抗體藥物純化柱再生調試技師（初級）考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.抗體純化常用的親和層析柱多為______柱。2.柱再生時，高鹽溶液常用的試劑是______。3.純化柱再生前需評估的關鍵參數包括柱壓、回收率和______。4.再生常用強堿NaOH的常用濃度為______（單位：M）。5.去除殘留抗體的洗脫液pH通常調至______（范圍）。6.純化柱保存溫度一般控制在______℃（范圍）。7.再生后需用______緩沖液沖洗至流出液pH中性。8.柱再生過程中，流速一般不超過______cm/h（常見值）。9.廢棄再生試劑需按______類危廢處理（含強堿）。10.再生后需記錄的核心參數包括柱壓、回收率和______。二、單項選擇題（每題2分，共20分）1.抗體純化柱再生最常用的強堿是（）A.NaOHB.HClC.TrisD.NaCl2.柱再生前評估的核心指標不包括（）A.回收率B.柱壓C.流速D.抗體濃度3.再生后平衡的主要目的是（）A.去除再生試劑B.提高柱壓C.破壞填料D.加速降解4.初級技師操作時，柱壓上限一般不超過（）A.0.3MPaB.1MPaC.2MPaD.5MPa5.下列哪種情況無需立即再生柱（）A.回收率下降15%B.柱壓升高25%C.流速正常D.峰形變寬6.柱保存液中常添加的抑菌劑是（）A.NaN3B.EDTAC.SDSD.尿素7.再生過程中，沖洗體積的常用單位是（）A.mLB.CV（柱體積）C.LD.cm38.去除殘留蛋白的常用試劑是（）A.0.1MNaOHB.1MHClC.5MNaClD.純水9.柱再生后需檢測的關鍵指標是（）A.抗體純度B.回收率C.緩沖液濃度D.試劑有效期10.操作純化柱時，錯誤的做法是（）A.流速穩(wěn)定B.避免氣泡C.柱干柱D.記錄參數三、多項選擇題（每題2分，共20分）1.柱再生前需確認的事項包括（）A.柱型號及規(guī)格B.再生試劑有效期C.緩沖液pH值D.操作溫度2.再生過程中需實時監(jiān)測的參數有（）A.柱壓B.流出液pHC.流速D.試劑濃度3.抗體純化柱常見再生步驟包括（）A.低pH洗脫B.強堿沖洗C.去脂處理D.平衡緩沖液沖洗4.再生后需執(zhí)行的操作有（）A.檢測回收率B.充滿保存液C.貼新標簽D.丟棄舊柱5.影響再生效果的因素包括（）A.再生試劑濃度B.沖洗體積C.操作溫度D.緩沖液pH6.純化柱保存的正確做法是（）A.2-8℃冷藏B.充滿保存液C.定期檢查D.室溫存放7.再生時安全防護需佩戴（）A.耐酸堿手套B.護目鏡C.口罩D.工作服8.廢棄再生試劑的處理要求是（）A.分類存放B.中和后排放C.直接丟棄D.記錄處理量9.柱性能下降的常見表現是（）A.回收率降低B.柱壓升高C.峰形變寬D.流速加快10.再生后平衡的合格標準是（）A.流出液pH中性B.電導穩(wěn)定C.柱壓正常D.流速達標四、判斷題（每題2分，共20分）1.純化柱再生時，NaOH濃度越高再生效果越好（）2.柱保存時需充滿保存液，避免干柱（）3.再生后無需檢測回收率即可直接使用（）4.流速過快會導致柱壓升高（）5.所有抗體柱再生步驟完全相同（）6.再生試劑有效期過期仍可使用（）7.操作時避免柱內產生氣泡（）8.保存液失效不影響后續(xù)再生效果（）9.初級技師可獨立操作所有型號純化柱（）10.再生后需記錄再生日期及參數（）五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述抗體純化柱再生的基本步驟。2.簡述純化柱再生時的安全注意事項。3.簡述柱保存不當的常見后果。4.簡述再生后回收率檢測的簡單方法。六、討論題（每題5分，共10分）1.若再生后柱回收率仍低于70%，分析可能原因及解決方法。2.討論如何判斷純化柱是否需要再生。---答案一、填空題答案1.ProteinA/G2.NaCl3.峰形（或流速衰減）.5-3.06.2-87.平衡（或PBS/Tris）8.150（或100-200）9.腐蝕10.峰形（或沖洗體積）二、單項選擇題答案1.A2.D3.A4.A5.C6.A7.B8.A9.B10.C三、多項選擇題答案1.ABCD2.ABC3.ABD4.AB5.ABCD6.ABC7.ABCD8.ABD9.ABC10.ABCD四、判斷題答案1.×2.√3.×4.√5.×6.×7.√8.×9.×10.√五、簡答題答案1.①評估柱性能（回收率、柱壓、峰形）；②用低pH洗脫液（pH2.5-3.0檸檬酸緩沖液）沖洗1-2CV去除殘留抗體；③用0.1MNaOH沖洗1-2CV去蛋白；④用平衡緩沖液沖洗至流出液pH中性；⑤用含NaN3的保存液充滿柱體；⑥記錄再生參數及結果。2.①佩戴耐酸堿手套、護目鏡、口罩；②NaOH稀釋時緩慢加堿并攪拌，避免飛濺；③操作保持通風，防止試劑揮發(fā)；④廢棄試劑分類存放，中和后處理；⑤操作后清潔臺面，洗手。3.①溫度過高導致填料降解，柱壓升高；②未充滿保存液導致干柱，填料收縮；③保存液失效導致微生物污染，再生難度增加；④回收率持續(xù)下降，影響后續(xù)純化。4.①取標準抗體溶液上樣；②按常規(guī)方法純化；③收集洗脫峰，測定蛋白濃度；④計算回收率=（洗脫峰蛋白量/上樣蛋白量）×100%；⑤與再生前回收率對比判斷效果。六、討論題答案1.可能原因：①再生試劑濃度不足（如NaOH<0.1M）；②沖洗體積不夠（<2CV）；③柱內有不可逆污染（如蛋白交聯(lián)）；④緩沖液pH錯誤（如低pH洗脫液pH>3.0）。解決方法：①調整NaOH濃度至0.2M；②增加沖洗體積至3CV；③更換新柱（不可逆污染）