫下銀杏幼苗中SOD活性的變化超氧化物歧化酶（SOD）是生物體內(nèi)一種十分重要的酶，常在植物抗氧化、防衰老和對(duì)逆境的抵抗等方面起到十分重要的作用，故而可以通過(guò)對(duì)超氧化歧化酶的活性測(cè)定來(lái)觀測(cè)溫度對(duì)植物的影響。觀察圖4可以看出，隨著溫度的上升，超氧化物歧化酶的活性也在上升，而隨著溫度的下降，超氧化物歧化酶的活性也在下降。相比于常溫下銀杏幼苗中的超氧化物歧化酶的活性，高溫下的超氧化物歧化酶活性上升了12.16%，而低溫下，計(jì)算發(fā)現(xiàn)超氧化物歧化酶的活性下降了47.21%，可以看出，在低溫下超氧化物歧化酶的活性下降得十分明顯。3.6溫度脅迫下銀杏幼苗中過(guò)氧化物酶活性的變化過(guò)氧化物酶（POD）是植物體內(nèi)重要的呼吸酶，參與植物體內(nèi)的許多的生化反應(yīng)，如光合作用、呼吸作用等，且還參與酚類物質(zhì)的代謝以及木質(zhì)素，在植物的生長(zhǎng)過(guò)程中隨著環(huán)境條件的變化和植物的生長(zhǎng)發(fā)育而發(fā)生變化，故而可以通過(guò)測(cè)定POD活性的測(cè)定來(lái)觀測(cè)該時(shí)期植物體抗逆性的強(qiáng)弱。如圖5所示，與常溫下作比較，計(jì)算得出，高溫下的過(guò)氧化物酶活性下降了87.83%，低溫下的過(guò)氧化物酶活性下降了48.51%。4.結(jié)論與討論溫度脅迫會(huì)對(duì)植物造成傷害，葉片等外在的很容易就能觀察到，而植物內(nèi)部的傷害則需要進(jìn)行一些測(cè)定方能知曉。本試驗(yàn)中，可以觀察到在試驗(yàn)時(shí)間達(dá)到30d時(shí)，溫度脅迫下的銀杏幼苗都出現(xiàn)了不同程度的損害，如葉片、莖和根的生物量有所下降。從銀杏幼苗的試驗(yàn)數(shù)據(jù)中，將高溫組與低溫組作對(duì)比，可以明顯看出在溫度脅迫下，葉綠素總含量下降，其中高溫脅迫下的葉綠素總含量略高于低溫脅迫下的葉綠素總含量?？梢圆聹y(cè)是光呼吸在高溫下保護(hù)了部分光合器官，減少了葉綠體的損傷[11]。也可看出，高溫脅迫下銀杏幼苗抗性較高，低溫脅迫下銀杏幼苗的抗性較弱。在溫度脅迫下，葉綠素a下降幅度不如葉綠素b的下降幅度，是什么原因還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研討。測(cè)定植物代謝能力強(qiáng)弱的指標(biāo)中，常用的指標(biāo)有可溶性蛋白，在銀杏幼苗受到溫度脅迫時(shí)，銀杏幼苗通過(guò)增加可溶性蛋白的含量，繼而降低其代謝能力，從而來(lái)增強(qiáng)抗逆性[12]，減少不利環(huán)境對(duì)銀杏幼苗的損害。在該試驗(yàn)中，溫度脅迫下的可溶性蛋白含量有所下降，低溫下可溶性蛋白含量高于高溫下下可溶性蛋白含量，可猜測(cè)是高溫下蛋白質(zhì)有部分變性，或是低溫下蛋白質(zhì)的活性受到抑制不論是高溫下還是低溫下，具體的相關(guān)過(guò)程還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究探討。植物在不利環(huán)境下受到損害時(shí)，會(huì)使得細(xì)胞膜脂過(guò)氧化，丙二醛就是膜脂過(guò)氧化的產(chǎn)物[13]，在本次試驗(yàn)中，MDA的含量在溫度脅迫下雖然有下降的趨勢(shì)，但并不是十分明顯，卻也能夠看出銀杏幼苗的抗熱性略強(qiáng)于其抗冷性。除了不同的銀杏幼苗中MDA的含量也存在部分差異，還可認(rèn)為此時(shí)的高溫已經(jīng)對(duì)細(xì)胞膜造成了損傷，而低溫并未造成傷害或者是低溫下，細(xì)胞膜的流動(dòng)性與選擇性僅是被抑制了，并未造成損傷。猜測(cè)這是本次試驗(yàn)中MDA的差異較大的原因之一，是否還有其他因素的影響還需要進(jìn)行進(jìn)一步的猜測(cè)與驗(yàn)證。超氧化物歧化酶是去除植物體內(nèi)活性氧的主要物質(zhì)，而溫度脅迫會(huì)對(duì)植物造成損害，使得植物氧代謝能力有所下降，植物體內(nèi)的活性氧積累[14]。在SOD維持在較高水平時(shí)，可以去除活性氧，從而保護(hù)植物免受損傷[15]。從本次試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)SOD的活性在低溫下降低，但在高溫下反而有所上升?？梢圆聹y(cè)的是，在本次試驗(yàn)所設(shè)置的溫度并未超過(guò)SOD的最高溫度，而常溫也并不是SOD的最適溫度，故而SOD在高溫下活性有所上升，從而保護(hù)了植物。而低溫下，SOD的活性下降，就結(jié)果來(lái)看，SOD在低溫下保護(hù)植物的效果并不理想，是否是超過(guò)SOD的最低溫度亦或是其他因素造成，還需要進(jìn)行探討。在植物的呼吸作用、光合作用中過(guò)氧化物酶起著不可缺少的作用，在不利環(huán)境下，POD能促進(jìn)木質(zhì)素的生成[16]，從而保護(hù)植物在不利環(huán)境中正常生長(zhǎng)發(fā)育。從試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以推測(cè)，在高溫脅迫下，銀杏幼苗中POD的活性將會(huì)大幅下降，而在低溫脅迫下，銀杏幼苗中POD的活性下降幅度小于高溫脅迫下的POD活性。從該次試驗(yàn)的數(shù)據(jù)來(lái)看，銀杏幼苗對(duì)高溫的抗性強(qiáng)于對(duì)低溫的抗性。不論是本次試驗(yàn)所測(cè)定的葉綠素、可溶性蛋白質(zhì)、MDA、SOD或是POD都不是獨(dú)立于細(xì)胞系統(tǒng)之外的物質(zhì)，它們雖然在不同植物內(nèi)部的含量有著細(xì)微的差別，但是總體的變化趨勢(shì)還是可以由微見(jiàn)著的，對(duì)植物而言，內(nèi)部的物質(zhì)都是相互影響、相互存在的，故而除了在對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的分析上對(duì)其進(jìn)行探討，還需要對(duì)所測(cè)量的物質(zhì)所在的某個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行總體的考量，單一的去看某個(gè)物質(zhì)雖然能夠去了解一部分，但終究是還有很多去發(fā)現(xiàn)、去探索。而本文中對(duì)部分試驗(yàn)結(jié)果的