ICS11.220CCSB41DB22DB22/T3434—2023牛出血性敗血病防治技術(shù)規(guī)范Technicalspecificationsforpreventionandcureofbovinehaemorrhagicsepticaemia2023-03-01實(shí)施吉林省市場監(jiān)督管理廳發(fā)布IDB22/T3434—2023本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由吉林省畜牧業(yè)管理局提出并歸口。本文件起草單位：吉林省動物疫病預(yù)防控制中心、吉林省畜牧總站。本文件主要起草人：吳丹、于欽磊、王欣睿、馬曉媛、白翠、劉冬冬、李偉、常帥、孫亮、胡澤宇、曹東陽、楊金鑫、朱奕霏。DB22/T3434—20231牛出血性敗血病防治技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了牛出血性敗血病的診斷、防治措施、疫情報告和疫情處置的要求，描述了檔案管理的證實(shí)方法。本文件適用于牛出血性敗血病的診斷和防治。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過中文的規(guī)范性引用而構(gòu)成文件的必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅注日期對應(yīng)的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T27530牛出血性敗血病診斷技術(shù)NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范NY/T815肉牛飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)NY/T3075畜禽養(yǎng)殖場消毒技術(shù)NY/T3445畜禽養(yǎng)殖場檔案規(guī)范NY/T3467牛羊飼養(yǎng)場獸醫(yī)衛(wèi)生規(guī)范NY5030無公害農(nóng)產(chǎn)品獸藥使用準(zhǔn)則NY5032無公害食品畜禽飼料和飼養(yǎng)添加劑使用準(zhǔn)則DB22/T3137動物疫情報告管理規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1牛出血性敗血病bovinehaemorrhagicsepticaemia又名牛巴氏桿菌病，由多殺性巴氏桿菌某些血清型引起的一種牛的高度致死性、急性敗血性傳染病。4診斷4.1流行病學(xué)特點(diǎn)4.1.1病原多殺性巴氏桿菌（pasteurellamultocida），革蘭氏陰性球桿狀或短桿狀菌，兩端鈍圓，無鞭毛，不形成芽孢。根據(jù)莢膜抗原和菌體抗原區(qū)分血清型，前者可分為A、B、D、E和F5個血清型，后者2DB22/T3434—2023可分為16個血清型。其中對牛具有致病性的主要是莢膜血清A型、B型或E型。引起牛出血性敗血4.1.2傳播途徑主要通過病?；驇Ь５呐判刮?、分泌物經(jīng)消化道和呼吸道傳播。多殺性巴氏桿菌進(jìn)入動物體內(nèi)后大量寄生在牛的上呼吸道和消化道黏膜上，各種誘因使牛機(jī)體抵抗力降低時，發(fā)生內(nèi)源性感染。外源性傳染多經(jīng)消化道，偶爾可經(jīng)皮膚黏膜的損傷或吸血昆蟲的叮咬而傳播。氣候突變、長途運(yùn)輸、饑餓、寒冷和飼養(yǎng)管理等不良因素可誘發(fā)該病。4.1.3易感動物各品種牛均可感染。4.1.4潛伏期潛伏期一般為2d～5d。4.1.5發(fā)病季節(jié)發(fā)病無明顯季節(jié)性，冷熱交替、氣候劇變時多發(fā)。4.1.6病死率不同菌株致病性有所差異，強(qiáng)毒力菌株導(dǎo)致的病死率可接近100%。在地方性流行地區(qū)，死亡病例主要為較大犢牛和青年牛。4.2臨床癥狀符合GB/T27530描述。4.3病理變化4.3.1多數(shù)病牛呈現(xiàn)由嚴(yán)重充血水腫引起的頸部明顯腫脹。4.3.2敗血型呈一般敗血癥變化，內(nèi)臟器官出血，淋巴結(jié)顯著水腫，胸腹腔有大量滲出液。4.3.3浮腫型在咽喉或頸下有漿液浸潤，切開浮腫部流出深黃色透明液體，間或雜有出血，咽周組織和會咽軟骨韌帶呈黃色膠樣浸潤，咽淋巴結(jié)和頸前淋巴結(jié)高度急性腫脹。4.3.4肺炎型主要表現(xiàn)為胸膜炎和格魯布性肺炎，胸腔中有大量漿液性纖維素性滲出，肺切面呈大理石狀，心包與胸膜粘連，內(nèi)有干酪樣壞死物。4.4實(shí)驗(yàn)室診斷4.4.1樣品采集按NY/T541規(guī)定采集鼻腔拭子、抗凝全血或病變組織。4.4.2病原分離鑒定按GB/T27530規(guī)定執(zhí)行。4.4.3熒光PCR法見附錄A。DB22/T3434—202334.5結(jié)果判定4.5.1臨床疑似病例病牛或病死牛符合4.1、4.2和4.3，判定為臨床疑似病例。4.5.2臨床疑似病例符合牛出血性敗血病的流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床表現(xiàn)和病理變化，判定為臨床疑似病例。4.5.3確診病例對臨床疑似病例，經(jīng)上述任一實(shí)驗(yàn)室診斷方法檢測，結(jié)果為陽性的，判定為牛出血性敗血病陽性病例。5防治措施5.1免疫5.1.1疫苗應(yīng)選擇符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《獸藥管理?xiàng)l例》，且具有生產(chǎn)許可證和批準(zhǔn)文號的牛多殺性巴氏桿菌病滅活疫苗。5.1.2程序散發(fā)地區(qū)一年免疫1次，多發(fā)地區(qū)每年免疫2次，具體免疫時間根據(jù)各地區(qū)牛出血性敗血病流行情況而定。發(fā)生疫情時，應(yīng)對同群的假定健康牛進(jìn)行緊急接種。5.1.3方法依據(jù)疫苗使用說明操作。5.1.4注意事項(xiàng)免疫操作后應(yīng)及時收集針頭、注射器、疫苗瓶和殘余疫苗，進(jìn)行無害化處理。5.2治療5.2.1抗菌消炎療法可使用青霉素類、鏈霉素類、四環(huán)素類和磺胺類等抗菌藥物進(jìn)行治療。宜根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇抗生素。獸藥使用記錄應(yīng)按NY5030規(guī)定執(zhí)行。5.2.2對癥療法在應(yīng)用抗菌消炎療法的同時，再結(jié)合解熱、鎮(zhèn)痛、補(bǔ)液、解毒、強(qiáng)心的對癥療法。5.2.3加強(qiáng)營養(yǎng)治療期間應(yīng)適當(dāng)補(bǔ)充維生素，并給予易消化飼料，飼料應(yīng)符合NY5032的要求。5.3飼養(yǎng)管理DB22/T3434—202345.3.1養(yǎng)殖場應(yīng)按NY/T815要求保證牛的營養(yǎng)需要。5.3.2獸醫(yī)衛(wèi)生符合NY/T3467要求。5.3.3飼養(yǎng)人員應(yīng)定期觀察牛只的采食情況和精神狀態(tài)。5.3.4周邊場發(fā)生疫情時，應(yīng)提高觀察頻率。5.3.5疾病發(fā)生或牛只死亡，應(yīng)聘請當(dāng)?shù)鼐哂袌?zhí)業(yè)獸醫(yī)資質(zhì)的人員進(jìn)行診斷和治療。5.4消毒5.4.1養(yǎng)殖場消毒應(yīng)按NY/T3075規(guī)定進(jìn)行，消毒藥應(yīng)經(jīng)常更換。5.4.2發(fā)生牛出血性敗血病，應(yīng)對感染和發(fā)病牛及其污染物、病死牛及其污染物、被污染環(huán)境和無害化處理環(huán)節(jié)實(shí)行有效實(shí)時消毒。6疫情報告應(yīng)按DB22/T3137規(guī)定執(zhí)行。7疫情處置7.1確診后應(yīng)立即對隔離的病牛進(jìn)行藥物治療，并對同群假定健康牛進(jìn)行觀察、測溫，按5.2執(zhí)行。7.2病死牛及可能被污染的物品，應(yīng)按農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》規(guī)定執(zhí)行。8檔案管理所有記錄應(yīng)按NY/T3445規(guī)定進(jìn)行管理。DB22/T3434—20235多殺性巴氏桿菌熒光PCR檢測方法A.1儀器設(shè)備A.1.1高速冷凍離心機(jī)，最高離心速度不低于12000r/min。A.1.2生物安全柜。A.1.3-20℃冰箱。A.1.4熒光定量PCR儀。A.2耗材A.2.2Eppendorf管，1.5mL、0.5mL、0.2mL。A.2.3PCR管，0.2mL。A.3質(zhì)控品A.3.1陽性對照，含多殺性巴氏桿菌菌株的培養(yǎng)液。A.3.2陰性對照，無核酸酶水。A.4試劑A.4.1DNA提取試劑盒。A.4.2熒光PCR預(yù)混液。A.4.3引物與探針，見表A.1。表A.1引物與探針序列及濃度5’-GCCACCTGCCATAAGATGAGC-3’5’-CGTAGGAGTCTGGACCGTGTC-3’5’-FAM-GCCTACCAAGCCTGCGATCTCTAGC-TAMRA-3’A.5操作步驟A.5.1核酸提取按DNA提取試劑盒方法或其他等效方法提取DNA模板。A.5.2熒光定量PCR擴(kuò)增體系DB22/T3434—20236在試劑準(zhǔn)備區(qū)打開和配制試劑，配制完畢后應(yīng)及時將剩余試劑放回貯存區(qū)域。取0.2mLPCR反應(yīng)管，在冰浴條件下配制20μL反應(yīng)體系，按照表A.2依次加入以下成分，同時設(shè)陰性、陽性對照。加完后蓋緊蓋子。表A.2樣品反應(yīng)體系A(chǔ).5.3熒光PCR的擴(kuò)增條件在核酸擴(kuò)增區(qū)將PCR管置熒光定量PCR儀上按如下程序擴(kuò)增：95℃預(yù)變性30s；95℃變性15s，60℃退火1min，共40個循環(huán)，熒光收集設(shè)置在60℃進(jìn)行。A.6結(jié)果分析條件設(shè)定試驗(yàn)檢測結(jié)束后，根據(jù)生成的熒光曲線和Ct值直接讀取檢測結(jié)果，Ct值為每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。原則上可設(shè)定儀器自動模式分析確定閾值基線，特殊情況下閾值設(shè)定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)，不同儀器可對閾值線的位置進(jìn)行調(diào)整，然后讀取檢測結(jié)果。A.7質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)陰性對照無Ct值并且無典型擴(kuò)增曲線。陽性對照的Ct值應(yīng)＜30.0