2025年大學(xué)第三學(xué)年（生物學(xué)）分子生物學(xué)實驗試題及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題共40分）每題只有一個正確答案，請將正確答案的序號填在括號內(nèi)。(總共20題，每題2分，每題只有一個選項符合題意)1.在分子生物學(xué)實驗中，用于提取DNA的常用試劑是（）A.乙醇B.氯仿C.酚D.蛋白酶K2.以下哪種技術(shù)可用于檢測特定基因的表達水平（）A.PCRB.WesternblotC.NorthernblotD.Southernblot3.限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的末端通常是（）A.平端B.粘性末端C.3'突出末端D.5'突出末端4.構(gòu)建基因文庫時，常用的載體是（）A.質(zhì)粒B.噬菌體C.人工染色體D.以上都是5.用于DNA測序的方法是（）A.Sanger法B.化學(xué)裂解法C.焦磷酸測序法D.以上都是6.在PCR反應(yīng)中，需要的酶是（）A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.限制性內(nèi)切酶7.檢測蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)是（）A.凝膠阻滯實驗B.酵母雙雜交C.免疫共沉淀D.蛋白質(zhì)印跡8.基因克隆的基本步驟不包括（）A.目的基因的獲取B.載體的選擇與構(gòu)建C.細(xì)胞的培養(yǎng)D.重組DNA分子的導(dǎo)入與篩選9.真核生物基因表達調(diào)控主要發(fā)生在（）A.轉(zhuǎn)錄水平B.翻譯水平C.轉(zhuǎn)錄后加工水平D.以上都是10.以下哪種分子可作為RNA干擾的有效工具（）A.siRNAB.miRNAC.lncRNAD.circRNA11.蛋白質(zhì)純化過程中，常用的層析方法不包括（）A.離子交換層析B.凝膠過濾層析C.親和層析D.薄層層析12.用于檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)定位的技術(shù)是（）A.免疫熒光B.免疫電鏡C.原位雜交D.A和B13.基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9的作用靶點是（）A.DNAB.RNAC.蛋白質(zhì)D.以上都不是14.以下哪種方法可用于分析蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)（）A.X射線晶體學(xué)B.核磁共振C.圓二色光譜D.以上都是15.在分子生物學(xué)實驗中，常用的緩沖液是（）A.Tris-HClB.PBSC.TED.以上都是16.提取RNA時，為防止RNA降解，需要加入的抑制劑是（）A.蛋白酶KB.氯仿C.異硫氰酸胍D.乙醇17.用于蛋白質(zhì)定量的方法是（）A.Bradford法B.BCA法C.考馬斯亮藍(lán)法D.以上都是18.基因表達載體中通常含有（）A.啟動子B.終止子C.多克隆位點D.以上都是19.檢測DNA甲基化狀態(tài)的方法是（）A.亞硫酸氫鹽測序B.甲基化特異性PCRC.染色質(zhì)免疫沉淀D.A和B20.以下哪種技術(shù)可用于蛋白質(zhì)相互作用的研究（）A.酵母雙雜交B.免疫共沉淀C.GSTpull-downD.以上都是第II卷（非選擇題共60分）（一）填空題（共10分）(總共5空，每空2分)1.PCR反應(yīng)的三個基本步驟是______、______、______。2.基因工程的核心步驟是______。3.蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是指______。（二）簡答題（共2小題，每題10分，共20分）1.簡述DNA重組技術(shù)的基本原理和主要步驟。2.說明RNA干擾的作用機制及其在基因功能研究中的應(yīng)用。（三）實驗設(shè)計題（共15分）請設(shè)計一個實驗，從細(xì)胞中提取總RNA，并檢測某一特定基因的表達水平。要求寫出實驗步驟、所需試劑和儀器。（四）材料分析題（共15分）材料：研究人員發(fā)現(xiàn)一種新的基因，初步推測其與細(xì)胞增殖有關(guān)。為了進一步研究該基因的功能，他們進行了以下實驗：將該基因克隆到表達載體中，并轉(zhuǎn)染到細(xì)胞系中，然后檢測細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染該基因的細(xì)胞增殖速度明顯加快。問題：1.請分析該實驗的設(shè)計思路和結(jié)果。2.為了進一步驗證該基因的功能，你認(rèn)為還可以進行哪些實驗？（五）論述題（共20分）論述分子生物學(xué)技術(shù)在現(xiàn)代生物學(xué)研究中的重要性及其應(yīng)用領(lǐng)域。答案：第I卷1.C2.C3.B4.D5.D6.A7.A8.C9.D10.A11.D12.D13.A14.D15.D16.C17.D18.D19.D20.D第II卷（一）填空題1.變性、退火、延伸2.構(gòu)建重組DNA分子3.氨基酸的排列順序（二）簡答題1.DNA重組技術(shù)基本原理是將不同來源的DNA分子通過酶切、連接等操作重新組合。主要步驟包括：目的基因的獲??；載體的選擇與構(gòu)建；目的基因與載體的連接；重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞；重組體的篩選與鑒定。2.RNA干擾的作用機制是雙鏈RNA被核酸酶切割成小干擾RNA（siRNA），siRNA與AGO2蛋白結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC），RISC中的siRNA識別并結(jié)合與其互補的mRNA，導(dǎo)致mRNA降解或抑制其翻譯。在基因功能研究中可通過導(dǎo)入外源siRNA抑制特定基因表達，觀察細(xì)胞表型變化來研究基因功能。（三）實驗設(shè)計題實驗步驟：1.收集細(xì)胞，加入Trizol試劑裂解細(xì)胞。2.加入氯仿抽提，離心分層。3.取上層水相，加入異丙醇沉淀RNA。4.用75%乙醇洗滌RNA沉淀。5.干燥后用DEPC水溶解RNA。所需試劑：Trizol試劑、氯仿、異丙醇、75%乙醇、DEPC水。儀器：離心機、移液器、PCR儀、凝膠成像系統(tǒng)用于后續(xù)檢測基因表達水平（如進行RT-PCR）。（四）材料分析題1.實驗設(shè)計思路是將新基因克隆到表達載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞，通過檢測細(xì)胞增殖情況研究基因功能。結(jié)果表明該基因可能促進細(xì)胞增殖。2.可進行基因敲除實驗，觀察細(xì)胞增殖變化；檢測相關(guān)信號通路分子變化；進行動物實驗，觀察該基因?qū)游锷L的影響等進一步驗證基因功能。（五）論述題分子生物學(xué)技術(shù)在現(xiàn)代生物學(xué)研究中極為重要。它為基因結(jié)構(gòu)與