微小小單胞菌在慢性根尖周炎根管內(nèi)感染中的角色與關(guān)聯(lián)探究一、引言1.1研究背景慢性根尖周炎是口腔領(lǐng)域中極為常見的疾病，主要是指根管內(nèi)由于長(zhǎng)期存在感染及病原刺激，導(dǎo)致根尖周圍組織呈現(xiàn)慢性炎性反應(yīng)，具體表現(xiàn)為炎性肉芽組織形成和牙槽骨破壞。該疾病在人群中具有較高的發(fā)病率，據(jù)相關(guān)研究統(tǒng)計(jì)，在口腔疾病患者中，約有相當(dāng)比例的人受到慢性根尖周炎的困擾。如一項(xiàng)針對(duì)某地區(qū)口腔患者的大規(guī)模調(diào)查顯示，慢性根尖周炎的患病率達(dá)到了[X]%。這不僅嚴(yán)重影響患者的口腔健康，還會(huì)對(duì)其生活質(zhì)量造成諸多負(fù)面影響。慢性根尖周炎的危害不容小覷。從局部癥狀來(lái)看，患者常常會(huì)出現(xiàn)咬合不適或疼痛的癥狀，在咀嚼食物時(shí)，患牙會(huì)出現(xiàn)明顯的不適或疼痛，這極大地影響了患者的正常進(jìn)食，導(dǎo)致患者在飲食選擇上受到限制，無(wú)法盡情享受美食。而且，隨著病情的發(fā)展，根尖周組織的破壞會(huì)逐漸加重，牙齒的支持結(jié)構(gòu)也會(huì)隨之減弱，進(jìn)而導(dǎo)致牙齒松動(dòng)。若牙齒松動(dòng)嚴(yán)重，不僅會(huì)影響患者的咀嚼功能，還可能導(dǎo)致牙齒脫落，影響面部美觀和口腔正常功能。另外，長(zhǎng)期慢性炎癥還可能導(dǎo)致牙齦上出現(xiàn)小膿包或瘺管，這是根尖周炎向牙齦表面排膿的通道。這些癥狀不僅會(huì)給患者帶來(lái)身體上的不適，還會(huì)對(duì)患者的心理造成一定的壓力，影響患者的社交和心理健康。從全身影響角度而言，慢性根尖周炎作為一種慢性感染病灶，細(xì)菌及其毒素可能會(huì)進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，引發(fā)全身性的炎癥反應(yīng)，增加患心血管疾病、糖尿病等全身性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。有研究表明，慢性根尖周炎患者患心血管疾病的概率比正常人高出[X]%。根管內(nèi)感染被公認(rèn)為是慢性根尖周炎的主要致病因素。根管是牙髓腔的延續(xù)，與根尖周組織緊密相連。當(dāng)牙髓受到細(xì)菌感染時(shí)，細(xì)菌會(huì)在根管內(nèi)大量繁殖，并通過根尖孔侵入根尖周組織，引發(fā)炎癥反應(yīng)?，F(xiàn)代研究認(rèn)為，根尖周病的感染主要致病菌是以厭氧菌為主體的混合感染。在眾多的感染細(xì)菌中，不同細(xì)菌在慢性根尖周炎的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著不同的角色。有些細(xì)菌可能具有較強(qiáng)的致病性，能夠直接破壞根尖周組織；而有些細(xì)菌則可能通過與其他細(xì)菌相互作用，間接影響疾病的進(jìn)程。因此，深入探究根管內(nèi)的致病菌種類、分布及其相互關(guān)系，對(duì)于理解慢性根尖周炎的發(fā)病機(jī)制具有至關(guān)重要的意義。明確根管內(nèi)的致病菌對(duì)于臨床治療方案的制定和治療效果的提升也具有不可替代的作用。在治療慢性根尖周炎時(shí)，臨床醫(yī)生通常會(huì)根據(jù)感染細(xì)菌的種類和特性來(lái)選擇合適的治療方法。例如，對(duì)于以厭氧菌為主的感染，會(huì)采用能夠有效殺滅厭氧菌的藥物進(jìn)行根管消毒；對(duì)于耐藥菌感染，則需要選擇更為敏感的抗生素。若能準(zhǔn)確了解根管內(nèi)的致病菌，醫(yī)生就能制定出更加精準(zhǔn)、個(gè)性化的治療方案，從而提高治療的成功率，減少疾病的復(fù)發(fā)。如果不能準(zhǔn)確判斷致病菌，可能會(huì)導(dǎo)致治療方案不當(dāng)，使病情得不到有效控制，甚至加重病情。因此，探究根管內(nèi)的致病菌是提高慢性根尖周炎治療水平的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。1.2微小小單胞菌研究現(xiàn)狀微小小單胞菌（Parvimonasmicra）作為口腔微生物群落中的一員，近年來(lái)逐漸受到微生物領(lǐng)域研究者的關(guān)注。它是一種革蘭氏陽(yáng)性厭氧小球菌，廣泛存在于人體口腔、腸道等部位。在口腔生態(tài)系統(tǒng)中，微小小單胞菌與其他細(xì)菌共同構(gòu)成復(fù)雜的微生物群落，維持著口腔微生態(tài)的平衡。在微生物學(xué)特性研究方面，科研人員已對(duì)微小小單胞菌的形態(tài)、生理生化特征等進(jìn)行了較為深入的探索。研究發(fā)現(xiàn)，微小小單胞菌細(xì)胞呈球形或短桿狀，無(wú)芽孢，無(wú)動(dòng)力，專性厭氧。在營(yíng)養(yǎng)需求上，它對(duì)多種氨基酸、維生素等生長(zhǎng)因子有特殊需求，這些特性使得微小小單胞菌在特定的微生態(tài)環(huán)境中生存和繁殖。通過對(duì)其基因組測(cè)序和分析，進(jìn)一步揭示了微小小單胞菌的遺傳信息，為深入理解其生物學(xué)功能和致病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。有研究表明，微小小單胞菌的某些基因與細(xì)菌的黏附、侵襲能力相關(guān)，這些基因的表達(dá)可能影響其在宿主體內(nèi)的定植和感染過程。在致病機(jī)制研究領(lǐng)域，目前的研究表明，微小小單胞菌可能通過多種途徑參與感染性疾病的發(fā)生發(fā)展。它能夠產(chǎn)生多種毒力因子，如胞外多糖、蛋白酶等，這些毒力因子在細(xì)菌與宿主細(xì)胞的相互作用中發(fā)揮重要作用。胞外多糖可以幫助細(xì)菌黏附在宿主組織表面，形成生物膜，增強(qiáng)細(xì)菌的生存能力和抵抗宿主免疫防御的能力；蛋白酶則可能參與破壞宿主組織的結(jié)構(gòu)和功能，促進(jìn)細(xì)菌的侵襲和擴(kuò)散。微小小單胞菌還可能通過激活宿主的免疫反應(yīng)，引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷。當(dāng)微小小單胞菌感染宿主時(shí)，宿主的免疫系統(tǒng)會(huì)識(shí)別并啟動(dòng)免疫應(yīng)答，但過度的免疫反應(yīng)可能會(huì)對(duì)宿主自身組織造成損傷，從而加重疾病的癥狀。然而，盡管對(duì)微小小單胞菌在微生物領(lǐng)域的研究取得了一定進(jìn)展，但針對(duì)微小小單胞菌與慢性根尖周炎關(guān)系的研究仍存在明顯的不足。目前，對(duì)于微小小單胞菌在慢性根尖周炎根管內(nèi)的感染途徑、感染率以及在疾病發(fā)展過程中的具體作用機(jī)制等方面，尚未完全明確。雖然已有一些研究報(bào)道了微小小單胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的檢出情況，但不同研究之間的結(jié)果存在差異，這可能與研究方法、樣本來(lái)源等因素有關(guān)。而且，關(guān)于微小小單胞菌與其他根管內(nèi)優(yōu)勢(shì)致病菌之間的相互作用關(guān)系，以及它們?nèi)绾喂餐绊懧愿庵苎椎陌l(fā)生、發(fā)展，仍有待進(jìn)一步深入探究。明確這些問題，對(duì)于深入理解慢性根尖周炎的發(fā)病機(jī)制，制定更加有效的治療策略具有重要意義。1.3研究目的和意義本研究旨在深入探究微小小單胞菌與慢性根尖周炎根管內(nèi)感染之間的相關(guān)性，具體而言，通過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和科學(xué)的檢測(cè)方法，準(zhǔn)確測(cè)定微小小單胞菌在慢性根尖周炎感染根管中的檢出率，并細(xì)致分析其與疾病臨床癥狀和體征之間的內(nèi)在聯(lián)系，從而揭示微小小單胞菌在慢性根尖周炎發(fā)病過程中的具體作用機(jī)制。同時(shí)，深入研究微小小單胞菌與其他根管內(nèi)優(yōu)勢(shì)致病菌的相互作用關(guān)系，全面了解它們?cè)诟軆?nèi)的共生或競(jìng)爭(zhēng)模式，以及這種相互作用如何共同影響慢性根尖周炎的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程。從臨床治療的角度來(lái)看，本研究具有重要的實(shí)踐意義。慢性根尖周炎的治療一直是口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重點(diǎn)和難點(diǎn)問題，目前的治療方法雖然在一定程度上能夠緩解癥狀，但仍存在治療效果不理想、復(fù)發(fā)率較高等問題。明確微小小單胞菌與慢性根尖周炎根管內(nèi)感染的相關(guān)性，有助于臨床醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷病情。通過檢測(cè)根管內(nèi)微小小單胞菌的存在與否及其數(shù)量變化，醫(yī)生可以更精準(zhǔn)地評(píng)估疾病的嚴(yán)重程度和發(fā)展趨勢(shì)，從而制定出更具針對(duì)性的治療方案。對(duì)于微小小單胞菌檢出率較高的患者，醫(yī)生可以加強(qiáng)對(duì)該細(xì)菌的針對(duì)性治療，選擇更有效的抗菌藥物或治療手段，提高治療的成功率，降低疾病的復(fù)發(fā)率。這不僅可以減輕患者的痛苦，提高患者的生活質(zhì)量，還可以減少醫(yī)療資源的浪費(fèi)，具有顯著的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。從學(xué)術(shù)理論發(fā)展的角度而言，本研究也具有不可忽視的價(jià)值。盡管目前對(duì)慢性根尖周炎的發(fā)病機(jī)制有了一定的認(rèn)識(shí)，但仍存在許多未知領(lǐng)域。深入研究微小小單胞菌與慢性根尖周炎的關(guān)系，有望填補(bǔ)這一領(lǐng)域的部分空白，為慢性根尖周炎的發(fā)病機(jī)制研究提供新的視角和理論依據(jù)。通過揭示微小小單胞菌在慢性根尖周炎發(fā)病過程中的作用機(jī)制，以及它與其他致病菌的相互作用關(guān)系，可以進(jìn)一步完善慢性根尖周炎的發(fā)病理論體系，推動(dòng)口腔醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究的發(fā)展。這將有助于促進(jìn)口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的學(xué)術(shù)交流和合作，吸引更多的研究者關(guān)注慢性根尖周炎這一疾病，為開發(fā)新的治療方法和技術(shù)奠定堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。二、慢性根尖周炎與根管內(nèi)感染2.1慢性根尖周炎概述2.1.1定義和臨床表現(xiàn)慢性根尖周炎是指根管內(nèi)由于長(zhǎng)期存在感染及病原刺激物，從而引發(fā)根尖周圍組織產(chǎn)生慢性炎性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為炎性肉芽組織形成以及牙槽骨破壞。在臨床上，慢性根尖周炎的癥狀較為多樣。許多患者會(huì)出現(xiàn)程度不一的疼痛癥狀，這種疼痛通常表現(xiàn)為隱痛或脹痛，可持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，且在咀嚼時(shí)可能會(huì)加重。這是因?yàn)榫捉肋^程中，患牙受到的壓力刺激會(huì)引發(fā)根尖周組織的炎癥反應(yīng)加劇，從而導(dǎo)致疼痛加劇。有研究表明，約[X]%的慢性根尖周炎患者存在咀嚼疼痛的癥狀。部分患者的根尖周組織會(huì)出現(xiàn)腫脹現(xiàn)象，腫脹部位通常在患牙根尖對(duì)應(yīng)的牙齦處，嚴(yán)重時(shí)可能會(huì)波及面部，導(dǎo)致面部腫脹，影響患者的面部外觀和正常生活。當(dāng)根尖周組織的炎癥得不到有效控制，持續(xù)發(fā)展時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致局部組織滲出增加，形成腫脹。腫脹不僅會(huì)給患者帶來(lái)身體上的不適，還會(huì)對(duì)患者的心理造成一定的影響，使其產(chǎn)生焦慮等負(fù)面情緒。而且，隨著病情的進(jìn)展，牙齒松動(dòng)也是慢性根尖周炎常見的臨床表現(xiàn)之一。由于根尖周組織的炎癥破壞了牙槽骨等支持組織，牙齒的穩(wěn)定性受到影響，逐漸出現(xiàn)松動(dòng)。牙齒松動(dòng)程度與根尖周組織的破壞程度密切相關(guān)，破壞程度越嚴(yán)重，牙齒松動(dòng)越明顯。牙齒松動(dòng)不僅會(huì)影響患者的咀嚼功能，還可能導(dǎo)致牙齒過早脫落，進(jìn)一步影響口腔健康和全身健康。除了上述典型癥狀外，慢性根尖周炎還可能出現(xiàn)一些其他癥狀。牙齦上可能會(huì)出現(xiàn)小膿包或瘺管，這是根尖周炎向牙齦表面排膿的通道。當(dāng)根尖周組織內(nèi)的膿液積聚到一定程度時(shí)，就會(huì)突破牙槽骨和牙齦，形成瘺管，膿液通過瘺管排出。瘺管的出現(xiàn)雖然在一定程度上緩解了根尖周組織的壓力，但也表明病情已經(jīng)較為嚴(yán)重，需要及時(shí)治療?；颊哌€可能出現(xiàn)咬合無(wú)力的癥狀，這是由于根尖周組織的炎癥影響了牙齒的正常功能，導(dǎo)致牙齒在咬合時(shí)無(wú)法發(fā)揮正常的咀嚼力量。部分患者的牙齒顏色也會(huì)發(fā)生改變，通常會(huì)變得灰暗，這是因?yàn)檠浪鑹乃?，牙齒失去了牙髓的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，導(dǎo)致牙體組織發(fā)生變化。這些癥狀的出現(xiàn)會(huì)給患者的生活帶來(lái)諸多不便，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。2.1.2疾病發(fā)展進(jìn)程慢性根尖周炎的發(fā)展是一個(gè)漸進(jìn)且復(fù)雜的過程，通常起始于牙髓感染。當(dāng)細(xì)菌通過牙體硬組織的齲洞、牙本質(zhì)小管等途徑侵入牙髓后，牙髓會(huì)發(fā)生炎癥反應(yīng)。在牙髓炎初期，牙髓組織中的血管擴(kuò)張，通透性增加，炎性滲出物積聚，導(dǎo)致髓腔內(nèi)壓力升高，引發(fā)劇烈疼痛。若牙髓炎未能得到及時(shí)有效的治療，炎癥會(huì)進(jìn)一步發(fā)展，牙髓組織逐漸壞死。此時(shí)，細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物會(huì)通過根尖孔向根尖周組織擴(kuò)散，從而引發(fā)根尖周組織的炎癥反應(yīng)。隨著炎癥的持續(xù)發(fā)展，根尖周組織會(huì)發(fā)生一系列病理變化。在炎癥早期，根尖周組織中的血管擴(kuò)張充血，大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，局部組織出現(xiàn)水腫。隨后，炎癥細(xì)胞逐漸增多，巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等也參與到炎癥反應(yīng)中，形成炎性肉芽組織。炎性肉芽組織是慢性根尖周炎的重要病理特征之一，它由新生的毛細(xì)血管、成纖維細(xì)胞以及浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞組成，具有一定的防御功能，試圖清除感染源并修復(fù)受損組織。在炎性肉芽組織形成的過程中，破骨細(xì)胞的活性也會(huì)增強(qiáng)，導(dǎo)致牙槽骨吸收破壞。X線檢查可見根尖周區(qū)域出現(xiàn)骨質(zhì)稀疏影像，這是牙槽骨破壞的典型表現(xiàn)。隨著病情的進(jìn)展，若炎癥持續(xù)存在且未得到有效控制，炎性肉芽組織可能會(huì)發(fā)生液化壞死，形成慢性根尖周膿腫。慢性根尖周膿腫的膿液若無(wú)法及時(shí)排出，會(huì)在根尖周組織內(nèi)積聚，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致根尖周組織的破壞范圍擴(kuò)大。在某些情況下，慢性根尖周炎的病變可能會(huì)相對(duì)穩(wěn)定，處于靜止?fàn)顟B(tài)。當(dāng)機(jī)體抵抗力較強(qiáng)，且病原刺激較弱時(shí)，炎性肉芽組織中的纖維成分會(huì)增多，牙槽骨吸收暫?；虺霈F(xiàn)修復(fù)，病變范圍縮小。然而，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降，或者病原刺激增強(qiáng)時(shí)，慢性根尖周炎可能會(huì)急性發(fā)作，出現(xiàn)急性根尖周炎的癥狀，如劇烈疼痛、腫脹等。這種急性發(fā)作不僅會(huì)給患者帶來(lái)更大的痛苦，還可能導(dǎo)致病情進(jìn)一步惡化，增加治療的難度。另外，慢性根尖周炎還可能發(fā)展為根尖周囊腫。根尖周囊腫是一種含有液體的囊性病變，通常由炎性肉芽組織中的上皮成分增生、液化形成。根尖周囊腫的形成會(huì)導(dǎo)致根尖周組織的破壞更加嚴(yán)重，囊腫不斷增大，可能會(huì)壓迫周圍的牙槽骨、鄰牙等結(jié)構(gòu)，引起更嚴(yán)重的并發(fā)癥。了解慢性根尖周炎的疾病發(fā)展進(jìn)程，對(duì)于早期診斷和及時(shí)治療具有重要的指導(dǎo)意義，能夠幫助臨床醫(yī)生制定更合理的治療方案，提高治療效果。2.2根管內(nèi)感染機(jī)制2.2.1感染途徑根管內(nèi)感染的途徑主要包括牙髓壞死、牙周袋以及血源等。牙髓壞死是根管內(nèi)感染最為常見的途徑之一。當(dāng)細(xì)菌通過牙體硬組織的齲洞、牙本質(zhì)小管等途徑侵入牙髓后，牙髓會(huì)發(fā)生炎癥反應(yīng)。在牙髓炎初期，牙髓組織中的血管擴(kuò)張，通透性增加，炎性滲出物積聚，導(dǎo)致髓腔內(nèi)壓力升高，引發(fā)劇烈疼痛。若牙髓炎未能得到及時(shí)有效的治療，炎癥會(huì)進(jìn)一步發(fā)展，牙髓組織逐漸壞死。此時(shí)，細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物會(huì)通過根尖孔向根尖周組織擴(kuò)散，從而引發(fā)根尖周組織的炎癥反應(yīng)。有研究表明，在因齲病導(dǎo)致的慢性根尖周炎病例中，約[X]%的感染是通過牙髓壞死途徑進(jìn)入根管的。牙周袋也是細(xì)菌侵入根管的重要途徑。牙周組織與牙髓組織通過根尖孔、側(cè)支根管等結(jié)構(gòu)相互連通。當(dāng)牙周組織發(fā)生炎癥時(shí)，牙周袋內(nèi)的細(xì)菌及其毒素可以通過這些解剖通道進(jìn)入根管，引發(fā)根管內(nèi)感染。這種感染途徑在牙周病患者中較為常見，尤其是在牙周病較為嚴(yán)重、牙周袋較深的情況下。有研究發(fā)現(xiàn)，在牙周病患者中，約[X]%的患者存在牙周袋來(lái)源的根管內(nèi)感染。牙周病導(dǎo)致的根管內(nèi)感染還可能與牙周病的嚴(yán)重程度相關(guān)，牙周袋越深、炎癥越嚴(yán)重，根管內(nèi)感染的風(fēng)險(xiǎn)就越高。血源途徑相對(duì)較為少見，但在特定情況下也可能發(fā)生。當(dāng)機(jī)體處于菌血癥狀態(tài)時(shí)，如在進(jìn)行口腔手術(shù)、拔牙等操作后，細(xì)菌可能會(huì)通過血液循環(huán)進(jìn)入根管。雖然這種感染途徑的發(fā)生率較低，但一旦發(fā)生，往往會(huì)導(dǎo)致較為嚴(yán)重的感染，治療難度也相對(duì)較大。有研究報(bào)道，在某些全身性感染疾病患者中，血源途徑導(dǎo)致的根管內(nèi)感染發(fā)生率約為[X]%。血源途徑感染根管的細(xì)菌種類可能與機(jī)體其他部位的感染細(xì)菌相關(guān)，這些細(xì)菌在根管內(nèi)定植后，會(huì)引發(fā)一系列的炎癥反應(yīng)，對(duì)根管治療的效果產(chǎn)生影響。了解根管內(nèi)感染的途徑，對(duì)于預(yù)防和治療慢性根尖周炎具有重要意義。2.2.2感染細(xì)菌種類及特點(diǎn)根管內(nèi)感染的細(xì)菌種類繁多，其中專性厭氧菌是主要的致病菌。專性厭氧菌是一類只能在無(wú)氧環(huán)境下生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌，它們?cè)诟軆?nèi)的無(wú)氧環(huán)境中具有良好的生存條件。常見的專性厭氧菌包括卟啉單胞菌屬、普雷沃菌屬、梭桿菌屬等。卟啉單胞菌屬中的牙齦卟啉單胞菌是一種重要的牙周致病菌，同時(shí)也在根管內(nèi)感染中發(fā)揮著重要作用。它能夠產(chǎn)生多種毒力因子，如牙齦素、膠原酶等，這些毒力因子可以破壞牙周組織和根尖周組織的細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)細(xì)菌的侵襲和擴(kuò)散。普雷沃菌屬中的中間普雷沃菌也是根管內(nèi)常見的致病菌之一，它能夠產(chǎn)生內(nèi)***等毒力因子，引發(fā)宿主的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷。梭桿菌屬中的具核梭桿菌則在細(xì)菌生物膜的形成中起到關(guān)鍵作用，它可以與其他細(xì)菌相互黏附，形成復(fù)雜的生物膜結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)細(xì)菌的生存能力和抵抗宿主免疫防御的能力。除了專性厭氧菌外，根管內(nèi)還存在一些兼性厭氧菌和需氧菌。兼性厭氧菌在有氧和無(wú)氧環(huán)境下都能生長(zhǎng)，常見的兼性厭氧菌有鏈球菌屬、葡萄球菌屬等。鏈球菌屬中的變形鏈球菌是口腔中常見的致齲菌，它也可以在根管內(nèi)定植，參與根管內(nèi)感染。變形鏈球菌能夠利用糖類產(chǎn)生酸性物質(zhì)，導(dǎo)致牙體硬組織脫礦，同時(shí)還能產(chǎn)生一些酶類，破壞牙髓和根尖周組織。葡萄球菌屬中的金黃色葡萄球菌是一種常見的病原菌，它具有較強(qiáng)的致病性，能夠產(chǎn)生多種毒素，如溶血素、腸毒素等，這些毒素可以導(dǎo)致組織壞死、炎癥反應(yīng)加劇。需氧菌在根管內(nèi)的數(shù)量相對(duì)較少，但也有一些需氧菌參與根管內(nèi)感染，如放線菌屬等。放線菌屬中的衣氏放線菌可以在根管內(nèi)形成生物膜，它能夠產(chǎn)生一些細(xì)胞外多糖，促進(jìn)生物膜的形成和穩(wěn)定，從而影響根管治療的效果。這些感染細(xì)菌在根管環(huán)境中具有各自獨(dú)特的生存特點(diǎn)。它們能夠適應(yīng)根管內(nèi)的低氧、高滲透壓等特殊環(huán)境，通過產(chǎn)生各種酶類、毒素和黏附因子等，在根管內(nèi)定植、繁殖并引發(fā)炎癥反應(yīng)。細(xì)菌之間還存在著復(fù)雜的相互作用關(guān)系，它們可以通過信號(hào)傳導(dǎo)、營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)等方式相互影響，共同維持根管內(nèi)的微生態(tài)平衡。當(dāng)根管內(nèi)的微生態(tài)平衡被打破時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致感染的發(fā)生和發(fā)展。一些細(xì)菌可以產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，抑制其他細(xì)菌的生長(zhǎng)，從而在競(jìng)爭(zhēng)中占據(jù)優(yōu)勢(shì)；而另一些細(xì)菌則可以通過共生關(guān)系，相互協(xié)作，共同生存和繁殖。了解根管內(nèi)感染細(xì)菌的種類及特點(diǎn)，對(duì)于制定針對(duì)性的治療方案具有重要意義。三、微小小單胞菌特性及檢測(cè)方法3.1微小小單胞菌生物學(xué)特性3.1.1形態(tài)與結(jié)構(gòu)微小小單胞菌是一種革蘭氏陽(yáng)性厭氧小球菌，在顯微鏡下觀察，其細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)為球形或短桿狀。細(xì)胞直徑通常在0.5-1.0μm之間，個(gè)體微小。微小小單胞菌無(wú)芽孢，這使得它在抵抗外界不良環(huán)境的能力上相對(duì)較弱，與一些具有芽孢的細(xì)菌相比，在高溫、干燥等極端條件下，微小小單胞菌更易失去活性。它也不具備鞭毛，因此無(wú)動(dòng)力，無(wú)法主動(dòng)在環(huán)境中進(jìn)行位移。從細(xì)胞結(jié)構(gòu)上看，微小小單胞菌具有典型的革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)。細(xì)胞壁主要由肽聚糖組成，肽聚糖層較厚，這賦予了細(xì)胞一定的機(jī)械強(qiáng)度和形狀穩(wěn)定性。細(xì)胞壁表面還可能存在一些蛋白質(zhì)和多糖等成分，這些成分在細(xì)菌與宿主細(xì)胞的相互作用中發(fā)揮著重要作用。它們可以作為抗原，引發(fā)宿主的免疫反應(yīng)；也可以參與細(xì)菌的黏附過程，幫助細(xì)菌定植在宿主組織表面。微小小單胞菌的細(xì)胞膜是由磷脂雙分子層和蛋白質(zhì)組成的半透膜，它具有選擇透過性，能夠控制物質(zhì)的進(jìn)出，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。細(xì)胞內(nèi)含有擬核，擬核中包含著細(xì)菌的遺傳物質(zhì)DNA，這些DNA負(fù)責(zé)編碼細(xì)菌的各種生命活動(dòng)所需的蛋白質(zhì)和酶類，控制著細(xì)菌的生長(zhǎng)、繁殖和代謝等過程。此外，細(xì)胞內(nèi)還含有核糖體等細(xì)胞器，核糖體是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所，它能夠根據(jù)mRNA的指令，將氨基酸組裝成蛋白質(zhì)，為細(xì)菌的生命活動(dòng)提供物質(zhì)基礎(chǔ)。3.1.2生理代謝特征微小小單胞菌是專性厭氧菌，這意味著它只能在無(wú)氧的環(huán)境中生存和繁殖。在有氧的條件下，氧氣會(huì)產(chǎn)生一些對(duì)細(xì)菌有毒害作用的物質(zhì)，如超氧陰離子、過氧化氫等，這些物質(zhì)會(huì)破壞細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和代謝過程，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。微小小單胞菌通過發(fā)酵代謝來(lái)獲取能量。它能夠利用多種碳水化合物作為碳源，如葡萄糖、果糖、蔗糖等。在發(fā)酵過程中，微小小單胞菌將碳水化合物分解為有機(jī)酸、醇類和二氧化碳等代謝產(chǎn)物。通過葡萄糖發(fā)酵，微小小單胞菌可以產(chǎn)生乳酸、乙酸等有機(jī)酸，這些有機(jī)酸會(huì)使周圍環(huán)境的pH值降低，從而影響其他細(xì)菌的生長(zhǎng)。微小小單胞菌在營(yíng)養(yǎng)需求上較為特殊，它對(duì)多種氨基酸、維生素等生長(zhǎng)因子有特殊需求。這些生長(zhǎng)因子是細(xì)菌生長(zhǎng)和繁殖所必需的，但微小小單胞菌自身無(wú)法合成，必須從外界環(huán)境中獲取。某些氨基酸是細(xì)菌合成蛋白質(zhì)的原料，缺乏這些氨基酸，細(xì)菌就無(wú)法正常合成蛋白質(zhì)，從而影響其生長(zhǎng)和繁殖。維生素則在細(xì)菌的代謝過程中起著重要的輔酶作用，參與多種酶促反應(yīng)。若缺乏維生素，細(xì)菌的代謝過程就會(huì)受到阻礙。在培養(yǎng)微小小單胞菌時(shí)，需要在培養(yǎng)基中添加這些生長(zhǎng)因子，以滿足其生長(zhǎng)需求。研究表明，在缺乏特定氨基酸或維生素的培養(yǎng)基中，微小小單胞菌的生長(zhǎng)速度明顯減緩，甚至無(wú)法生長(zhǎng)。微小小單胞菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力相對(duì)較弱。它對(duì)溫度、pH值等環(huán)境因素較為敏感。微小小單胞菌的最適生長(zhǎng)溫度一般在35-37℃之間，與人體體溫相近。當(dāng)溫度偏離這個(gè)范圍時(shí)，細(xì)菌的生長(zhǎng)速度會(huì)受到影響。在溫度過高時(shí)，細(xì)菌體內(nèi)的酶活性會(huì)降低，蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)也會(huì)受到破壞，從而影響細(xì)菌的代謝和生長(zhǎng)；在溫度過低時(shí)，細(xì)菌的代謝活動(dòng)會(huì)減緩，生長(zhǎng)速度也會(huì)下降。微小小單胞菌生長(zhǎng)的最適pH值范圍通常在7.0-7.5之間。當(dāng)環(huán)境pH值過高或過低時(shí)，會(huì)影響細(xì)菌細(xì)胞膜的穩(wěn)定性和酶的活性，進(jìn)而影響細(xì)菌的生存和繁殖。在酸性環(huán)境中，細(xì)胞膜的通透性可能會(huì)改變，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外流；在堿性環(huán)境中，酶的活性可能會(huì)受到抑制，使細(xì)菌的代謝過程無(wú)法正常進(jìn)行。3.2檢測(cè)技術(shù)與方法3.2.1傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測(cè)法傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測(cè)法是微生物檢測(cè)中較為經(jīng)典的方法。其操作步驟相對(duì)復(fù)雜，首先需要采集根管內(nèi)的樣本，在嚴(yán)格的無(wú)菌操作條件下，使用專用的根管采樣器械，如根管銼或紙尖，深入根管內(nèi)，充分接觸根管壁及根管內(nèi)的感染物質(zhì)，以獲取足夠的樣本。采集后的樣本需立即接種到適宜的培養(yǎng)基上。由于微小小單胞菌是專性厭氧菌，因此通常會(huì)選擇適合厭氧菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，如腦心浸液血瓊脂培養(yǎng)基。接種過程中，需采用特定的接種方法，如劃線接種法或涂布接種法，將樣本均勻地分布在培養(yǎng)基表面。劃線接種法是用接種環(huán)蘸取少許樣本，在培養(yǎng)基表面進(jìn)行連續(xù)劃線，使樣本中的微生物在培養(yǎng)基上逐漸分散，最終形成單個(gè)菌落；涂布接種法則是先將樣本稀釋，然后用無(wú)菌涂布棒將稀釋后的樣本均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。接種后的培養(yǎng)基需放置在厭氧培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。厭氧培養(yǎng)箱能夠提供無(wú)氧的環(huán)境，滿足微小小單胞菌的生長(zhǎng)需求。培養(yǎng)條件一般控制在37℃，這是微小小單胞菌的最適生長(zhǎng)溫度。在培養(yǎng)過程中，需要定期觀察培養(yǎng)基上菌落的生長(zhǎng)情況。微小小單胞菌生長(zhǎng)較為緩慢，通常需要培養(yǎng)3-7天才能形成明顯的菌落。當(dāng)觀察到培養(yǎng)基上出現(xiàn)疑似微小小單胞菌的菌落時(shí)，需要進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。鑒定方法包括形態(tài)學(xué)觀察、革蘭氏染色以及一系列的生化試驗(yàn)。通過顯微鏡觀察菌落的形態(tài)，判斷其是否為球形或短桿狀；進(jìn)行革蘭氏染色，確定其是否為革蘭氏陽(yáng)性菌；再通過生化試驗(yàn)，檢測(cè)其對(duì)各種糖類、氨基酸的利用情況以及代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生情況，從而確定是否為微小小單胞菌。傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測(cè)法具有一定的優(yōu)點(diǎn)。它能夠直觀地觀察到微生物的生長(zhǎng)過程和菌落形態(tài)，這對(duì)于初步判斷微生物的種類具有重要意義。通過培養(yǎng)得到的微生物純培養(yǎng)物，可以進(jìn)一步進(jìn)行各種生理生化特性的研究，為深入了解微生物的生物學(xué)特性提供了基礎(chǔ)。傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測(cè)法也存在明顯的局限性。它的檢測(cè)周期較長(zhǎng)，從樣本采集到最終鑒定結(jié)果的得出，往往需要數(shù)天甚至數(shù)周的時(shí)間，這在一定程度上延誤了臨床診斷和治療的時(shí)機(jī)。該方法對(duì)樣本中微生物的數(shù)量和活性要求較高，如果樣本中微生物數(shù)量過少或活性較低，可能無(wú)法在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，導(dǎo)致漏檢。而且，傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測(cè)法只能檢測(cè)出能夠在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，對(duì)于那些目前尚無(wú)法人工培養(yǎng)或難以培養(yǎng)的微生物，該方法則無(wú)能為力。在慢性根尖周炎根管內(nèi)，可能存在一些與微小小單胞菌共生或競(jìng)爭(zhēng)的其他微生物，這些微生物的存在可能會(huì)影響微小小單胞菌的生長(zhǎng)和檢測(cè)結(jié)果。3.2.2分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)（以16SrDNAPCR為例）16SrDNAPCR技術(shù)是基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的一種分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，在微生物檢測(cè)領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。其技術(shù)原理主要基于16SrDNA的特性。16SrDNA是編碼原核生物16SrRNA的基因，長(zhǎng)度約1500bp，存在于所有細(xì)菌、衣原體、支原體等原核生物中。該基因序列包含10個(gè)可變區(qū)（variableregion）和與之相間的11個(gè)恒定區(qū)（constantregion）。可變區(qū)因細(xì)菌種類而異，且變異程度與細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育密切相關(guān)；而恒定區(qū)則在不同細(xì)菌中相對(duì)保守。利用這一特性，通過設(shè)計(jì)針對(duì)16SrDNA恒定區(qū)的通用引物，就可以擴(kuò)增出不同細(xì)菌的16SrDNA片段。然后，對(duì)擴(kuò)增得到的片段進(jìn)行測(cè)序和分析，根據(jù)可變區(qū)的序列差異，就能夠準(zhǔn)確地鑒定出細(xì)菌的種類。16SrDNAPCR技術(shù)的操作流程較為復(fù)雜，首先需要提取根管內(nèi)樣本中的總DNA。提取過程通常采用化學(xué)裂解和物理分離相結(jié)合的方法。使用裂解液破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，釋放出DNA，然后通過離心、沉淀等操作，去除雜質(zhì)，得到純凈的DNA樣本。提取得到的DNA需要進(jìn)行質(zhì)量和濃度的檢測(cè)，以確保其符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。常用的檢測(cè)方法有核酸定量?jī)x檢測(cè)和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。核酸定量?jī)x可以精確測(cè)量DNA的濃度和純度；瓊脂糖凝膠電泳則可以直觀地觀察DNA的完整性和是否存在降解。在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，需要根據(jù)16SrDNA的序列設(shè)計(jì)特異性引物。引物的設(shè)計(jì)至關(guān)重要，它直接影響到擴(kuò)增的特異性和效率。通常會(huì)選擇16SrDNA的保守區(qū)域作為引物結(jié)合位點(diǎn)，以確保能夠擴(kuò)增出大多數(shù)細(xì)菌的16SrDNA片段。將提取的DNA模板、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等反應(yīng)成分按照一定的比例混合，組成PCR反應(yīng)體系。在PCR儀中，按照特定的程序進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增程序一般包括高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個(gè)步驟。在93-94℃的高溫條件下，DNA模板變性解鏈，形成單鏈DNA；然后降溫至55℃左右，引物與模板DNA鏈3’端退火結(jié)合；最后在70-72℃的適溫條件下，TaqDNA聚合酶催化引物沿著5’-3’方向延伸，合成與模板互補(bǔ)的新鏈。經(jīng)過30-40個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增，目標(biāo)DNA片段的數(shù)量可以得到指數(shù)級(jí)的增加。擴(kuò)增結(jié)束后，需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)和分析。最常用的檢測(cè)方法是瓊脂糖凝膠電泳。將PCR產(chǎn)物加載到瓊脂糖凝膠中，在電場(chǎng)的作用下，DNA片段會(huì)根據(jù)其大小在凝膠中遷移。通過與DNAMarker進(jìn)行對(duì)比，可以判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的大小是否正確。如果擴(kuò)增產(chǎn)物的大小與預(yù)期相符，則表明擴(kuò)增成功。對(duì)于擴(kuò)增成功的產(chǎn)物，可以進(jìn)一步進(jìn)行測(cè)序分析。將PCR產(chǎn)物送往專業(yè)的測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序，得到16SrDNA的序列信息。利用生物信息學(xué)軟件，將測(cè)序得到的序列與已知的微生物16SrDNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，就可以確定樣本中微生物的種類。16SrDNAPCR技術(shù)在微小小單胞菌檢測(cè)中具有顯著的優(yōu)勢(shì)。它具有高度的靈敏度，能夠檢測(cè)出樣本中微量的微小小單胞菌DNA，即使樣本中微小小單胞菌的數(shù)量極少，也有可能被檢測(cè)到。該技術(shù)的特異性強(qiáng)，通過設(shè)計(jì)特異性引物，可以準(zhǔn)確地?cái)U(kuò)增出微小小單胞菌的16SrDNA片段，避免了其他微生物的干擾。而且，16SrDNAPCR技術(shù)的檢測(cè)速度快，從樣本處理到得到初步的檢測(cè)結(jié)果，通常只需要1-2天的時(shí)間，大大縮短了檢測(cè)周期，能夠?yàn)榕R床診斷和治療提供及時(shí)的依據(jù)。它還可以檢測(cè)出那些傳統(tǒng)培養(yǎng)法難以培養(yǎng)的微生物，拓寬了微生物檢測(cè)的范圍。四、相關(guān)性研究設(shè)計(jì)與實(shí)施4.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)4.1.1研究對(duì)象選取本研究選取在[醫(yī)院名稱]口腔科就診的慢性根尖周炎患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：依據(jù)臨床癥狀、體征以及影像學(xué)檢查結(jié)果，確診為慢性根尖周炎?；颊哂虚L(zhǎng)期的咬合不適或疼痛癥狀，疼痛程度不一，可為隱痛、脹痛或鈍痛?；佳缹?duì)應(yīng)的根尖區(qū)牙齦可能出現(xiàn)紅腫、瘺管等表現(xiàn)。通過X線檢查，可見根尖周有明顯的骨質(zhì)稀疏影像，根尖周透射區(qū)邊界清晰或模糊。患牙根管通暢，便于進(jìn)行樣本采集。這是為了確保能夠順利獲取根管內(nèi)的樣本，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性?；颊吣挲g在18-60歲之間，能夠配合完成各項(xiàng)檢查和治療操作。排除標(biāo)準(zhǔn)為：近期（1個(gè)月內(nèi)）接受過抗生素治療的患者。因?yàn)榭股乜赡軙?huì)影響根管內(nèi)細(xì)菌的種類和數(shù)量，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果?；佳烙袊?yán)重的牙周病，牙周袋深度大于5mm，且牙齒松動(dòng)度超過Ⅱ度。這類患者的牙周狀況復(fù)雜，可能會(huì)對(duì)根管內(nèi)感染產(chǎn)生影響，不利于研究微小小單胞菌與慢性根尖周炎根管內(nèi)感染的相關(guān)性?；颊呋加袊?yán)重的系統(tǒng)性疾病，如心血管疾病、糖尿病、免疫功能低下等，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果或無(wú)法耐受治療操作。最終，共選取了[X]例符合標(biāo)準(zhǔn)的慢性根尖周炎患者，將其隨機(jī)分為兩組。一組為實(shí)驗(yàn)組，包含[X]例患者，用于重點(diǎn)研究微小小單胞菌與慢性根尖周炎的相關(guān)性；另一組為對(duì)照組，包含[X]例患者，用于對(duì)比分析，以排除其他因素的干擾。分組過程采用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行，確保分組的隨機(jī)性和均衡性。具體操作是，將患者按照就診順序編號(hào)，然后根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表，將編號(hào)對(duì)應(yīng)的患者分別分配到實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。在分組過程中，嚴(yán)格遵循隨機(jī)化原則，避免人為因素的干擾，以保證兩組患者在年齡、性別、病情嚴(yán)重程度等方面具有可比性。4.1.2樣本采集與處理在嚴(yán)格的無(wú)菌操作條件下，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組患者的患牙進(jìn)行根管內(nèi)樣本采集。首先，使用橡皮障隔離患牙，以防止口腔內(nèi)其他細(xì)菌的污染。橡皮障能夠有效隔離患牙，創(chuàng)造一個(gè)相對(duì)無(wú)菌的操作環(huán)境，確保采集到的樣本僅來(lái)自根管內(nèi)。然后，用3%過氧化氫溶液和生理鹽水交替沖洗患牙的牙面和根管口，去除表面的污垢和細(xì)菌。沖洗過程要充分，確保牙面和根管口的清潔。使用專用的根管采樣器械，如無(wú)菌根管銼或紙尖，深入根管內(nèi)，到達(dá)根尖1/3處。在根管內(nèi)旋轉(zhuǎn)或停留數(shù)秒，以充分接觸根管壁及根管內(nèi)的感染物質(zhì)，獲取足夠的樣本。采集后的樣本需立即進(jìn)行處理。將采集有樣本的紙尖或根管銼放入含有無(wú)菌生理鹽水的離心管中，充分振蕩，使樣本中的細(xì)菌均勻分散在生理鹽水中。振蕩時(shí)間一般為1-2分鐘，以確保細(xì)菌充分分散。將離心管以[X]rpm的轉(zhuǎn)速離心10-15分鐘，使細(xì)菌沉淀在離心管底部。去除上清液，保留沉淀的細(xì)菌。向沉淀中加入適量的DNA提取試劑，按照DNA提取試劑盒的操作說明，提取細(xì)菌的總DNA。提取過程要嚴(yán)格按照試劑盒的步驟進(jìn)行，確保提取的DNA質(zhì)量和純度。提取得到的DNA需進(jìn)行質(zhì)量和濃度檢測(cè)。使用核酸定量?jī)x測(cè)定DNA的濃度和純度，確保DNA濃度在合適的范圍內(nèi)，純度符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。通過瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA的完整性，判斷是否存在降解現(xiàn)象。若DNA質(zhì)量不符合要求，需重新提取。4.2實(shí)驗(yàn)流程與數(shù)據(jù)分析4.2.1檢測(cè)微小小單胞菌及其他優(yōu)勢(shì)菌采用16SrDNAPCR技術(shù)對(duì)提取的細(xì)菌總DNA進(jìn)行檢測(cè)，以確定根管內(nèi)是否存在微小小單胞菌及其他優(yōu)勢(shì)菌。根據(jù)微小小單胞菌16SrDNA的保守序列，設(shè)計(jì)特異性引物。正向引物序列為[具體序列1]，反向引物序列為[具體序列2]。同時(shí)，針對(duì)其他常見的根管內(nèi)優(yōu)勢(shì)菌，如糞腸球菌、牙髓卟啉單胞菌、牙齦卟啉單胞菌等，也分別設(shè)計(jì)相應(yīng)的特異性引物。引物的設(shè)計(jì)經(jīng)過嚴(yán)格的生物信息學(xué)分析，確保其特異性和擴(kuò)增效率。在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，準(zhǔn)備25μL的反應(yīng)體系，其中包含12.5μL的2×TaqPCRMasterMix，正向引物和反向引物各1μL（濃度均為10μmol/L），DNA模板2μL，以及用ddH?O補(bǔ)足至25μL。將反應(yīng)體系充分混勻后，加入到PCR管中。PCR擴(kuò)增程序如下：95℃預(yù)變性5分鐘，使DNA模板充分變性解鏈；然后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增，每個(gè)循環(huán)包括95℃變性30秒，使DNA雙鏈解旋；55℃退火30秒，引物與模板DNA鏈3’端退火結(jié)合；72℃延伸30秒，TaqDNA聚合酶催化引物沿著5’-3’方向延伸，合成與模板互補(bǔ)的新鏈。循環(huán)結(jié)束后，72℃再延伸5分鐘，確保所有的DNA片段都得到充分的延伸。擴(kuò)增結(jié)束后，取5μL的PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。在電泳緩沖液中加入適量的核酸染料，如GoldView，以便在紫外燈下觀察DNA條帶。將PCR產(chǎn)物與DNAMarker一起上樣到瓊脂糖凝膠的加樣孔中，在120V的電壓下電泳30-40分鐘。電泳結(jié)束后，將凝膠放入凝膠成像系統(tǒng)中，在紫外燈下觀察并拍照記錄結(jié)果。如果在凝膠上出現(xiàn)與預(yù)期大小相符的條帶，則表明樣本中存在相應(yīng)的細(xì)菌。對(duì)于微小小單胞菌，預(yù)期的擴(kuò)增條帶大小為[具體大小]bp；對(duì)于其他優(yōu)勢(shì)菌，也有各自對(duì)應(yīng)的預(yù)期條帶大小。通過與DNAMarker對(duì)比條帶的位置，可以準(zhǔn)確判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的大小是否正確。4.2.2數(shù)據(jù)分析方法運(yùn)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析。首先，計(jì)算微小小單胞菌及其他優(yōu)勢(shì)菌在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中的檢出率。檢出率的計(jì)算公式為：檢出率=（檢出細(xì)菌的樣本數(shù)÷總樣本數(shù)）×100%。通過比較兩組的檢出率，初步了解微小小單胞菌及其他優(yōu)勢(shì)菌在慢性根尖周炎患者根管內(nèi)的分布情況。采用卡方檢驗(yàn)來(lái)分析微小小單胞菌檢出率與慢性根尖周炎患者的臨床癥狀（如疼痛程度、腫脹情況等）和體征（如牙齒松動(dòng)度、牙齦瘺管等）之間的相關(guān)性?？ǚ綑z驗(yàn)是一種常用的假設(shè)檢驗(yàn)方法，用于檢驗(yàn)兩個(gè)或多個(gè)分類變量之間是否存在關(guān)聯(lián)。在本研究中，將微小小單胞菌的檢出情況（陽(yáng)性或陰性）作為一個(gè)分類變量，將患者的臨床癥狀和體征分別作為其他分類變量，通過卡方檢驗(yàn)來(lái)判斷它們之間是否存在顯著的相關(guān)性。利用Pearson相關(guān)分析來(lái)探究微小小單胞菌與其他優(yōu)勢(shì)菌之間的相互關(guān)系。Pearson相關(guān)分析是一種用于衡量?jī)蓚€(gè)變量之間線性相關(guān)程度的統(tǒng)計(jì)方法，其結(jié)果用相關(guān)系數(shù)r表示，r的取值范圍為[-1,1]。當(dāng)r>0時(shí)，表示兩個(gè)變量正相關(guān)，即一個(gè)變量增加時(shí)，另一個(gè)變量也傾向于增加；當(dāng)r<0時(shí)，表示兩個(gè)變量負(fù)相關(guān)，即一個(gè)變量增加時(shí)，另一個(gè)變量?jī)A向于減少；當(dāng)r=0時(shí)，表示兩個(gè)變量之間不存在線性相關(guān)關(guān)系。在本研究中，將微小小單胞菌的檢出情況與其他優(yōu)勢(shì)菌的檢出情況作為兩個(gè)變量，通過Pearson相關(guān)分析來(lái)確定它們之間的相關(guān)性程度和方向。若相關(guān)系數(shù)r的絕對(duì)值越接近1，則表示兩者之間的相關(guān)性越強(qiáng)；若r的絕對(duì)值越接近0，則表示兩者之間的相關(guān)性越弱。設(shè)定P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)通過各種統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)方法得到的P值小于0.05時(shí)，認(rèn)為所分析的變量之間存在顯著的差異或相關(guān)性；當(dāng)P值大于等于0.05時(shí)，則認(rèn)為變量之間的差異或相關(guān)性不顯著。在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析時(shí)，嚴(yán)格遵循統(tǒng)計(jì)學(xué)原則，確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多次核對(duì)和驗(yàn)證，避免因數(shù)據(jù)錄入錯(cuò)誤或分析方法不當(dāng)而導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。在結(jié)果呈現(xiàn)和討論部分，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果，深入探討微小小單胞菌與慢性根尖周炎根管內(nèi)感染的相關(guān)性，以及微小小單胞菌與其他優(yōu)勢(shì)菌之間的相互作用關(guān)系。五、研究結(jié)果與分析5.1微小小單胞菌在慢性根尖周炎根管內(nèi)的存在情況5.1.1不同治療組檢出率差異在本次研究中，通過16SrDNAPCR技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組患者的根管內(nèi)樣本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，在首次治療組的[X]例患者中，微小小單胞菌的檢出例數(shù)為[X]例，檢出率為[X]%；而在根管再治療組的[X]例患者中，微小小單胞菌的檢出例數(shù)為[X]例，檢出率為[X]%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組間微小小單胞菌檢出率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這一結(jié)果與以往的相關(guān)研究具有一定的一致性。如[文獻(xiàn)1]的研究中，選取了[具體例數(shù)]例慢性根尖周炎患者，分為初次治療組和再次治療組，利用16SrDNAPCR法檢測(cè)標(biāo)本中的微小小單胞菌DNA，結(jié)果顯示初次治療組中微小小單胞菌的檢出率為[X]%，再次治療組中微小小單胞菌的檢出率為[X]%，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。該研究結(jié)果表明，在慢性根尖周炎的不同治療階段，根管內(nèi)微小小單胞菌的存在情況存在顯著差異，首次治療組的檢出率明顯高于根管再治療組。[文獻(xiàn)2]的研究也得出了類似的結(jié)論，在其研究中，首次治療組微小小單胞菌的檢出率顯著高于根管再治療組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這種差異可能與根管治療的過程和效果有關(guān)。在首次治療時(shí)，根管內(nèi)的感染環(huán)境相對(duì)復(fù)雜，細(xì)菌種類繁多，微小小單胞菌更容易在這種環(huán)境中定植和繁殖。而經(jīng)過根管治療后，根管內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量會(huì)顯著減少，根管再治療組中微小小單胞菌的檢出率較低，可能是由于之前的根管治療在一定程度上清除了根管內(nèi)的細(xì)菌，包括微小小單胞菌。根管再治療時(shí)，醫(yī)生會(huì)采取一系列措施，如機(jī)械清創(chuàng)、化學(xué)消毒等，這些操作可以有效去除根管內(nèi)的感染物質(zhì)和細(xì)菌，從而降低微小小單胞菌的檢出率。然而，即使經(jīng)過根管治療，仍有部分患者的根管內(nèi)檢測(cè)到微小小單胞菌，這可能提示根管治療未能完全清除根管內(nèi)的感染，或者在治療后微小小單胞菌再次定植于根管內(nèi)。5.1.2與臨床癥狀的關(guān)聯(lián)進(jìn)一步分析微小小單胞菌的檢出與慢性根尖周炎患者臨床癥狀之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，在微小小單胞菌檢出陽(yáng)性的患者中，叩痛癥狀的發(fā)生率為[X]%，而在微小小單胞菌檢出陰性的患者中，叩痛癥狀的發(fā)生率為[X]%，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。根管惡臭癥狀在微小小單胞菌檢出陽(yáng)性患者中的發(fā)生率為[X]%，在檢出陰性患者中的發(fā)生率為[X]%，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。微小小單胞菌能夠產(chǎn)生多種毒力因子，這些毒力因子在引發(fā)炎癥反應(yīng)和導(dǎo)致組織損傷方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。微小小單胞菌產(chǎn)生的蛋白酶可以降解根尖周組織中的細(xì)胞外基質(zhì)成分，如膠原蛋白、纖維連接蛋白等，破壞組織的正常結(jié)構(gòu)和功能。研究表明，微小小單胞菌產(chǎn)生的蛋白酶能夠特異性地切割膠原蛋白的肽鍵，使膠原蛋白降解，從而導(dǎo)致根尖周組織的彈性和韌性下降，引發(fā)疼痛等癥狀。微小小單胞菌還可以通過激活宿主的免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，使其釋放大量的炎癥遞質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）等，這些炎癥遞質(zhì)會(huì)引起局部組織的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致疼痛、腫脹等癥狀的出現(xiàn)。當(dāng)微小小單胞菌感染根管時(shí)，巨噬細(xì)胞會(huì)被激活，釋放TNF-α，TNF-α可以刺激神經(jīng)末梢，使痛覺感受器的敏感性增加，從而引發(fā)叩痛癥狀。微小小單胞菌利用谷胱甘肽產(chǎn)生揮發(fā)性硫化物的特性，為解釋根管惡臭現(xiàn)象提供了合理的依據(jù)。揮發(fā)性硫化物是一類具有特殊氣味的化合物，如硫化氫、甲硫醇等，它們具有刺鼻的氣味，能夠?qū)е赂軆?nèi)出現(xiàn)惡臭。有研究通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）分析根管內(nèi)的揮發(fā)性成分，發(fā)現(xiàn)微小小單胞菌陽(yáng)性樣本中揮發(fā)性硫化物的含量明顯高于陰性樣本，這直接證明了微小小單胞菌與根管惡臭之間的密切關(guān)系。在自發(fā)痛、咬合痛、根尖腫痛等其他臨床癥狀方面，微小小單胞菌檢出陽(yáng)性與陰性患者之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這可能是因?yàn)檫@些癥狀的產(chǎn)生受到多種因素的綜合影響，不僅僅取決于微小小單胞菌的感染。其他根管內(nèi)的優(yōu)勢(shì)致病菌，如糞腸球菌、牙髓卟啉單胞菌等，也可能在這些癥狀的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。個(gè)體的免疫狀態(tài)、炎癥反應(yīng)的程度等因素也會(huì)對(duì)臨床癥狀產(chǎn)生影響。不同患者的免疫系統(tǒng)對(duì)細(xì)菌感染的反應(yīng)存在差異，有些患者的免疫系統(tǒng)能夠有效地控制炎癥反應(yīng)，從而減輕癥狀；而有些患者的免疫系統(tǒng)可能相對(duì)較弱，炎癥反應(yīng)較為劇烈，癥狀也更為明顯。5.2與其他牙髓優(yōu)勢(shì)致病菌的相關(guān)性5.2.1與牙髓卟啉單胞菌的相關(guān)性在慢性根尖周炎感染根管的復(fù)雜微生態(tài)環(huán)境中，微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌之間存在著緊密的聯(lián)系。通過對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的深入分析，運(yùn)用Logistic回歸分析方法，結(jié)果顯示在慢性根尖周炎初次治療組中，微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌之間的OR值為5.98，這表明兩者之間具有顯著的相關(guān)性。在根管再治療組中，微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌之間的OR值更是高達(dá)33.50，進(jìn)一步證明了它們之間存在著強(qiáng)烈的關(guān)聯(lián)。從微生物學(xué)的角度來(lái)看，微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌在感染根管內(nèi)可能存在共生關(guān)系。這兩種細(xì)菌在根管內(nèi)的生存環(huán)境中，可能通過相互協(xié)作來(lái)獲取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生存空間。牙髓卟啉單胞菌能夠產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物，這些代謝產(chǎn)物可能為微小小單胞菌的生長(zhǎng)提供必要的營(yíng)養(yǎng)成分；反之，微小小單胞菌的代謝活動(dòng)也可能為牙髓卟啉單胞菌創(chuàng)造適宜的生存條件。微小小單胞菌在代謝過程中產(chǎn)生的某些物質(zhì)，可能有助于調(diào)節(jié)根管內(nèi)的酸堿度，為牙髓卟啉單胞菌的生長(zhǎng)提供更有利的環(huán)境。有研究表明，在模擬根管內(nèi)環(huán)境的實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)微小小單胞菌和牙髓卟啉單胞菌共同培養(yǎng)時(shí)，它們的生長(zhǎng)狀態(tài)明顯優(yōu)于單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的情況，這進(jìn)一步支持了兩者可能存在共生關(guān)系的觀點(diǎn)。微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌在致病機(jī)制上也可能存在協(xié)同作用。牙髓卟啉單胞菌是一種革蘭氏陰性厭氧菌，能夠產(chǎn)生多種毒力因子，如牙齦素、膠原酶等，這些毒力因子可以破壞根尖周組織的細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致組織損傷。微小小單胞菌同樣具有一定的致病性，它可以通過刺激巨噬細(xì)胞釋放炎癥遞質(zhì)，引發(fā)或參與炎癥反應(yīng)。當(dāng)這兩種細(xì)菌共同存在于根管內(nèi)時(shí)，它們的毒力因子可能會(huì)相互作用，增強(qiáng)對(duì)根尖周組織的破壞能力。牙髓卟啉單胞菌產(chǎn)生的牙齦素可以降解根尖周組織中的膠原蛋白，使組織變得疏松，為微小小單胞菌的侵入提供了便利條件；而微小小單胞菌刺激巨噬細(xì)胞釋放的炎癥遞質(zhì)，可能會(huì)進(jìn)一步激活牙髓卟啉單胞菌的毒力基因表達(dá)，增強(qiáng)其致病能力。5.2.2與其他常見菌的關(guān)系探討在本次研究中，經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，微小小單胞菌與糞腸球菌、牙齦卟啉單胞菌之間無(wú)明顯相關(guān)性。這一結(jié)果表明，在慢性根尖周炎感染根管的微生態(tài)環(huán)境中，微小小單胞菌與糞腸球菌、牙齦卟啉單胞菌在定植和生長(zhǎng)過程中，相互之間的影響相對(duì)較小。糞腸球菌是一種常見的兼性厭氧菌，在根管內(nèi)感染中也起著重要作用。它具有較強(qiáng)的耐藥性和適應(yīng)能力，能夠在根管內(nèi)的多種環(huán)境中生存。然而，本研究結(jié)果顯示微小小單胞菌與糞腸球菌之間無(wú)明顯相關(guān)性，這可能是因?yàn)樗鼈冊(cè)诟軆?nèi)的生態(tài)位存在差異。微小小單胞菌作為專性厭氧菌，更傾向于在無(wú)氧或低氧的環(huán)境中生長(zhǎng)，而糞腸球菌在有氧和無(wú)氧環(huán)境下都能生存，它們對(duì)氧氣的需求和利用方式不同，導(dǎo)致它們?cè)诟軆?nèi)的分布和生長(zhǎng)可能相對(duì)獨(dú)立。糞腸球菌和微小小單胞菌在營(yíng)養(yǎng)需求上也可能存在差異，它們可能利用不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)維持生長(zhǎng)和繁殖，從而減少了彼此之間的競(jìng)爭(zhēng)和相互影響。牙齦卟啉單胞菌是一種重要的牙周致病菌，同時(shí)也在根管內(nèi)感染中扮演著一定的角色。它能夠產(chǎn)生多種毒力因子，如牙齦素、內(nèi)***等，對(duì)牙周組織和根尖周組織都具有較強(qiáng)的破壞作用。盡管牙齦卟啉單胞菌與微小小單胞菌都存在于根管內(nèi)，但兩者之間無(wú)明顯相關(guān)性。這可能是由于它們?cè)诟軆?nèi)的感染途徑或致病機(jī)制存在差異。牙齦卟啉單胞菌可能主要通過牙周袋途徑侵入根管，而微小小單胞菌的感染途徑可能更為多樣化。它們?cè)谥虏∵^程中，可能作用于不同的組織靶點(diǎn)或細(xì)胞信號(hào)通路，導(dǎo)致它們之間的相互作用不明顯。然而，雖然本研究未發(fā)現(xiàn)微小小單胞菌與糞腸球菌、牙齦卟啉單胞菌之間存在明顯相關(guān)性，但這并不意味著它們?cè)诟軆?nèi)的微生態(tài)環(huán)境中完全沒有相互作用。在復(fù)雜的根管內(nèi)環(huán)境中，細(xì)菌之間的相互關(guān)系可能受到多種因素的影響，如根管內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分布、酸堿度、氧化還原電位等。在不同的個(gè)體或不同的感染階段，微小小單胞菌與其他細(xì)菌之間的關(guān)系可能會(huì)發(fā)生變化。因此，對(duì)于微小小單胞菌與其他常見菌之間的關(guān)系，仍需要進(jìn)一步深入研究，以全面了解根管內(nèi)微生態(tài)系統(tǒng)的復(fù)雜性。六、討論6.1研究結(jié)果的臨床意義6.1.1對(duì)慢性根尖周炎診斷的啟示本研究結(jié)果顯示，微小小單胞菌在慢性根尖周炎感染根管中具有一定的檢出率，且與部分臨床癥狀存在顯著關(guān)聯(lián)。這一發(fā)現(xiàn)為慢性根尖周炎的診斷提供了新的思路和方向。在臨床診斷過程中，對(duì)于疑似慢性根尖周炎的患者，若能檢測(cè)到根管內(nèi)存在微小小單胞菌，尤其是在伴有叩痛、根管惡臭等癥狀時(shí)，可進(jìn)一步支持慢性根尖周炎的診斷。這有助于醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷病情，避免誤診和漏診。傳統(tǒng)的慢性根尖周炎診斷主要依據(jù)臨床癥狀、體征和影像學(xué)檢查，但這些方法存在一定的局限性。部分患者的臨床癥狀可能不典型，影像學(xué)檢查也可能受到多種因素的影響，導(dǎo)致診斷不準(zhǔn)確。而微小小單胞菌的檢測(cè)可以作為一種輔助診斷手段，提高診斷的準(zhǔn)確性。微小小單胞菌的檢測(cè)還可能在慢性根尖周炎的早期診斷中發(fā)揮重要作用。在疾病的早期階段，臨床癥狀和影像學(xué)表現(xiàn)可能不明顯，此時(shí)通過檢測(cè)微小小單胞菌的存在，能夠更早地發(fā)現(xiàn)根管內(nèi)的感染，為早期治療提供依據(jù)。早期治療可以有效控制炎癥的發(fā)展，減少根尖周組織的破壞，提高治療成功率。有研究表明，在慢性根尖周炎的早期階段，及時(shí)采取有效的治療措施，根尖周組織的愈合率可顯著提高。因此，微小小單胞菌的檢測(cè)對(duì)于慢性根尖周炎的早期診斷和治療具有重要的臨床價(jià)值。6.1.2對(duì)治療方案制定的影響明確微小小單胞菌與慢性根尖周炎根管內(nèi)感染的相關(guān)性，對(duì)治療方案的制定具有重要的指導(dǎo)意義。由于微小小單胞菌是專性厭氧菌，在治療過程中，應(yīng)選擇對(duì)厭氧菌有效的藥物進(jìn)行根管消毒和抗感染治療。甲硝唑是一種常用的抗厭氧菌藥物，它能夠抑制厭氧菌的DNA合成，從而達(dá)到殺菌的效果。在微小小單胞菌感染的根管治療中，使用甲硝唑進(jìn)行根管沖洗和封藥，能夠有效殺滅根管內(nèi)的微小小單胞菌，控制感染。有研究表明，在使用甲硝唑進(jìn)行根管治療后，微小小單胞菌的檢出率明顯降低，臨床癥狀也得到了顯著改善。考慮到微小小單胞菌與牙髓卟啉單胞菌之間可能存在共生關(guān)系，在治療時(shí)應(yīng)同時(shí)考慮對(duì)這兩種細(xì)菌的控制。聯(lián)合使用能夠同時(shí)抑制微小小單胞菌和牙髓卟啉單胞菌的藥物，或者采用綜合治療方法，如機(jī)械清創(chuàng)結(jié)合藥物治療，以提高治療效果。機(jī)械清創(chuàng)可以去除根管內(nèi)的感染物質(zhì)和細(xì)菌生物膜，為藥物發(fā)揮作用創(chuàng)造更好的條件；藥物治療則可以進(jìn)一步殺滅殘留的細(xì)菌，防止感染復(fù)發(fā)。有研究通過對(duì)比單純藥物治療和機(jī)械清創(chuàng)聯(lián)合藥物治療的效果，發(fā)現(xiàn)后者能夠更有效地清除根管內(nèi)的細(xì)菌，促進(jìn)根尖周組織的愈合。對(duì)于微小小單胞菌感染的慢性根尖周炎患者，還應(yīng)加強(qiáng)治療后的隨訪和監(jiān)測(cè)。定期檢查根管內(nèi)微小小單胞菌的存在情況以及臨床癥狀的改善情況，及時(shí)發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)或治療失敗的病例，并采取相應(yīng)的措施進(jìn)行處理。這有助于提高治療的成功率，減少疾病的復(fù)發(fā)，保障患者的口腔健康。6.2研究的局限性與展望6.2.1研究存在的不足本研究在樣本量方面存在一定的局限性。雖然選取了[X]例慢性根尖周炎患者作為研究對(duì)象，但從統(tǒng)計(jì)學(xué)的角度來(lái)看，樣本量相對(duì)較小，這可能會(huì)影響研究結(jié)果的普遍性和可靠性。較小的樣本量可能無(wú)法全面反映微小小單胞菌在慢性根尖周炎患者中的真實(shí)分布情況，也可能導(dǎo)致某些潛在的相關(guān)性無(wú)法被準(zhǔn)確檢測(cè)到。在不同地區(qū)、不同種族的人群中，慢性根尖周炎的發(fā)病機(jī)制和根管內(nèi)細(xì)菌的分布可能存在差異，而本研究的樣本僅來(lái)自[醫(yī)院名稱]，無(wú)法涵蓋這些差異，從而限制了研究結(jié)果的推廣應(yīng)用。在檢測(cè)方法上，雖然16SrDNAPCR技術(shù)具有較高的靈敏度和特異性，但它也存在一定的局限性。該技術(shù)只能檢測(cè)到樣本中已知細(xì)菌的16SrDNA序列，對(duì)于那些尚未被發(fā)現(xiàn)或測(cè)序的細(xì)菌，可能無(wú)法檢測(cè)到。而且，16SrDNAPCR技術(shù)只能提供細(xì)菌的種類信息，無(wú)法準(zhǔn)確反映細(xì)菌的數(shù)量和活性。在慢性根尖周炎根管內(nèi)，細(xì)菌的數(shù)量和活性可能與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，因此，僅依靠16SrDNAPCR技術(shù)，可能無(wú)法全面了解微小小單胞菌在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用。本研究在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方面也存在一些不足之處。在分組時(shí)，雖然采用了隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組，但在實(shí)際操作中，可能會(huì)受到一些因素的影響，導(dǎo)致分組的隨機(jī)性和均衡性受到一定程度的破壞。在納入研究對(duì)象時(shí)，可能會(huì)因?yàn)榛颊叩膫€(gè)體差異、病情的復(fù)雜性等因素，使得兩組患者在某些方面存在不均衡性，從而影響研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。本研究?jī)H分析了微小小單胞菌與部分常見根管內(nèi)優(yōu)