2025年實(shí)驗(yàn)室生物樣本試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.關(guān)于血液樣本采集時(shí)間的選擇，以下說(shuō)法正確的是：A.激素類(lèi)檢測(cè)樣本應(yīng)在隨機(jī)時(shí)間采集B.空腹血糖樣本需至少禁食6小時(shí)C.炎癥因子檢測(cè)建議早晨7-9點(diǎn)采集D.腫瘤標(biāo)志物樣本采集時(shí)間對(duì)結(jié)果無(wú)影響答案：C（解析：多數(shù)激素類(lèi)物質(zhì)存在晝夜節(jié)律，如皮質(zhì)醇早晨濃度最高；空腹血糖需禁食8-12小時(shí)；腫瘤標(biāo)志物雖穩(wěn)定性較好，但仍建議固定時(shí)間采集以減少波動(dòng)）2.用于凝血功能檢測(cè)的血樣應(yīng)選擇的抗凝劑是：A.EDTA-K2B.枸櫞酸鈉（1:9）C.肝素鈉D.草酸鉀答案：B（解析：EDTA會(huì)螯合鈣離子影響凝血檢測(cè)；肝素干擾凝血酶原時(shí)間；草酸鉀可使紅細(xì)胞皺縮，均不適用于凝血項(xiàng)目；枸櫞酸鈉與血液比例1:9時(shí)能有效抑制凝血因子激活）3.關(guān)于生物樣本低溫保存的描述，錯(cuò)誤的是：A.血漿樣本短期保存（<72小時(shí)）可置于-20℃B.組織樣本長(zhǎng)期保存建議使用-80℃超低溫冰箱C.全血樣本不可直接凍存（-20℃），否則會(huì)溶血D.RNA樣本可在-80℃保存5年以上，無(wú)需分裝答案：D（解析：RNA易降解，即使-80℃保存也需分裝以避免反復(fù)凍融；全血凍存會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂；-20℃適合血漿短期保存，長(zhǎng)期需-80℃或液氮）4.運(yùn)輸感染性生物樣本時(shí)，符合《可感染人類(lèi)的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》的包裝要求是：A.主容器為普通離心管，無(wú)防漏設(shè)計(jì)B.輔助包裝填充普通棉花，未使用吸水材料C.外包裝標(biāo)注“生物危害”標(biāo)識(shí)及UN3373編號(hào)D.運(yùn)輸文件僅包含樣本數(shù)量，無(wú)接收方信息答案：C（解析：主容器需防漏，輔助包裝需吸水材料，運(yùn)輸文件應(yīng)包含發(fā)送/接收方信息、樣本特性等；UN3373是診斷用生物物質(zhì)的運(yùn)輸編號(hào)，需在外包裝標(biāo)注）5.評(píng)估血清樣本質(zhì)量時(shí)，若肉眼觀察呈明顯乳糜狀，主要反映的問(wèn)題是：A.采集時(shí)發(fā)生溶血B.患者采集前未禁食C.離心速度不足D.保存溫度波動(dòng)答案：B（解析：乳糜血主要因高脂血癥或采集前未禁食導(dǎo)致血脂過(guò)高；溶血表現(xiàn)為紅色渾濁，離心不足可能有細(xì)胞殘留，溫度波動(dòng)影響成分穩(wěn)定性但不直接導(dǎo)致乳糜）二、填空題（每空1分，共20分）1.生物樣本標(biāo)簽的核心信息應(yīng)包括：樣本唯一標(biāo)識(shí)、___、___、___、采集者簽名（至少填寫(xiě)3項(xiàng)）。答案：受檢者姓名/ID、樣本類(lèi)型、采集時(shí)間2.進(jìn)行血清分離時(shí)，離心參數(shù)通常為_(kāi)__轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間___分鐘（室溫）。答案：3000-3500、10-153.按照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》，新冠病毒（SARS-CoV-2）樣本處理應(yīng)在___級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL）進(jìn)行，操作人員需穿戴___（防護(hù)裝備）。答案：三、正壓防護(hù)服/全封閉防護(hù)裝備4.RNA樣本采集后應(yīng)在___分鐘內(nèi)完成預(yù)處理（如加入保存液），長(zhǎng)期保存建議使用___（具體試劑）或___（保存條件）。答案：30、RNAlater、-80℃超低溫冰箱/液氮5.生物樣本庫(kù)的“雙人雙鎖”管理指___和___需由兩人分別保管鑰匙。答案：樣本存儲(chǔ)區(qū)門(mén)禁、關(guān)鍵樣本柜鎖具6.評(píng)估組織樣本質(zhì)量的主要指標(biāo)包括：___（形態(tài)學(xué)指標(biāo)）、___（分子指標(biāo)）、___（功能指標(biāo)）。答案：組織完整性（無(wú)自溶/壞死）、DNA/RNA完整性（如RIN值）、細(xì)胞活性（如臺(tái)盼藍(lán)染色存活率）三、簡(jiǎn)答題（每題8分，共40分）1.簡(jiǎn)述生物樣本前處理的關(guān)鍵步驟及其質(zhì)量控制要點(diǎn)。答案：前處理關(guān)鍵步驟包括：（1）采集：選擇正確的采集部位、時(shí)間、容器（如抗凝劑類(lèi)型），確保采集量符合要求（如血樣需達(dá)到采血管刻度線的90%以上）；（2）運(yùn)輸：使用符合生物安全的包裝（三層包裝系統(tǒng)），控制運(yùn)輸溫度（如冷鏈運(yùn)輸箱溫度±2℃），記錄運(yùn)輸時(shí)間（需≤規(guī)定時(shí)限，如血培養(yǎng)樣本≤2小時(shí)）；（3）離心：嚴(yán)格控制轉(zhuǎn)速（3000-3500rpm）、時(shí)間（10-15分鐘）、溫度（4℃或室溫），避免離心不足（細(xì)胞殘留）或過(guò)度（成分破壞）；（4）分裝：按使用需求分裝為100-500μL/管（避免反復(fù)凍融），使用無(wú)酶無(wú)核酸污染的凍存管；（5）標(biāo)記：標(biāo)簽信息需包含唯一ID、樣本類(lèi)型、采集時(shí)間、操作者，采用防水耐低溫材質(zhì)；質(zhì)量控制要點(diǎn)：每一步驟需進(jìn)行雙人核對(duì)，記錄環(huán)境溫濕度（如實(shí)驗(yàn)室溫度20-25℃，濕度40-60%），關(guān)鍵步驟（如離心）需留存設(shè)備運(yùn)行記錄（如離心機(jī)校準(zhǔn)證書(shū)、溫度曲線）。2.解釋“凍融循環(huán)”對(duì)生物樣本的影響及實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取的預(yù)防措施。答案：凍融循環(huán)指樣本從冷凍狀態(tài)（如-80℃）解凍后未完全使用，再次冷凍的過(guò)程。其影響包括：（1）物理?yè)p傷：冰晶形成導(dǎo)致細(xì)胞/組織破裂（如紅細(xì)胞溶血、組織切片結(jié)構(gòu)破壞）；（2）生化改變：酶類(lèi)（如蛋白酶）在解凍時(shí)被激活，導(dǎo)致蛋白降解（如細(xì)胞因子濃度降低）；（3）核酸斷裂：DNA/RNA在反復(fù)凍融中因機(jī)械應(yīng)力和核酸酶激活發(fā)生斷裂（如長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增失?。?；預(yù)防措施：（1）分裝保存：將樣本分裝為單次使用量（如50-200μL），避免反復(fù)取用同一管；（2）快速解凍：采用37℃水浴快速解凍（≤10分鐘），減少解凍時(shí)間；（3）建立凍融記錄：對(duì)每管樣本標(biāo)注凍融次數(shù)（建議≤3次），超過(guò)限制的樣本標(biāo)記為“質(zhì)量可疑”；（4）優(yōu)化保存條件：重要樣本可采用液氮（-196℃）保存，降低分子活動(dòng)速率。3.列舉生物樣本庫(kù)質(zhì)量控制的三級(jí)體系，并說(shuō)明各級(jí)的具體內(nèi)容。答案：三級(jí)質(zhì)量控制體系包括：（1）一級(jí)質(zhì)控（采集端）：由樣本采集人員負(fù)責(zé)，內(nèi)容包括采集前核對(duì)（受檢者信息、采集容器）、采集過(guò)程規(guī)范（如靜脈血采集時(shí)止血帶使用≤1分鐘）、采集后初步檢查（如血樣無(wú)溶血、凝塊）；（2）二級(jí)質(zhì)控（入庫(kù)端）：由樣本庫(kù)技術(shù)人員負(fù)責(zé)，內(nèi)容包括外觀檢查（如血清無(wú)乳糜、溶血）、關(guān)鍵指標(biāo)檢測(cè)（如DNA樣本的OD260/280比值1.8-2.0）、存儲(chǔ)條件驗(yàn)證（如-80℃冰箱溫度波動(dòng)≤±5℃）；（3）三級(jí)質(zhì)控（使用端）：由樣本使用方（如科研人員）負(fù)責(zé)，內(nèi)容包括使用前復(fù)核（樣本ID與實(shí)驗(yàn)需求匹配）、功能驗(yàn)證（如細(xì)胞樣本的臺(tái)盼藍(lán)存活率≥85%）、結(jié)果反饋（如檢測(cè)異常時(shí)追溯樣本處理流程）。4.說(shuō)明運(yùn)輸生物樣本時(shí)溫度監(jiān)控的具體要求（以-80℃保存的組織樣本為例）。答案：（1）運(yùn)輸容器：使用符合EN1251-2標(biāo)準(zhǔn)的超低溫運(yùn)輸箱（如干冰運(yùn)輸箱，有效保冷時(shí)間≥72小時(shí)）；（2）溫度監(jiān)測(cè)設(shè)備：需內(nèi)置電子溫度記錄儀（精度±0.5℃），具備實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)存儲(chǔ)和超限報(bào)警功能（如溫度＞-60℃時(shí)聲光報(bào)警）；（3）監(jiān)測(cè)頻率：運(yùn)輸過(guò)程中每15分鐘自動(dòng)記錄一次溫度，交接時(shí)需提供完整的溫度曲線；（4）應(yīng)急處理：若運(yùn)輸途中溫度超標(biāo)（如干冰不足導(dǎo)致溫度上升），需立即聯(lián)系接收方，評(píng)估樣本質(zhì)量（如通過(guò)RIN值檢測(cè)RNA完整性），必要時(shí)啟動(dòng)備用運(yùn)輸方案（如更換干冰）；（5）記錄保存：溫度記錄需至少保存3年（或與樣本保存期一致），作為質(zhì)量追溯的依據(jù)。四、案例分析題（共10分）某三甲醫(yī)院檢驗(yàn)科收到外送的20份腫瘤組織樣本（要求-80℃保存），但接收時(shí)發(fā)現(xiàn)運(yùn)輸箱內(nèi)干冰已完全升華，箱內(nèi)溫度顯示為-15℃（運(yùn)輸時(shí)間為48小時(shí)）。實(shí)驗(yàn)室對(duì)其中5份樣本進(jìn)行RNA提取，測(cè)得RIN值（RNA完整性指數(shù)）均＜5（正常應(yīng)≥7）。問(wèn)題：（1）分析導(dǎo)致RNA降解的可能原因；（2）提出后續(xù)應(yīng)采取的處理措施。答案：（1）可能原因：①運(yùn)輸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：干冰的有效保冷時(shí)間通常為24-36小時(shí)（取決于運(yùn)輸箱容量），48小時(shí)超出保冷能力，導(dǎo)致樣本長(zhǎng)時(shí)間處于-15℃（高于RNA穩(wěn)定保存的-20℃臨界溫度）；②包裝不符合要求：可能未使用專業(yè)超低溫運(yùn)輸箱（如普通泡沫箱保冷效果差），或干冰填充量不足（標(biāo)準(zhǔn)填充量應(yīng)為樣本體積的3-5倍）；③溫度監(jiān)控缺失：未在運(yùn)輸箱內(nèi)放置有效的溫度記錄儀，或記錄儀未及時(shí)報(bào)警，導(dǎo)致未能及時(shí)補(bǔ)充干冰；④樣本前處理不當(dāng)：采集后未及時(shí)冷凍（如超過(guò)30分鐘未放入-80℃冰箱），導(dǎo)致RNA酶提前激活。（2）處理措施：①樣本評(píng)估：對(duì)所有20份樣本進(jìn)行RNA完整性檢測(cè)（RIN值）和DNA片段分析（如瓊脂糖凝膠電泳），標(biāo)記RIN≥5的樣本為“可用但需謹(jǐn)慎”，RIN＜5的標(biāo)記為“不可用”；②原因追溯：調(diào)取運(yùn)輸記錄（如物流單、溫度曲線），核查運(yùn)輸公司是否按合同要求使用超低溫運(yùn)輸箱，干冰填充量是否符合標(biāo)準(zhǔn)；③責(zé)任認(rèn)定：若因運(yùn)輸方操作失誤（如未及時(shí)補(bǔ)充干冰），按合同要求索賠；若因醫(yī)院包裝不當(dāng)（如干冰量不足），需優(yōu)化內(nèi)部運(yùn)輸流程；④流程改進(jìn)：-縮短運(yùn)輸時(shí)間：選擇航空運(yùn)輸（縮短至2