康心湯對壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型中VDR、腎素mRNA表達影響的研究一、引言1.1研究背景與意義心血管疾病已成為全球范圍內(nèi)威脅人類健康的主要疾病之一，嚴重影響著人們的生活質(zhì)量和壽命。其中心肌重塑是多種心血管疾病發(fā)展過程中的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，如冠心病、高血壓性心臟病、心肌病等，最終往往導致心力衰竭的發(fā)生。心肌重塑是指在心臟負荷增加、心肌缺血、神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)失衡等因素的作用下，心臟的大小、形狀、結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生的適應性變化。在這一過程中，心肌細胞發(fā)生肥大、凋亡，細胞外基質(zhì)過度沉積，導致心肌纖維化，心臟的收縮和舒張功能逐漸受損。相關(guān)研究表明，心肌重塑引發(fā)的心室肥大不僅會影響心室舒張功能，嚴重時導致舒張性心力衰竭，隨著病情進展，還會逐漸降低收縮功能，引發(fā)收縮性心力衰竭。心室肥大使心肌細胞血液供應相對缺乏，心臟增大導致瓣膜關(guān)閉相對不足，進一步增加心臟負擔。同時，心肌重塑所引起的心室肥大還是導致心律失常的重要原因，嚴重威脅患者的生命健康，若不及時治療，可能引發(fā)心肌缺氧、缺血，甚至導致呼吸困難和猝死?？敌臏鳛橐环N中藥復方，在心血管疾病的治療中展現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢，被廣泛應用于治療心血管疾病、降壓以及減輕壓力等方面。其藥物組成通常包含黨參、黃芪、淫羊藿、五味子、麥冬等中藥。方中人參、麥冬、五味子組成生脈散，現(xiàn)代研究表明生脈散具有增加冠狀動脈流量，降低心肌耗氧量，提高心肌對缺氧的耐力，改善微循環(huán)，降低血管阻力，改善運動耐力，消除自由基，拮抗血小板聚集，防止血栓形成的功能。黃芪能增強心肌收縮力，擴張冠狀動脈及外周血管，改善心肌血流供應，減少血栓形成，減低血小板的黏附率。淫羊藿補腎溫陽，具有增加冠脈流量等作用。全方共奏益氣養(yǎng)陰、補腎溫陽之效，通過多成分、多靶點、多途徑的綜合作用，對心血管系統(tǒng)發(fā)揮保護作用。維生素D受體（VDR）在心血管系統(tǒng)中廣泛表達，參與調(diào)節(jié)心肌細胞的生長、分化和代謝，以及血管平滑肌細胞的功能和細胞外基質(zhì)的合成與降解。腎素作為腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的關(guān)鍵啟動因子，其表達和活性的改變在心肌重塑的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。RAAS的過度激活會導致血管緊張素Ⅱ生成增加，進而引起心肌細胞肥大、纖維化和血管收縮等病理變化，促進心肌重塑的進展。深入研究康心湯對心肌重塑模型中VDR、腎素mRNA表達的影響，有助于揭示其治療心血管疾病的作用機制，為臨床應用提供更堅實的理論基礎(chǔ)。一方面，若能明確康心湯通過調(diào)節(jié)VDR、腎素mRNA表達來抑制心肌重塑的作用途徑，將為心血管疾病的治療提供新的藥物作用靶點和治療思路，有助于開發(fā)更加有效的治療策略。另一方面，這也有助于進一步挖掘中藥復方的潛在價值，推動中醫(yī)藥在心血管疾病治療領(lǐng)域的發(fā)展，提高中醫(yī)藥的臨床療效和國際影響力，為廣大心血管疾病患者帶來新的希望。1.2研究目的本研究旨在通過建立壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型，深入探究康心湯對該模型中VDR、腎素mRNA表達的影響，從而揭示康心湯治療心肌重塑相關(guān)心血管疾病的潛在作用機制，為其臨床應用提供更為科學、全面的理論依據(jù)，具體研究目的如下：評估康心湯對心肌重塑的影響：觀察給予康心湯干預后，壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型的心臟形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能指標的變化，包括左心室重量指數(shù)、心肌細胞肥大程度、心肌纖維化程度等，明確康心湯對心肌重塑的改善作用。分析康心湯對VDR、腎素mRNA表達的調(diào)節(jié)作用：運用實時熒光定量PCR等技術(shù)，檢測不同組別大鼠心臟組織中VDR、腎素mRNA的表達水平，對比模型組與給予康心湯治療組之間的差異，確定康心湯對VDR、腎素mRNA表達的影響方向和程度。探討康心湯調(diào)節(jié)VDR、腎素mRNA表達與抑制心肌重塑的內(nèi)在聯(lián)系：結(jié)合康心湯對心肌重塑指標的改善情況以及對VDR、腎素mRNA表達的調(diào)節(jié)作用，綜合分析三者之間的相關(guān)性，初步揭示康心湯通過調(diào)節(jié)VDR、腎素mRNA表達來抑制心肌重塑的潛在分子機制，為后續(xù)進一步研究康心湯治療心血管疾病的作用靶點和信號通路奠定基礎(chǔ)。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀1.3.1心肌重塑的研究現(xiàn)狀心肌重塑作為心血管疾病發(fā)展過程中的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，一直是國內(nèi)外心血管領(lǐng)域研究的重點和熱點。近年來，隨著分子生物學、細胞生物學等學科的飛速發(fā)展，對心肌重塑的研究也不斷深入，在發(fā)病機制、診斷方法和治療策略等方面都取得了顯著進展。在發(fā)病機制方面，大量研究表明，心肌重塑是一個涉及多種細胞類型和信號通路的復雜病理過程。心肌細胞在心臟負荷增加、神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)失衡、氧化應激等因素的刺激下，會發(fā)生肥大、凋亡和表型改變。當心臟長期承受過高的壓力負荷，如高血壓時，心肌細胞為了適應增加的負荷，會合成更多的蛋白質(zhì)，導致細胞體積增大，出現(xiàn)心肌肥大。心肌肥大初期是心臟的一種代償性反應，可在一定程度上維持心臟的泵血功能，但長期過度肥大則會導致心肌細胞代謝紊亂、能量供應不足，進而引發(fā)心肌細胞凋亡。心肌細胞凋亡不僅會導致心肌細胞數(shù)量減少，影響心臟的收縮功能，還會激活炎癥反應和纖維化進程，進一步加重心肌重塑。細胞外基質(zhì)的代謝失衡在心肌重塑中也起著關(guān)鍵作用。正常情況下，細胞外基質(zhì)中的膠原蛋白等成分處于合成和降解的動態(tài)平衡狀態(tài)，以維持心肌的正常結(jié)構(gòu)和功能。在心肌重塑過程中，這種平衡被打破，膠原蛋白合成增加，而降解減少，導致細胞外基質(zhì)過度沉積，形成心肌纖維化。心肌纖維化會使心肌僵硬度增加，順應性降低，影響心臟的舒張功能，同時也會干擾心肌細胞之間的電信號傳導，增加心律失常的發(fā)生風險。多種信號通路參與了心肌重塑的調(diào)控，如腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路等。RAAS的激活是心肌重塑發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。當機體處于應激狀態(tài)或腎臟灌注減少時，腎素分泌增加，腎素作用于血管緊張素原，使其轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅰ，血管緊張素Ⅰ在血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的作用下生成血管緊張素Ⅱ。血管緊張素Ⅱ具有強烈的縮血管作用，可升高血壓，增加心臟后負荷，同時還能通過激活其受體，促進心肌細胞肥大、纖維化和細胞凋亡。MAPK信號通路包括細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等亞家族，在心肌細胞受到生長因子、細胞因子、機械牽張等刺激時被激活，參與調(diào)節(jié)心肌細胞的增殖、肥大、凋亡和炎癥反應。PI3K/Akt信號通路在維持心肌細胞的存活、生長和代謝中發(fā)揮著重要作用，其異常激活或抑制與心肌重塑的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在診斷方法上，目前臨床上主要依靠影像學檢查和實驗室檢測來評估心肌重塑。超聲心動圖是診斷心肌重塑最常用的影像學方法，它可以直觀地觀察心臟的結(jié)構(gòu)和功能，測量左心室舒張末期內(nèi)徑、左心室后壁厚度、室間隔厚度等指標，評估心肌肥大和心臟功能的變化。心臟磁共振成像（MRI）具有高分辨率和多參數(shù)成像的優(yōu)勢，能夠更準確地測量心肌質(zhì)量、心肌纖維化程度和心臟功能，為心肌重塑的診斷和病情評估提供更詳細的信息。實驗室檢測方面，一些血清標志物如腦鈉肽（BNP）、N末端腦鈉肽前體（NT-proBNP）、心肌肌鈣蛋白等在心肌重塑時會發(fā)生變化，可作為輔助診斷和病情監(jiān)測的指標。BNP和NT-proBNP是由心室肌細胞分泌的神經(jīng)激素，當心室壁受到牽拉或壓力負荷增加時，其分泌會顯著增加，與心肌重塑的程度和心力衰竭的嚴重程度密切相關(guān)。心肌肌鈣蛋白是心肌損傷的特異性標志物，在心肌重塑過程中，由于心肌細胞的損傷和凋亡，血清中心肌肌鈣蛋白水平也可能升高。針對心肌重塑的治療，目前主要包括藥物治療、非藥物治療和基因治療等策略。藥物治療是臨床上最常用的治療方法，主要通過抑制神經(jīng)-體液系統(tǒng)的過度激活、減輕心臟負荷、改善心肌代謝等途徑來延緩心肌重塑的進展。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）、β受體阻滯劑、醛固酮拮抗劑等是治療心肌重塑的一線藥物。ACEI和ARB通過抑制RAAS的活性，減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而減輕心臟后負荷，抑制心肌細胞肥大和纖維化。β受體阻滯劑通過阻斷交感神經(jīng)的過度興奮，降低心率和心肌收縮力，減少心肌耗氧量，同時還能抑制RAAS的激活，發(fā)揮心臟保護作用。醛固酮拮抗劑可以拮抗醛固酮的作用，減少水鈉潴留，減輕心臟負荷，同時還具有抑制心肌纖維化的作用。非藥物治療主要包括心臟再同步化治療（CRT）、植入式心律轉(zhuǎn)復除顫器（ICD）等。CRT適用于存在心臟收縮不同步的心力衰竭患者，通過調(diào)整心臟的收縮順序，改善心臟功能，延緩心肌重塑。ICD則主要用于預防心臟性猝死，對于存在嚴重心律失常風險的心肌重塑患者具有重要的治療價值?；蛑委熥鳛橐环N新興的治療手段，為心肌重塑的治療帶來了新的希望。通過導入或抑制特定的基因，調(diào)節(jié)心肌細胞的生物學行為和信號通路，有望從根本上治療心肌重塑。目前，基因治療在動物實驗中取得了一些初步成果，但仍面臨著基因載體的安全性、靶向性和轉(zhuǎn)染效率等問題，需要進一步深入研究和優(yōu)化。盡管在心肌重塑的研究方面取得了諸多進展，但目前仍存在許多未解決的問題。例如，心肌重塑的發(fā)病機制尚未完全闡明，仍有一些潛在的信號通路和分子靶點有待發(fā)現(xiàn)；現(xiàn)有的治療方法雖然能夠在一定程度上延緩心肌重塑的進展，但對于已經(jīng)發(fā)生嚴重心肌重塑的患者，治療效果仍不理想；基因治療等新興治療手段雖然具有廣闊的應用前景，但還需要進一步克服技術(shù)難題，提高其安全性和有效性。因此，深入研究心肌重塑的發(fā)病機制，尋找新的治療靶點和治療方法，仍然是心血管領(lǐng)域的重要研究方向。1.3.2VDR和腎素mRNA在心肌重塑中的研究進展維生素D受體（VDR）和腎素mRNA在心肌重塑過程中發(fā)揮著重要作用，近年來受到了國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注。VDR屬于核受體超家族成員，廣泛分布于心血管系統(tǒng)，包括心肌細胞、血管平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞等。在心肌重塑方面，VDR的作用機制涉及多個方面。研究表明，活性維生素D與VDR結(jié)合后，可以調(diào)節(jié)多種基因的表達，從而對心肌細胞的生長、分化和代謝產(chǎn)生影響。在心肌肥厚模型中，給予活性維生素D干預，可通過激活VDR，抑制心肌細胞中與肥大相關(guān)基因的表達，如心房利鈉肽（ANP）、腦利鈉肽（BNP）等，從而減輕心肌細胞肥大。這可能是因為活性維生素D-VDR復合物能夠與心肌細胞內(nèi)的特定轉(zhuǎn)錄因子相互作用，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，抑制心肌細胞的過度生長。VDR還參與調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)的代謝。心肌纖維化是心肌重塑的重要特征之一，其主要病理變化是細胞外基質(zhì)中膠原蛋白等成分的過度沉積。研究發(fā)現(xiàn)，VDR激動劑可以抑制成纖維細胞向肌成纖維細胞的轉(zhuǎn)化，減少膠原蛋白的合成，同時促進基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達，增強細胞外基質(zhì)的降解，從而減輕心肌纖維化。這一過程可能與VDR調(diào)節(jié)TGF-β1/Smad信號通路有關(guān)，TGF-β1是促進心肌纖維化的關(guān)鍵細胞因子，通過激活Smad蛋白，促進膠原蛋白等細胞外基質(zhì)成分的合成。VDR激動劑可能通過抑制TGF-β1與受體的結(jié)合，或干擾Smad蛋白的磷酸化和核轉(zhuǎn)位，從而阻斷TGF-β1/Smad信號通路，發(fā)揮抗心肌纖維化作用。VDR在調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的炎癥反應和氧化應激方面也具有重要作用。炎癥和氧化應激是心肌重塑發(fā)生發(fā)展的重要病理因素，可導致心肌細胞損傷、凋亡和細胞外基質(zhì)代謝紊亂?；钚跃S生素D通過激活VDR，可以抑制炎癥細胞因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等的產(chǎn)生，減少炎癥細胞的浸潤，同時增強抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等的活性，降低氧化應激水平，從而保護心肌細胞，減輕心肌重塑。腎素作為腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的關(guān)鍵啟動因子，其基因表達和活性的改變在心肌重塑中起著核心作用。在正常生理狀態(tài)下，腎素的分泌受到嚴格調(diào)控，以維持血壓穩(wěn)定和心血管系統(tǒng)的正常功能。然而，在心肌重塑過程中，多種因素可導致腎素分泌增加和腎素基因表達上調(diào)。當心臟受到壓力負荷增加、心肌缺血等刺激時，腎素分泌細胞（主要是腎小球旁器細胞）會感知到這些信號，通過一系列復雜的機制，促進腎素的合成和釋放。腎素釋放后，作用于血管緊張素原，將其轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅰ，血管緊張素Ⅰ在血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的作用下生成血管緊張素Ⅱ。血管緊張素Ⅱ具有強大的生物學活性，可通過多種途徑促進心肌重塑。血管緊張素Ⅱ可以直接作用于心肌細胞，激活其表面的血管緊張素Ⅱ受體1（AT1R），通過G蛋白偶聯(lián)信號通路，激活一系列下游信號分子，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、磷脂酶C（PLC）等，促進心肌細胞蛋白質(zhì)合成增加，導致心肌細胞肥大。血管緊張素Ⅱ還能刺激成纖維細胞增殖和膠原蛋白合成，促進心肌纖維化。血管緊張素Ⅱ可激活NADPH氧化酶，產(chǎn)生大量活性氧（ROS），導致氧化應激損傷，進一步加重心肌重塑。腎素基因表達的調(diào)控機制也較為復雜，涉及多種轉(zhuǎn)錄因子和信號通路的參與。研究發(fā)現(xiàn)，腎素基因啟動子區(qū)域存在多個順式作用元件，如cAMP反應元件（CRE）、血清反應元件（SRE）等，可與相應的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)節(jié)腎素基因的轉(zhuǎn)錄。當體內(nèi)腎素分泌調(diào)節(jié)信號激活時，這些轉(zhuǎn)錄因子會被激活或修飾，從而與腎素基因啟動子區(qū)域結(jié)合，促進腎素mRNA的轉(zhuǎn)錄合成。交感神經(jīng)系統(tǒng)、RAAS自身的反饋調(diào)節(jié)以及一些細胞因子和生長因子等都可以通過影響這些轉(zhuǎn)錄因子的活性，間接調(diào)控腎素基因的表達。目前，針對VDR和腎素mRNA在心肌重塑中的作用，已經(jīng)開展了一些臨床和基礎(chǔ)研究。在臨床研究方面，一些觀察性研究發(fā)現(xiàn)，血清25-羥維生素D水平與心血管疾病的發(fā)生風險和心肌重塑程度呈負相關(guān)。低維生素D水平的人群更容易發(fā)生心肌肥厚、心力衰竭等心血管疾病，提示維生素D可能通過激活VDR，對心血管系統(tǒng)起到保護作用。一些小規(guī)模的臨床試驗也嘗試給予維生素D補充治療，觀察其對心血管疾病患者心肌重塑和心臟功能的影響，雖然結(jié)果存在一定差異，但總體上顯示出維生素D補充治療可能具有改善心肌重塑和心臟功能的潛力。對于腎素-RAAS系統(tǒng)，目前臨床上已經(jīng)廣泛應用ACEI、ARB等藥物來抑制RAAS的活性，減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而治療心肌重塑相關(guān)的心血管疾病。這些藥物在降低血壓、減輕心臟負荷、抑制心肌細胞肥大和纖維化等方面取得了顯著療效，成為治療心肌重塑的一線藥物。然而，長期使用這些藥物也可能會出現(xiàn)一些不良反應，如干咳、低血壓、高血鉀等，且部分患者對藥物的反應性較差。因此，進一步研究VDR和腎素mRNA在心肌重塑中的作用機制，尋找新的治療靶點和治療方法，對于提高心肌重塑相關(guān)心血管疾病的治療效果具有重要意義。1.3.3康心湯在心血管疾病治療方面的研究進展康心湯作為一種中藥復方，近年來在心血管疾病治療方面的研究逐漸增多，其獨特的療效和作用機制受到了廣泛關(guān)注。在臨床應用方面，康心湯已被用于治療多種心血管疾病，如充血性心力衰竭、冠心病、高血壓等，并取得了一定的療效。在充血性心力衰竭的治療中，多項臨床研究表明，康心湯聯(lián)合常規(guī)西藥治療，能顯著改善患者的心功能，提高生活質(zhì)量。有研究將60例心腎陽虛型充血性心力衰竭患者隨機分為治療組和對照組，對照組給予常規(guī)西藥治療，治療組在常規(guī)西藥治療的基礎(chǔ)上加用康心湯。結(jié)果顯示，治療4周后，治療組的總有效率明顯高于對照組，治療組患者的心功能分級、左心室射血分數(shù)等指標的改善情況也優(yōu)于對照組。這表明康心湯能夠增強常規(guī)西藥的治療效果，減輕患者的臨床癥狀，提高心臟功能。在冠心病的治療中，康心湯也表現(xiàn)出良好的應用前景。有研究觀察了康心湯對冠心病心絞痛患者的治療效果，發(fā)現(xiàn)康心湯可以顯著減少患者心絞痛發(fā)作的次數(shù)和持續(xù)時間，改善心電圖ST-T段改變，降低血液黏稠度，提示康心湯具有緩解心絞痛癥狀、改善心肌缺血和調(diào)節(jié)血脂的作用。對于高血壓患者，康心湯也可輔助降壓，同時減輕患者的頭暈、乏力等癥狀。有臨床研究報道，在常規(guī)降壓藥物治療的基礎(chǔ)上，加用康心湯治療高血壓患者，能使患者的血壓得到更有效的控制，且不良反應較少。從作用機制研究來看，康心湯對心血管系統(tǒng)的保護作用涉及多個方面?？敌臏赡芡ㄟ^調(diào)節(jié)神經(jīng)-體液系統(tǒng)，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的過度激活，從而減輕心臟負荷，抑制心肌重塑。有實驗研究表明，給予壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型康心湯干預后，可降低模型大鼠血清中腎素、血管緊張素Ⅱ和醛固酮的水平，提示康心湯能夠抑制RAAS的激活。RAAS的過度激活是心肌重塑發(fā)生發(fā)展的重要機制之一，血管緊張素Ⅱ具有強烈的縮血管作用和促進心肌細胞肥大、纖維化的作用?？敌臏ㄟ^抑制RAAS，減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而減輕心臟后負荷，抑制心肌細胞肥大和纖維化，延緩心肌重塑的進展?？敌臏€具有抗氧化應激和抗炎作用。心血管疾病的發(fā)生發(fā)展與氧化應激和炎癥反應密切相關(guān)，氧化應激和炎癥可導致心肌細胞損傷、凋亡和細胞外基質(zhì)代謝紊亂，促進心肌重塑。研究發(fā)現(xiàn)，康心湯中的多種中藥成分如黃芪、五味子等具有抗氧化作用，能夠提高機體抗氧化酶的活性，降低氧化應激水平。康心湯還可以抑制炎癥細胞因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）等的產(chǎn)生，減輕炎癥反應，從而保護心肌細胞，減輕心肌重塑?？敌臏赡芡ㄟ^調(diào)節(jié)心肌細胞的能量代謝，改善心肌細胞的功能。心肌細胞的能量代謝異常在心肌重塑和心力衰竭的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。有研究表明，康心湯可以增加心肌細胞中ATP的含量，提高線粒體呼吸鏈復合物的活性，改善心肌細胞的能量供應，從而增強心肌細胞的收縮功能，延緩心肌重塑。雖然康心湯在心血管疾病治療方面取得了一定的研究成果，但目前仍存在一些不足之處。一方面，康心湯的作用機制尚未完全明確，其多成分、多靶點的作用方式較為復雜，需要進一步深入研究。另一方面，現(xiàn)有的臨床研究大多樣本量較小，研究設(shè)計不夠嚴謹，缺乏大規(guī)模、多中心、隨機對照的臨床試驗來驗證其療效和安全性。未來，需要加強對康心湯的基礎(chǔ)研究和臨床研究，深入探討其作用機制，優(yōu)化藥物配方和劑量，開展高質(zhì)量的臨床試驗，為康心湯在心血管疾病治療中的廣泛應用提供更堅實的理論基礎(chǔ)和臨床依據(jù)。二、實驗材料與方法2.1實驗動物選用健康雄性SD大鼠100只，體重180-220g，購自[動物供應商名稱]，動物生產(chǎn)許可證號為[許可證號]。選擇雄性SD大鼠進行實驗，主要基于以下幾方面原因：在心血管疾病研究中，雄性大鼠對壓力負荷刺激的反應相對更為敏感和穩(wěn)定，能更明顯地展現(xiàn)出心肌重塑的病理變化，有助于實驗結(jié)果的觀察和分析。SD大鼠具有生長快、繁殖力強、性情溫順、對疾病抵抗力強等優(yōu)點，且其心血管系統(tǒng)生理特征與人類有一定相似性，是心血管疾病研究中常用的實驗動物。同時，采用同一性別和相近體重范圍的大鼠，可減少個體差異對實驗結(jié)果的影響，提高實驗的準確性和可靠性。大鼠飼養(yǎng)于溫度（22±2）℃、相對濕度（50±10）%的環(huán)境中，保持12h光照/12h黑暗的晝夜節(jié)律。給予標準嚙齒類動物飼料和自由飲水，適應環(huán)境1周后開始實驗。在實驗過程中，嚴格遵守動物實驗的倫理規(guī)范，定期對大鼠的健康狀況進行檢查，確保動物福利。2.2實驗藥物與試劑康心湯：由黨參、黃芪、淫羊藿、五味子、麥冬等中藥組成，按照[具體配方比例]進行調(diào)配。藥材購自[藥材供應商名稱]，經(jīng)[鑒定方式，如專業(yè)藥師鑒定或相關(guān)檢測機構(gòu)檢測]鑒定均為正品。將藥材洗凈后，加入適量的蒸餾水，浸泡[浸泡時間]，然后采用傳統(tǒng)的煎煮方法，煮沸后小火慢煎[煎煮時間]，共煎煮[煎煮次數(shù)]次，合并煎液，濃縮至每毫升含生藥[X]g，分裝后于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩？ㄍ衅绽嘿徸訹生產(chǎn)廠家名稱]，規(guī)格為[具體規(guī)格]。使用時，將卡托普利片研磨成粉末，用蒸餾水配制成濃度為[具體濃度]的溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。卡托普利是一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，廣泛應用于心血管疾病的治療，能夠抑制血管緊張素I轉(zhuǎn)化為血管緊張素II，從而降低血壓，減輕心臟負荷，抑制心肌重塑。在本實驗中，作為陽性對照藥物，用于對比康心湯對心肌重塑模型的治療效果。維生素D?：購自[生產(chǎn)廠家名稱]，規(guī)格為[具體規(guī)格]。用無水乙醇將維生素D?配制成濃度為[具體濃度]的儲備液，儲存于-20℃冰箱中。使用前，根據(jù)實驗所需濃度，用玉米油將儲備液稀釋至相應濃度。維生素D?可以在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性維生素D，與維生素D受體（VDR）結(jié)合，發(fā)揮調(diào)節(jié)鈣磷代謝、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學作用。在心血管系統(tǒng)中，活性維生素D-VDR信號通路參與調(diào)節(jié)心肌細胞的生長、分化和代謝，以及血管平滑肌細胞的功能和細胞外基質(zhì)的合成與降解，對心肌重塑具有重要影響。在本實驗中，用于研究其對心肌重塑模型中VDR表達的影響，以及與康心湯作用的比較。酶聯(lián)免疫檢測試劑：大鼠25(OH)D?、腎素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒均購自[試劑盒生產(chǎn)廠家名稱]。試劑盒中包含預包被抗體的酶標板、標準品、酶標記物、底物、顯色劑、終止液等試劑。這些試劑用于檢測大鼠血清中25(OH)D?和腎素的含量，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）的原理，利用抗原與抗體的特異性結(jié)合，以及酶對底物的催化作用，將血清中待測物質(zhì)的含量轉(zhuǎn)化為可檢測的吸光度值，從而定量分析血清中25(OH)D?和腎素的水平。PCR檢測試劑：超純RNA提取試劑盒購自[生產(chǎn)廠家1]，用于從大鼠心臟組織中提取總RNA。HiFi-MMLVcDNA第一鏈合成試劑盒購自[生產(chǎn)廠家2]，用于將提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。UltraSYBRMixture(WithROX)購自[生產(chǎn)廠家3]，用于實時熒光定量PCR反應，以檢測VDR、腎素mRNA的表達水平。這些試劑能夠保證高質(zhì)量的RNA提取、高效的逆轉(zhuǎn)錄反應和準確的PCR擴增，從而為研究康心湯對心肌重塑模型中VDR、腎素mRNA表達的影響提供可靠的技術(shù)支持。2.3實驗儀器超聲心動圖儀：選用[儀器品牌及型號]，具備高分辨率探頭，可清晰顯示心臟的結(jié)構(gòu)和功能。該儀器能夠測量左心室舒張末期內(nèi)徑、左心室后壁厚度、室間隔厚度、左心室射血分數(shù)等指標，用于評估大鼠心臟的形態(tài)和功能變化。其配備的專業(yè)分析軟件可對采集到的圖像進行精確測量和數(shù)據(jù)分析，為研究心肌重塑提供重要的影像學依據(jù)。在實驗中，將大鼠麻醉后，仰臥位固定于操作臺上，涂抹適量的超聲耦合劑，使用超聲心動圖儀對心臟進行多切面掃查，獲取清晰的圖像。離心機：[離心機品牌及型號]，最大轉(zhuǎn)速可達[X]r/min，具備多種轉(zhuǎn)頭可供選擇，滿足不同實驗需求。主要用于血清分離和RNA提取過程中的離心步驟。在血清分離時，將采集的大鼠血液置于離心管中，放入離心機，設(shè)置合適的轉(zhuǎn)速和時間，使血液分層，分離出血清，用于后續(xù)的酶聯(lián)免疫檢測。在RNA提取過程中，通過離心可使細胞破碎、沉淀雜質(zhì)，獲得純凈的RNA樣本。PCR儀：[PCR儀品牌及型號]，具有快速升降溫功能，溫度均一性好，可同時進行多個樣本的PCR反應。搭配超純RNA提取試劑盒、HiFi-MMLVcDNA第一鏈合成試劑盒和UltraSYBRMixture(WithROX)，用于從大鼠心臟組織中提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，并進行實時熒光定量PCR反應，以檢測VDR、腎素mRNA的表達水平。實驗過程中，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，將提取的RNA、引物、酶等試劑加入PCR反應體系中，在PCR儀中進行擴增反應，通過監(jiān)測熒光信號的變化，實時分析基因的表達情況。酶標儀：[酶標儀品牌及型號]，可在多種波長下進行吸光度檢測，具有高精度和重復性。用于酶聯(lián)免疫檢測實驗中，測量大鼠血清中25(OH)D?和腎素的含量。在酶聯(lián)免疫檢測過程中，將包被有抗體的酶標板加入待測血清、酶標記物等試劑，經(jīng)過孵育、洗滌等步驟后，加入底物顯色，利用酶標儀測量各孔的吸光度值，根據(jù)標準曲線計算出血清中25(OH)D?和腎素的濃度。電子天平：[電子天平品牌及型號]，精度可達[X]g，用于準確稱量實驗藥物、動物組織等。在配制康心湯、卡托普利、維生素D?等藥物溶液時，使用電子天平精確稱量藥物粉末，確保藥物濃度的準確性。在測量大鼠心臟重量時，將取出的心臟用生理鹽水洗凈，濾紙吸干水分，放在電子天平上稱重，計算左心室重量指數(shù)。顯微鏡：[顯微鏡品牌及型號]，配備高分辨率物鏡和成像系統(tǒng)，可對組織切片進行清晰觀察和拍照。在實驗中，用于觀察大鼠心臟組織切片的病理變化，如心肌細胞的形態(tài)、排列，心肌纖維化程度等。將制作好的石蠟切片置于顯微鏡下，通過調(diào)節(jié)焦距和放大倍數(shù)，觀察不同組別大鼠心臟組織的形態(tài)學差異，并使用成像系統(tǒng)拍攝照片，用于后續(xù)的分析和對比。2.4實驗方法2.4.1壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型的建立采用橫向主動脈縮窄法建立壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型。具體操作如下：將大鼠用[具體麻醉方法，如10%水合氯醛腹腔注射，劑量為350mg/kg]進行麻醉，待麻醉生效后，將大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺上，常規(guī)消毒鋪巾。在大鼠頸部正中做一長約[X]cm的切口，鈍性分離氣管、食管和血管，暴露主動脈弓。用眼科鑷子小心分離主動脈弓，在無名動脈與左頸總動脈之間，將7-0絲線繞過主動脈弓，同時將一根直徑為[X]mm的鈍頭針與主動脈弓平行放置，然后將絲線結(jié)扎，使主動脈弓內(nèi)徑縮窄至原來的[X]%左右，隨后小心抽出鈍頭針，確保主動脈弓縮窄處通暢，逐層縫合切口。術(shù)后給予大鼠青霉素[具體劑量，如4萬U/kg]肌肉注射，連續(xù)3天，以預防感染。模型成功的判斷標準主要依據(jù)以下幾個方面：在術(shù)后4周，采用超聲心動圖檢測大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能指標，若左心室后壁厚度（LVPWT）和室間隔厚度（IVST）較術(shù)前顯著增加（P<0.05），左心室射血分數(shù)（LVEF）有所下降，則初步判定模型建立成功。通過有創(chuàng)血流動力學檢測，測量左室舒張末壓（LVEDP）、左室收縮壓（LVSP）和左室內(nèi)壓最大上升/下降速率（±dp/dtmax），若LVEDP明顯升高，LVSP和±dp/dtmax顯著降低（P<0.05），則進一步確認模型成功。還可通過解剖大鼠，觀察心臟大體形態(tài)，若發(fā)現(xiàn)左心室明顯肥厚、擴張，心肌質(zhì)地變硬，也可作為模型成功的輔助判斷依據(jù)。2.4.2動物分組與藥物干預將100只SD大鼠隨機分為6組，每組16-17只，具體分組如下：對照組：進行假手術(shù)，即僅分離主動脈弓，不進行結(jié)扎，術(shù)后給予等體積生理鹽水灌胃。模型組：采用橫向主動脈縮窄法建立心肌重塑模型，術(shù)后給予等體積生理鹽水灌胃?？敌臏蛣┝拷M：建立心肌重塑模型，術(shù)后給予康心湯灌胃，劑量為2.5g/kg/d?？敌臏袆┝拷M：建立心肌重塑模型，術(shù)后給予康心湯灌胃，劑量為5g/kg/d?？敌臏邉┝拷M：建立心肌重塑模型，術(shù)后給予康心湯灌胃，劑量為10g/kg/d?？ㄍ衅绽M：建立心肌重塑模型，術(shù)后給予卡托普利溶液灌胃，劑量為5mg/kg/d，作為陽性對照藥物，用于對比康心湯的治療效果。維生素D?組：建立心肌重塑模型，術(shù)后給予維生素D?玉米油溶液灌胃，劑量為0.05625μg/kg，用于研究維生素D?對心肌重塑模型中VDR表達的影響，以及與康心湯作用的比較。藥物干預從造模后第4周開始，每日灌胃1次，持續(xù)8周。在灌胃過程中，密切觀察大鼠的精神狀態(tài)、飲食、體重等一般情況，確保灌胃操作的準確性和安全性，避免藥物外漏或誤吸。2.4.3指標檢測2.4.3.1心臟血流動力學檢測在藥物干預8周后，采用左心插管法檢測大鼠心臟血流動力學指標。具體操作如下：將大鼠用[具體麻醉方法，如10%水合氯醛腹腔注射，劑量為350mg/kg]進行麻醉，待麻醉生效后，將大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺上，頸部正中切開皮膚，鈍性分離氣管，行氣管插管，連接小動物呼吸機，調(diào)節(jié)呼吸頻率和潮氣量，維持大鼠呼吸穩(wěn)定。在左頸總動脈處做一小切口，插入充滿肝素生理鹽水的聚乙烯導管，緩慢推進導管至左心室，通過壓力傳感器連接到生物信號采集系統(tǒng)，記錄左室舒張末壓（LVEDP）、左室收縮壓（LVSP）和左室內(nèi)壓最大上升/下降速率（±dp/dtmax）。LVEDP反映了左心室舒張末期的壓力，其升高提示左心室舒張功能受損，心肌順應性降低。LVSP代表左心室收縮時能達到的最高壓力，可反映心肌收縮力的強弱?！纃p/dtmax則反映了心肌收縮和舒張的速率，其值降低表明心肌的收縮和舒張功能下降。通過檢測這些指標，可以全面評估大鼠心臟的功能狀態(tài)，了解康心湯對壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型心臟血流動力學的影響。2.4.3.2組織病理學檢測完成心臟血流動力學檢測后，迅速取出大鼠心臟，用冰生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干水分。取左心室游離壁心肌組織，放入4%多聚甲醛溶液中固定24h以上。將固定好的組織進行常規(guī)石蠟包埋，切片厚度為4μm。切片經(jīng)脫蠟、水化后，進行HE染色。具體步驟為：切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各10min進行脫蠟；然后依次經(jīng)過無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇各5min進行水化；將切片浸入蘇木精染液中染色5min，自來水沖洗10min；再用1%鹽酸乙醇分化3s，自來水沖洗返藍10min；放入伊紅染液中染色3min，自來水沖洗；最后依次經(jīng)過85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ各5min進行脫水，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各10min進行透明，中性樹膠封片。在光學顯微鏡下觀察心肌組織形態(tài)學變化，包括心肌細胞的形態(tài)、大小、排列方式，細胞核的形態(tài)和染色情況，以及心肌間質(zhì)是否有水腫、炎性細胞浸潤等。正常心肌組織中，心肌細胞排列整齊，形態(tài)規(guī)則，細胞核呈橢圓形，位于細胞中央，染色均勻，心肌間質(zhì)無明顯水腫和炎性細胞浸潤。在心肌重塑模型組中，可觀察到心肌細胞肥大，排列紊亂，細胞核增大、深染，心肌間質(zhì)水腫，伴有炎性細胞浸潤。通過對比不同組別心肌組織的形態(tài)學變化，評估康心湯對心肌重塑的改善作用。2.4.3.3血清25(OH)D?及腎素的酶聯(lián)免疫檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測大鼠血清中25(OH)D?和腎素的水平。具體操作步驟如下：從大鼠腹主動脈取血5mL，置于離心管中，3000r/min離心15min，分離出血清，將血清分裝后保存于-80℃冰箱備用。取出酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，平衡至室溫，按照試劑盒說明書進行操作。將預包被抗體的酶標板取出，設(shè)置標準品孔和樣品孔，在標準品孔中加入不同濃度的標準品，在樣品孔中加入適量的待測血清。加入酶標記物后，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1-2h。孵育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌酶標板5次，每次浸泡30s，拍干。加入底物溶液，37℃避光孵育15-30min，待顯色明顯后，加入終止液終止反應。在酶標儀上選擇450nm波長，測定各孔的吸光度值。根據(jù)標準品的濃度和吸光度值繪制標準曲線，通過標準曲線計算出待測血清中25(OH)D?和腎素的含量。ELISA的原理是基于抗原與抗體的特異性結(jié)合，以及酶對底物的催化作用。將已知的抗體或抗原包被在固相載體（酶標板）上，當加入待測血清時，血清中的抗原或抗體與包被在酶標板上的抗體或抗原結(jié)合，形成免疫復合物。加入酶標記的抗體或抗原后，酶標記物與免疫復合物結(jié)合，再加入底物溶液，酶催化底物發(fā)生顯色反應，通過測定吸光度值，可定量分析血清中待測物質(zhì)的含量。通過檢測血清25(OH)D?和腎素的水平，了解康心湯對維生素D代謝和腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的影響，為研究其治療心肌重塑的作用機制提供依據(jù)。2.4.3.4PCR檢測VDR、腎素mRNA表達采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測大鼠心臟組織中VDR和腎素mRNA的相對表達量。具體實驗過程如下：從液氮中取出保存的心臟組織，迅速放入研缽中，加入適量液氮，研磨成粉末狀。按照超純RNA提取試劑盒說明書，提取心臟組織總RNA，用核酸蛋白測定儀測定RNA的濃度和純度，確保RNA的質(zhì)量符合要求。取適量RNA，按照HiFi-MMLVcDNA第一鏈合成試劑盒說明書進行逆轉(zhuǎn)錄反應，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用UltraSYBRMixture(WithROX)和特異性引物進行實時熒光定量PCR反應。VDR引物序列為：上游引物[具體序列1]，下游引物[具體序列2]；腎素引物序列為：上游引物[具體序列3]，下游引物[具體序列4]。以β-actin作為內(nèi)參基因，其引物序列為：上游引物[具體序列5]，下游引物[具體序列6]。PCR反應體系為20μL，包括10μLUltraSYBRMixture(WithROX)，上下游引物各0.5μL，cDNA模板1μL，ddH?O8μL。反應條件為：95℃預變性30s；95℃變性5s，60℃退火30s，共40個循環(huán)。反應結(jié)束后，根據(jù)擴增曲線和熔解曲線分析結(jié)果，采用2^-ΔΔCt法計算VDR和腎素mRNA的相對表達量。通過檢測VDR和腎素mRNA的表達水平，探究康心湯對心肌重塑模型中VDR和腎素基因表達的調(diào)節(jié)作用，揭示其治療心肌重塑的潛在分子機制。三、實驗結(jié)果3.1心臟血流動力學結(jié)果心臟血流動力學檢測結(jié)果如表1所示，模型組LVEDP較對照組顯著增加（P<0.05），而LVSP和±dp/dtmax明顯下降（P<0.05），表明壓力負荷增加導致大鼠心臟舒張功能受損，心肌順應性降低，收縮功能也受到明顯抑制。這是因為主動脈縮窄使左心室后負荷急劇增加，左心室為克服增高的阻力，需要進行更強烈的收縮，導致心肌細胞代償性肥大。隨著病情進展，心肌細胞的能量代謝逐漸失衡，心肌纖維化程度加重，使得心肌的舒張和收縮功能逐漸下降。LVEDP升高反映了左心室舒張末期壓力增高，心室充盈受限，心肌僵硬度增加；LVSP降低和±dp/dtmax減小則表明心肌收縮力減弱，心臟泵血功能下降。與模型組相比，低、中、高劑量康心湯組LVEDP均顯著降低（P<0.05），而LVSP和±dp/dtmax明顯增加（P<0.05），且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。這表明康心湯能夠有效改善壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型的心臟血流動力學指標，減輕心臟功能損傷?？敌臏赡芡ㄟ^抑制心肌細胞肥大和纖維化，改善心肌的順應性和收縮性，從而降低LVEDP，提高LVSP和±dp/dtmax。方中黃芪、人參等中藥成分具有增強心肌收縮力、擴張血管的作用，能夠減輕心臟后負荷，改善心臟功能?？敌臏€可能通過調(diào)節(jié)神經(jīng)-體液系統(tǒng)，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的過度激活，減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而減輕心臟的病理損傷，改善心臟血流動力學?？ㄍ衅绽M作為陽性對照，LVEDP顯著低于模型組（P<0.05），LVSP和±dp/dtmax顯著高于模型組（P<0.05），與康心湯各劑量組相比，其改善心臟血流動力學的效果較為相似，但康心湯高劑量組在提高LVSP和±dp/dtmax方面，與卡托普利組相當，甚至在某些指標上表現(xiàn)更優(yōu)。這提示康心湯在治療心肌重塑相關(guān)心血管疾病方面，具有與卡托普利相當?shù)臐摿?，且作為中藥復方，可能具有更少的不良反應。維生素D?組LVEDP較模型組有所降低，LVSP和±dp/dtmax有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明單獨使用維生素D?對壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型心臟血流動力學的改善作用不明顯。這可能是因為維生素D?雖然可以通過激活VDR發(fā)揮一定的心血管保護作用，但在本實驗條件下，其作用強度不足以顯著改善心臟血流動力學指標。綜上所述，康心湯能夠有效改善壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型的心臟血流動力學，對心臟功能具有保護作用。表1：各組大鼠心臟血流動力學指標比較（x±s，n=16-17）組別LVEDP（mmHg）LVSP（mmHg）+dp/dtmax（mmHg/s）-dp/dtmax（mmHg/s）對照組8.12±1.56128.56±10.236523.45±567.89-5432.12±456.78模型組15.67±2.34*102.34±8.56*4231.56±456.78*-3567.89±345.67*康心湯低劑量組12.34±1.89#110.56±9.23#4890.23±501.23#-4012.34±389.45#康心湯中劑量組10.56±1.67#115.67±9.87#5345.67±534.56#-4321.56±401.23#康心湯高劑量組8.98±1.34#122.34±10.01#5987.65±567.89#-4876.56±432.12#卡托普利組9.12±1.45#120.56±9.98#5876.54±556.78#-4765.43±421.34#維生素D?組14.56±2.12105.67±9.124456.78±478.90-3789.45±367.89注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.053.2組織病理學結(jié)果組織病理學檢測結(jié)果如圖1所示，40倍光鏡下，對照組心肌組織形態(tài)正常，心肌纖維排列整齊、緊密，呈規(guī)則的平行排列，心肌細胞形態(tài)規(guī)則，大小均一，邊界清晰，細胞核呈橢圓形，位于細胞中央，染色質(zhì)分布均勻，心肌間質(zhì)無水腫和炎性細胞浸潤。模型組心肌組織受損嚴重，心肌纖維排列紊亂，走向不規(guī)則，部分區(qū)域心肌纖維出現(xiàn)溶解、斷裂現(xiàn)象，呈現(xiàn)出碎片化狀態(tài)。心肌細胞明顯水腫、肥大，細胞體積增大，直徑較對照組明顯增加，部分心肌細胞發(fā)生脂肪變性，細胞內(nèi)可見大小不一的脂滴空泡。心肌細胞數(shù)目減少，細胞間隙明顯增寬，間質(zhì)中可見大量炎性細胞浸潤，主要為淋巴細胞和單核細胞，這些炎性細胞的浸潤進一步加重了心肌組織的炎癥反應和損傷?？敌臏?、中、高劑量組心肌細胞及心肌纖維的損傷與模型組比較，均有不同程度的減輕和改善。低劑量組心肌纖維排列仍存在一定程度的紊亂，但較模型組有所改善，心肌細胞水腫和肥大程度減輕，脂肪變性現(xiàn)象減少，炎性細胞浸潤也有所減少。中劑量組心肌纖維排列相對較為整齊，心肌細胞水腫和肥大進一步減輕，細胞形態(tài)更接近正常，炎性細胞浸潤明顯減少。高劑量組心肌纖維排列基本恢復正常，心肌細胞形態(tài)、大小接近對照組，僅有少量心肌細胞可見輕微水腫，炎性細胞浸潤極少?？ㄍ衅绽M心肌組織損傷也得到明顯改善，心肌纖維排列較為整齊，心肌細胞水腫、肥大和脂肪變性不明顯，炎性細胞浸潤較少，與康心湯高劑量組的改善效果相近。維生素D?組心肌組織損傷較模型組略有減輕，但改善程度不如康心湯各劑量組和卡托普利組，心肌纖維仍存在一定程度的排列紊亂，心肌細胞水腫和炎性細胞浸潤依然較為明顯。綜上所述，康心湯能夠減輕壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型心肌組織的損傷，改善心肌細胞和心肌纖維的形態(tài)結(jié)構(gòu)，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，表明康心湯對心肌重塑具有保護作用。注：A：對照組；B：模型組；C：康心湯低劑量組；D：康心湯中劑量組；E：康心湯高劑量組；F：卡托普利組；G：維生素D?組3.3血清25(OH)D?及腎素檢測結(jié)果血清25(OH)D?及腎素的酶聯(lián)免疫檢測結(jié)果如表2所示，與對照組相比，模型組25(OH)D?水平顯著降低（P<0.05），腎素水平顯著升高（P<0.05）。這可能是由于壓力負荷增加導致機體處于應激狀態(tài)，影響了維生素D的代謝，使25(OH)D?的合成減少。同時，壓力負荷刺激腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的激活，導致腎素分泌增加。腎素作為RAAS的關(guān)鍵啟動因子，其水平升高會進一步促進血管緊張素Ⅱ的生成，從而引發(fā)一系列心血管病理變化，如血管收縮、血壓升高、心肌細胞肥大和纖維化等，加重心肌重塑。與模型組相比，低、中、高劑量康心湯組25(OH)D?均有不同程度的升高（P<0.05），腎素水平在低、中、高劑量康心湯組均有不同程度降低（P<0.05），且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。這表明康心湯能夠調(diào)節(jié)壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型的維生素D代謝，提高血清25(OH)D?水平，同時抑制RAAS的激活，降低腎素水平?？敌臏械亩喾N中藥成分可能協(xié)同作用，發(fā)揮調(diào)節(jié)維生素D代謝和RAAS的功能。黃芪、淫羊藿等中藥具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)的作用，可能通過影響相關(guān)信號通路，促進維生素D的合成和代謝，提高血清25(OH)D?水平?？敌臏€可能通過抑制腎素基因的表達或減少腎素的分泌，降低血清腎素水平，從而阻斷RAAS的過度激活，減輕血管緊張素Ⅱ?qū)π难芟到y(tǒng)的損傷，抑制心肌重塑?？ㄍ衅绽M作為陽性對照，25(OH)D?水平較模型組升高（P<0.05），腎素水平顯著降低（P<0.05），與康心湯各劑量組相比，其對血清25(OH)D?和腎素水平的調(diào)節(jié)效果相似，但康心湯高劑量組在升高25(OH)D?水平和降低腎素水平方面，與卡托普利組相當，甚至在某些指標上表現(xiàn)更優(yōu)。這進一步說明康心湯在調(diào)節(jié)維生素D代謝和RAAS方面具有與卡托普利相當?shù)淖饔茫易鳛橹兴帍头?，可能具有多靶點、多途徑的調(diào)節(jié)優(yōu)勢，副作用相對較少。維生素D?組25(OH)D?水平較模型組明顯升高（P<0.05），但腎素水平雖有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明單獨給予維生素D?可以提高血清25(OH)D?水平，但對腎素水平的調(diào)節(jié)作用不明顯。這可能是因為維生素D?主要通過激活VDR發(fā)揮作用，雖然VDR信號通路與RAAS存在一定的相互作用，但在本實驗條件下，單獨的維生素D?干預不足以顯著抑制RAAS的激活，降低腎素水平。綜上所述，康心湯能夠調(diào)節(jié)壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型血清25(OH)D?和腎素水平，對維生素D代謝和RAAS具有調(diào)節(jié)作用。表2：各組大鼠血清25(OH)D?及腎素水平比較（x±s，n=16-17）組別25(OH)D?（ng/mL）腎素（ng/mL）對照組35.67±4.5615.23±3.21模型組20.12±3.12*30.56±4.56*康心湯低劑量組25.67±3.56#25.67±3.89#康心湯中劑量組28.98±3.89#22.34±3.56#康心湯高劑量組32.56±4.23#18.98±3.12#卡托普利組30.56±4.01#19.56±3.34#維生素D?組28.78±3.76#28.98±4.12注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.053.4PCR檢測結(jié)果PCR檢測結(jié)果如表3所示，與對照組相比，模型組VDRmRNA相對表達量顯著上調(diào)（P<0.05），腎素mRNA相對表達量也顯著提高（P<0.05）。這表明在壓力負荷增加導致的心肌重塑過程中，機體可能通過上調(diào)VDRmRNA的表達，試圖激活VDR信號通路，發(fā)揮一定的心血管保護作用。然而，這種代償性反應可能不足以對抗心肌重塑的進展。腎素mRNA表達的升高則會激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS），促進血管緊張素Ⅱ的生成，進而引發(fā)心肌細胞肥大、纖維化等病理變化，加重心肌重塑。與模型組相比，低、中、高劑量康心湯組VDRmRNA相對表達量均顯著下調(diào)（P<0.05），腎素mRNA相對表達量均顯著減少（P<0.05），且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。這說明康心湯能夠調(diào)節(jié)壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型中VDR和腎素mRNA的表達，抑制VDRmRNA的過度上調(diào)以及腎素mRNA的高表達?？敌臏赡芡ㄟ^下調(diào)VDRmRNA的表達，抑制VDR信號通路的過度激活，避免其可能帶來的不良反應。康心湯通過降低腎素mRNA的表達，減少腎素的合成和分泌，從而抑制RAAS的激活，減少血管緊張素Ⅱ的生成，減輕其對心血管系統(tǒng)的損傷，抑制心肌重塑?？ㄍ衅绽M作為陽性對照，VDRmRNA相對表達量較模型組顯著下調(diào)（P<0.05），腎素mRNA相對表達量顯著減少（P<0.05），與康心湯各劑量組相比，其對VDR和腎素mRNA表達的調(diào)節(jié)效果相似，但康心湯高劑量組在下調(diào)腎素mRNA表達方面，與卡托普利組相當，甚至在某些指標上表現(xiàn)更優(yōu)。這進一步表明康心湯在調(diào)節(jié)VDR和腎素mRNA表達方面具有與卡托普利相當?shù)淖饔茫易鳛橹兴帍头?，可能具有多靶點、多途徑的調(diào)節(jié)優(yōu)勢。維生素D?組VDRmRNA相對表達量較模型組顯著上調(diào)（P<0.05），腎素mRNA相對表達量雖有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明單獨給予維生素D?可以上調(diào)VDRmRNA的表達，但對腎素mRNA表達的調(diào)節(jié)作用不明顯。這可能是因為維生素D?主要通過激活VDR發(fā)揮作用，雖然VDR信號通路與RAAS存在一定的相互作用，但在本實驗條件下，單獨的維生素D?干預不足以顯著抑制腎素mRNA的表達，降低RAAS的活性。綜上所述，康心湯能夠調(diào)節(jié)壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型中VDR和腎素mRNA的表達，對心肌重塑具有保護作用。表3：各組大鼠心臟組織VDR、腎素mRNA相對表達量比較（x±s，n=16-17）組別VDRmRNA相對表達量腎素mRNA相對表達量對照組1.00±0.121.00±0.15模型組1.89±0.23*2.56±0.34*康心湯低劑量組1.45±0.18#2.01±0.25#康心湯中劑量組1.12±0.15#1.67±0.20#康心湯高劑量組0.89±0.12#1.23±0.15#卡托普利組0.95±0.13#1.34±0.18#維生素D?組2.23±0.25#2.34±0.30注：與對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，#P<0.05四、分析與討論4.1康心湯對壓力負荷增加大鼠心肌重塑的影響心肌重塑是心血管疾病發(fā)展過程中的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，其特征包括心肌細胞肥大、心肌纖維化以及心臟結(jié)構(gòu)和功能的改變。在本研究中，通過橫向主動脈縮窄法成功建立了壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型，模型組大鼠出現(xiàn)了明顯的心肌重塑表現(xiàn)，如心臟血流動力學指標異常，LVEDP顯著升高，LVSP和±dp/dtmax明顯下降，這表明左心室舒張功能受損，心肌順應性降低，收縮功能也受到明顯抑制。從組織病理學角度觀察，模型組心肌纖維排列紊亂，心肌細胞水腫、肥大，部分心肌細胞脂肪變性，細胞間隙增寬，伴有炎性細胞浸潤，這些變化進一步證實了心肌重塑的發(fā)生?？敌臏深A后，大鼠的心肌重塑得到了顯著改善。在心臟血流動力學方面，低、中、高劑量康心湯組LVEDP均顯著降低，LVSP和±dp/dtmax明顯增加，且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。這表明康心湯能夠有效改善心臟的舒張和收縮功能，減輕心臟功能損傷。從組織病理學結(jié)果來看，康心湯低、中、高劑量組心肌細胞及心肌纖維的損傷均有不同程度的減輕和改善，心肌纖維排列逐漸趨于整齊，心肌細胞水腫、肥大和脂肪變性現(xiàn)象減少，炎性細胞浸潤也明顯減少。這說明康心湯能夠減輕心肌組織的損傷，改善心肌細胞和心肌纖維的形態(tài)結(jié)構(gòu)，對心肌重塑具有保護作用?？敌臏纳菩募≈厮艿淖饔脵C制可能是多方面的?？敌臏械狞S芪、人參等中藥成分具有增強心肌收縮力、擴張血管的作用。黃芪能夠增加心肌細胞內(nèi)鈣離子濃度，增強心肌的收縮力，同時還能擴張冠狀動脈及外周血管，降低心臟后負荷，改善心臟的血液供應。人參中的人參皂苷等成分也具有強心作用，能夠提高心肌的耐缺氧能力，改善心肌的能量代謝。這些成分協(xié)同作用，有助于改善心臟的血流動力學，減輕心臟功能損傷?？敌臏赡芡ㄟ^調(diào)節(jié)神經(jīng)-體液系統(tǒng)，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的過度激活。RAAS的過度激活在心肌重塑中起著重要作用，血管緊張素Ⅱ能夠促進心肌細胞肥大、纖維化，導致心肌重塑。本研究中，康心湯能夠降低血清腎素水平，抑制RAAS的激活，減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而減輕心臟的病理損傷，抑制心肌重塑?？敌臏€具有抗氧化應激和抗炎作用。心肌重塑過程中，氧化應激和炎癥反應會導致心肌細胞損傷、凋亡和細胞外基質(zhì)代謝紊亂?？敌臏械亩喾N中藥成分如五味子、淫羊藿等具有抗氧化作用，能夠提高機體抗氧化酶的活性，降低氧化應激水平?？敌臏€可以抑制炎癥細胞因子如TNF-α、IL-6等的產(chǎn)生，減輕炎癥反應，從而保護心肌細胞，減輕心肌重塑。4.2康心湯對VDR、腎素mRNA表達的影響機制探討本研究結(jié)果顯示，康心湯能夠下調(diào)壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型中VDR、腎素mRNA的表達量，這一調(diào)節(jié)作用可能涉及多個方面的機制。在維生素D代謝方面，康心湯可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)酶的活性，影響維生素D的合成與代謝過程。研究表明，維生素D在體內(nèi)的活化需要經(jīng)過肝臟和腎臟的兩步羥化反應，分別生成25-羥維生素D?（25(OH)D?）和1,25-二羥維生素D?（1,25(OH)?D?）?？敌臏械哪承┲兴幊煞挚赡軐⑴c這些羥化反應的酶，如肝臟中的25-羥化酶和腎臟中的1α-羥化酶，具有調(diào)節(jié)作用。黃芪中含有的黃芪皂苷等成分，可能通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的信號通路，影響這些酶的基因表達或活性，從而促進25(OH)D?的合成，提高血清25(OH)D?水平?？敌臏€可能通過調(diào)節(jié)維生素D結(jié)合蛋白（DBP）的水平，影響維生素D在體內(nèi)的運輸和代謝。DBP是一種在血液中運輸維生素D及其代謝產(chǎn)物的載體蛋白，其水平的改變會影響維生素D的生物利用度?？敌臏赡芡ㄟ^調(diào)節(jié)DBP的合成或釋放，使更多的維生素D能夠到達靶組織，發(fā)揮其生物學作用。在腎素-血管緊張素系統(tǒng)方面，康心湯對腎素mRNA表達的下調(diào)可能通過多種途徑實現(xiàn)。腎素基因的表達受到多種轉(zhuǎn)錄因子和信號通路的調(diào)控?？敌臏械闹兴幊煞挚赡茏饔糜谶@些轉(zhuǎn)錄因子和信號通路，抑制腎素基因的轉(zhuǎn)錄。研究發(fā)現(xiàn)，腎素基因啟動子區(qū)域存在多個順式作用元件，如cAMP反應元件（CRE）、血清反應元件（SRE）等，可與相應的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)節(jié)腎素基因的轉(zhuǎn)錄?？敌臏械狞h參等成分可能通過抑制細胞內(nèi)的cAMP信號通路，減少CRE與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合，從而抑制腎素基因的轉(zhuǎn)錄?？敌臏€可能通過影響腎素分泌細胞的功能，減少腎素的合成和釋放。腎小球旁器細胞是腎素的主要分泌細胞，其分泌腎素的過程受到多種因素的調(diào)節(jié)。康心湯中的淫羊藿等成分可能通過調(diào)節(jié)腎小球旁器細胞上的受體或離子通道，改變細胞的生理狀態(tài)，抑制腎素的分泌。康心湯對VDR、腎素mRNA表達的調(diào)節(jié)，與改善心肌重塑密切相關(guān)。下調(diào)VDRmRNA表達，可能避免VDR信號通路的過度激活，減少其可能帶來的不良反應。在心肌重塑過程中，過度激活的VDR信號通路可能會導致心肌細胞過度增殖、肥大以及細胞外基質(zhì)代謝紊亂?？敌臏ㄟ^下調(diào)VDRmRNA表達，抑制VDR信號通路，從而減輕心肌細胞的異常增殖和肥大，維持細胞外基質(zhì)的平衡，減輕心肌纖維化，改善心肌重塑?？敌臏抡{(diào)腎素mRNA表達，抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)的激活，減少血管緊張素Ⅱ的生成。血管緊張素Ⅱ是腎素-血管緊張素系統(tǒng)的關(guān)鍵活性物質(zhì)，具有強烈的縮血管作用，可升高血壓，增加心臟后負荷，同時還能促進心肌細胞肥大、纖維化和細胞凋亡?？敌臏ㄟ^降低腎素mRNA表達，減少腎素分泌，阻斷血管緊張素Ⅱ的生成，從而減輕心臟后負荷，抑制心肌細胞肥大和纖維化，減少心肌細胞凋亡，改善心肌重塑。綜上所述，康心湯通過調(diào)節(jié)維生素D代謝和腎素-血管緊張素系統(tǒng)，下調(diào)VDR、腎素mRNA表達量，從而發(fā)揮改善心肌重塑的作用。4.3研究結(jié)果的臨床意義與展望本研究結(jié)果表明，康心湯能夠有效調(diào)節(jié)壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型中VDR、腎素mRNA的表達，改善心肌重塑，對心臟功能具有保護作用，這為臨床治療心血管疾病提供了重要的理論依據(jù)和潛在的治療策略。在臨床治療中，心肌重塑是導致心力衰竭等嚴重心血管疾病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，目前的治療手段雖能取得一定療效，但仍存在局限性?？敌臏鳛橐环N中藥復方，展現(xiàn)出了獨特的優(yōu)勢。其可以通過調(diào)節(jié)維生素D代謝和腎素-血管緊張素系統(tǒng)，從多個層面抑制心肌重塑的發(fā)生發(fā)展。對于高血壓性心臟病患者，康心湯可能通過降低腎素mRNA表達，抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)的激活，減少血管緊張素Ⅱ的生成，從而降低血壓，減輕心臟后負荷，抑制心肌細胞肥大和纖維化，延緩心肌重塑的進展。對于冠心病合并心肌重塑的患者，康心湯可能通過調(diào)節(jié)VDRmRNA表達，抑制VDR信號通路的過度激活，減少心肌細胞的異常增殖和肥大，同時調(diào)節(jié)炎癥反應和氧化應激，保護心肌細胞，改善心肌缺血，從而抑制心肌重塑。這為臨床治療心血管疾病提供了新的治療思路和方法，有望與現(xiàn)有的治療手段聯(lián)合應用，提高治療效果，改善患者的預后。未來研究可從以下幾個方向展開：深入探究康心湯中具體成分對VDR、腎素mRNA表達的影響，明確其作用的關(guān)鍵靶點和信號通路。采用現(xiàn)代分離技術(shù)，將康心湯中的各種成分進行分離和純化，然后分別研究它們對心肌重塑模型中VDR、腎素mRNA表達的影響。利用基因編輯技術(shù)，如CRISPR/Cas9系統(tǒng)，敲除或過表達相關(guān)基因，進一步驗證康心湯調(diào)節(jié)VDR、腎素mRNA表達的作用機制。開展大規(guī)模、多中心、隨機對照的臨床試驗，驗證康心湯在臨床治療心血管疾病中的療效和安全性。擴大樣本量，納入不同年齡段、不同病情嚴重程度的心血管疾病患者，觀察康心湯的治療效果和不良反應。設(shè)立嚴格的對照組，與現(xiàn)有的一線治療藥物進行對比，評估康心湯的優(yōu)勢和不足。結(jié)合臨床實踐，優(yōu)化康心湯的配方和劑量，提高其臨床應用價值。根據(jù)患者的具體病情、體質(zhì)等因素，調(diào)整康心湯的藥物組成和劑量，實現(xiàn)個體化治療。探索康心湯與其他治療方法的聯(lián)合應用，如與西藥、介入治療、康復治療等相結(jié)合，進一步提高治療效果。研究康心湯與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、β受體阻滯劑等西藥聯(lián)合使用時的相互作用和協(xié)同效應，為臨床聯(lián)合用藥提供依據(jù)。還可研究康心湯在心血管疾病預防中的作用，通過對高危人群的干預，觀察其能否延緩或預防心肌重塑的發(fā)生。對高血壓前期、糖尿病等心血管疾病高危人群，給予康心湯預防性治療，監(jiān)測其心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化，以及VDR、腎素mRNA表達的改變，評估康心湯的預防效果。綜上所述，本研究揭示了康心湯對壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型VDR、腎素mRNA表達的影響及其作用機制，具有重要的臨床意義。未來需進一步深入研究，以推動康心湯在心血管疾病治療中的廣泛應用。五、結(jié)論本研究通過建立壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型，系統(tǒng)探究了康心湯對該模型中VDR、腎素mRNA表達的影響，取得了以下主要研究成果：康心湯能有效改善壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型的心臟血流動力學指標，降低LVEDP，提高LVSP和±dp/dtmax，且呈劑量依賴性，表明康心湯可改善心臟舒張和收縮功能，減輕心臟功能損傷。組織病理學檢測顯示，康心湯能夠減輕心肌組織損傷，改善心肌細胞和心肌纖維的形態(tài)結(jié)構(gòu)，減少心肌細胞水腫、肥大、脂肪變性及炎性細胞浸潤，抑制心肌纖維化，對心肌重塑具有保護作用。血清25(OH)D?及腎素的酶聯(lián)免疫檢測結(jié)果表明，康心湯能夠調(diào)節(jié)壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型的維生素D代謝，提高血清25(OH)D?水平，同時抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的激活，降低腎素水平。PCR檢測結(jié)果顯示，康心湯能夠調(diào)節(jié)壓力負荷增加大鼠心肌重塑模型中VDR和腎素mRNA的表達，抑制VDRmRNA的過度上調(diào)以及腎素mRNA的高表達。綜上所述，康心湯能夠調(diào)節(jié)壓力負荷增加大鼠心肌重塑，其作用機制可能與下調(diào)VDRmRNA的相對表達量以及腎素mRNA相對表達量水平有關(guān)，進而抑制心肌纖維化，逆轉(zhuǎn)左室肥厚。本研究為康心湯在心血管疾病治療中的應用提供了重要的實驗依據(jù)，揭示了其潛在的治療價值。然而，本研究仍存在一定的局限性，未來需進一步深入研究康心湯的具體作用靶點和信號通路，開展大規(guī)模臨床試驗驗證其臨床療效和安全性，為康心湯在心血管疾病治療中的廣泛應用奠定更堅實的基礎(chǔ)。六、參考文獻[1]陳灝珠，林果為，王吉耀。實用內(nèi)科學[M].15版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2017:1428-1442.[2]BraunwaldE,ZipesDP,LibbyP,etal.Braunwald'sHeartDisease:ATextbookofCardiovascularMedicine[M].10thed.Philadelphia:ElsevierSaunders,2015:594-612.[3]葛均波，徐永健。內(nèi)科學[M].8版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:169-178.[4]周明學，史大卓。中藥復方防治心肌重構(gòu)的研究進展[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016,36(11):1387-1391.[5]鄭筱萸。中藥新藥臨床研究指導原則(試行)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2002:73-77.[6]陳可冀，李連達，翁維良?；钛鏊幣c活血化瘀療法[M].2版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2014:125-136.[7]李立，陳云志，楊長福，等?？敌臏珜Ω怪鲃用}縮窄致心肌肥厚大鼠血流動力學及心肌組織形態(tài)學的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2015,21(10):123-126.[8]張艷，許娜，賈連群，等?；钛獫撽栴w粒對自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織血管緊張素Ⅱ1型受體和受體相互作用蛋白140表達的影響[J].中國動脈硬化雜志，2016,24(4):337-342.[9]劉劍剛，史大卓，王承龍，等。芎芍膠囊對急性心肌梗死大鼠心肌組織基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制物表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007,27(11):1004-1008.[10]高秀梅，張伯禮，李運倫，等。中藥藥理研究方法學[M].3版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2011:680-695.[11]李儀奎。中藥藥理實驗方法學[M].2版。上海：上海科學技術(shù)出版社，2006:356-368.[12]陳奇。中藥藥理研究方法學[M].3版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2006:745-756.[13]孫敬方。動物實驗方法學[M].2版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2001:201-215.[14]朱大年，王庭槐。生理學[M].8版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:106-118.[15]周岐新，石京山。藥理學實驗教程[M].3版。北京：科學出版社，2015:120-128.[16]何蓮，陳云志，柴藝匯，等?？敌臏珜S生素D缺乏腎虛模型小鼠血清25(OH)D3及生殖激素水平的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2016,22(20):116-119.[17]張小容，陳云志，柴藝匯，等?？敌臏珜S生素D缺乏腎虛模型小鼠骨組織形態(tài)計量學及骨密度的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2017,23(2):106-110.[18]趙暉，張秋霞，王慶國。溫陽益氣活血方對心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌組織miR-122-5p表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016,36(12):1471-1475.[19]高鑄燁，史大卓，徐浩，等。心肌康泰對急性心肌梗死后大鼠心肌組織磷酸化Akt表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2017,37(3):343-347.[20]王保和，郭茂娟，陳金錠，等。通心絡對急性心肌梗死后心肌重塑及心功能的影響[J].中國藥理學通報，2016,32(10):1459-1463.[2]BraunwaldE,ZipesDP,LibbyP,etal.Braunwald'sHeartDisease:ATextbookofCardiovascularMedicine[M].10thed.Philadelphia:ElsevierSaunders,2015:594-612.[3]葛均波，徐永健。內(nèi)科學[M].8版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:169-178.[4]周明學，史大卓。中藥復方防治心肌重構(gòu)的研究進展[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016,36(11):1387-1391.[5]鄭筱萸。中藥新藥臨床研究指導原則(試行)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2002:73-77.[6]陳可冀，李連達，翁維良。活血化瘀藥與活血化瘀療法[M].2版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2014:125-136.[7]李立，陳云志，楊長福，等?？敌臏珜Ω怪鲃用}縮窄致心肌肥厚大鼠血流動力學及心肌組織形態(tài)學的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2015,21(10):123-126.[8]張艷，許娜，賈連群，等?；钛獫撽栴w粒對自發(fā)性高血壓大鼠心肌組織血管緊張素Ⅱ1型受體和受體相互作用蛋白140表達的影響[J].中國動脈硬化雜志，2016,24(4):337-342.[9]劉劍剛，史大卓，王承龍，等。芎芍膠囊對急性心肌梗死大鼠心肌組織基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制物表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007,27(11):1004-1008.[10]高秀梅，張伯禮，李運倫，等。中藥藥理研究方法學[M].3版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2011:680-695.[11]李儀奎。中藥藥理實驗方法學[M].2版。上海：上?？茖W技術(shù)出版社，2006:356-368.[12]陳奇。中藥藥理研究方法學[M].3版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2006:745-756.[13]孫敬方。動物實驗方法學[M].2版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2001:201-215.[14]朱大年，王庭槐。生理學[M].8版。北京：人民衛(wèi)生出版社，2013:106-118.[15]周岐新，石京山。藥理學實驗教程[M].3版。北京：科學出版社，2015:120-128.[16]何蓮，陳云志，柴藝匯，等?？敌臏珜S生素D缺乏腎虛模型小鼠血清25(OH)D3及生殖激素水平的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2016,22(20):116-119.[17]張小容，陳云志，柴藝匯，等?？敌臏珜S生素D缺乏腎虛模型小鼠骨組織形態(tài)計量學及骨密度的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2017,23(2):106-110.[18]趙暉，張秋霞，王慶國。溫陽益氣活血方對心肌梗死后慢性心力衰竭大鼠心肌組織miR-122-5p表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016,36(12):1471-1475.[19]高鑄燁，史大卓，徐浩，等。心肌康泰對急性心肌梗死后大鼠心肌組織磷酸化Akt表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2017,37(3):343-347.[20]王保和，郭茂娟，陳金錠，等。通心絡對急性心肌梗死后心肌重塑及心功能的影響[J].中國藥理學通報，2016,32(10):1459-1463.[3]葛均波，徐永健。內(nèi)科學[M].8