生物藥層析柱壓力穩(wěn)定性測試技師（中級）考試試卷及答案一、填空題（每題1分，共10分）1.層析柱常用壓力單位有psi和______。2.反相層析柱常用固定相填料是______鍵合硅膠。3.層析柱壓力隨流動相流速增加而______（填“增大”“減小”或“不變”）。4.壓力穩(wěn)定性測試需保持流速、流動相組成及______恒定。5.離子交換層析壓力異常升高可能因______堵塞導(dǎo)致。6.層析柱壓力測試常規(guī)溫度控制在______℃左右。7.常規(guī)HPLC分析柱壓力上限一般不超過______psi。8.壓力穩(wěn)定性測試需記錄初始壓力和______后的壓力變化。9.疏水相互作用層析（HIC）中，流動相鹽濃度降低會使壓力______（填“降低”或“升高”）。10.層析柱壓力異常波動可能與______系統(tǒng)泄漏有關(guān)。二、單項選擇題（每題2分，共20分）1.下列哪種情況會導(dǎo)致層析柱壓力持續(xù)升高？A.流動相溫度升高B.填料壓實過度C.流速降低D.鹽濃度降低2.壓力穩(wěn)定性測試的核心目的是？A.驗證填料純度B.確認(rèn)柱性能穩(wěn)定性C.檢測流動相pHD.測量樣品濃度3.離子交換層析柱壓力測試時，流動相應(yīng)避免？A.含緩沖鹽B.含有機溶劑C.含顆粒雜質(zhì)D.含目標(biāo)蛋白4.常規(guī)HPLC柱壓力上限一般不超過？A.3000psiB.4000psiC.5000psiD.6000psi5.下列哪種操作會導(dǎo)致柱壓力瞬間升高？A.切換流動相未平衡B.流速突然增加C.溫度突然升高D.樣品進樣量減少6.壓力穩(wěn)定性測試中壓力下降明顯，最可能原因是？A.填料流失B.流動相粘度增加C.流速穩(wěn)定D.溫度降低7.反相層析柱壓力測試常用有機相是？A.甲醇B.乙腈C.乙醇D.丙酮8.層析柱壓力測試常規(guī)時間周期為？A.10minB.30minC.1hD.2h9.下列屬于親和層析填料的是？A.ProteinAB.C18C.DEAED.CM10.壓力穩(wěn)定性測試需監(jiān)控的參數(shù)不包括？A.壓力B.流速C.溫度D.樣品純度三、多項選擇題（每題2分，共20分）1.影響層析柱壓力的因素包括？A.流速B.流動相粘度C.填料粒徑D.柱長2.壓力異常升高的可能原因有？A.填料堵塞B.流速過快C.流動相含顆粒D.溫度升高3.壓力穩(wěn)定性測試的關(guān)鍵控制條件包括？A.流速恒定B.溫度恒定C.流動相組成恒定D.pH恒定4.離子交換層析壓力測試需避免的操作是？A.流動相過濾B.流速超柱上限C.樣品未過濾D.溫度波動5.層析柱壓力測試的步驟包括？A.柱平衡B.設(shè)定流速C.記錄壓力變化D.更換填料6.壓力波動的可能原因有？A.泵氣泡B.管路泄漏C.溫度變化D.填料不均7.反相層析柱壓力測試流動相選擇原則是？A.粘度適中B.與填料兼容C.無顆粒D.含高濃度鹽8.壓力穩(wěn)定性測試合格標(biāo)準(zhǔn)包括？A.壓力波動≤5%初始值B.無持續(xù)壓力升高C.流速穩(wěn)定D.溫度達(dá)標(biāo)9.親和層析柱壓力測試需注意的是？A.避免配基脫落B.控制流速在耐受范圍C.流動相不含蛋白酶D.無需過濾流動相10.導(dǎo)致柱壓力下降的情況有？A.填料流失B.流動相粘度降低C.柱床塌陷D.流速降低四、判斷題（每題2分，共20分）1.層析柱壓力隨流速增加呈線性關(guān)系。（）2.溫度升高使流動相粘度降低，柱壓力下降。（）3.壓力穩(wěn)定性測試只需記錄初始壓力。（）4.離子交換層析鹽濃度越高，柱壓力越高。（）5.填料粒徑越小，柱壓力越低。（）6.親和層析柱可用高濃度尿素作流動相測試壓力。（）7.壓力波動超10%初始值為不合格。（）8.層析柱壓力測試前無需過濾流動相。（）9.反相層析柱測試中乙腈比甲醇更常用。（）10.柱長越長，柱壓力越高。（）五、簡答題（每題5分，共20分）1.簡述層析柱壓力穩(wěn)定性測試的基本步驟。2.分析層析柱壓力持續(xù)升高的常見原因及解決方法。3.簡述溫度對層析柱壓力的影響及控制要點。4.離子交換層析柱壓力測試需注意哪些事項？六、討論題（每題5分，共10分）1.討論層析柱壓力穩(wěn)定性與生物藥純度的關(guān)系，及如何通過壓力測試間接評估柱性能。2.討論生物藥生產(chǎn)中，層析柱壓力穩(wěn)定性測試的重要性及日常維護要點。---答案部分一、填空題1.bar2.C18（十八烷基）3.增大4.溫度5.填料顆粒（樣品雜質(zhì)）6.257.40008.運行預(yù)設(shè)時間（1h）9.降低10.泵（管路）二、單項選擇題1.B2.B3.C4.B5.B6.A7.B8.C9.A10.D三、多項選擇題1.ABCD2.ABC3.ABCD4.BCD5.ABC6.ABCD7.ABC8.AB9.ABC10.ABC四、判斷題1.×2.√3.×4.√5.×6.×7.√8.×9.√10.√五、簡答題1.①柱準(zhǔn)備：安裝柱并連接系統(tǒng)；②流動相準(zhǔn)備：過濾（0.22μm）、脫氣；③系統(tǒng)平衡：設(shè)定流速（1mL/min）、溫度（25℃），平衡至壓力穩(wěn)定；④記錄初始壓力；⑤運行1h，每10min記錄壓力；⑥判斷：波動≤5%初始值則合格；⑦柱后沖洗保存。2.原因：①填料堵塞（樣品/流動相含顆粒）；②流速過快；③填料壓實過度；④溫度過低。解決：①過濾樣品/流動相；②降流速至推薦范圍；③重新裝柱；④調(diào)溫至25℃；⑤堵塞嚴(yán)重則反沖或換填料。3.影響：溫度升→粘度降→壓力降；溫度降→粘度升→壓力升?？刂疲孩儆弥鶞叵淇販兀?5℃±1℃）；②預(yù)熱流動相；③記錄溫度確保可重復(fù)；④高鹽流動相應(yīng)嚴(yán)格控溫。4.①流動相過濾脫氣；②流速不超柱上限；③pH與填料兼容；④樣品過濾；⑤每10min記錄壓力；⑥柱后用高鹽緩沖液沖洗；⑦避免溫度波動、泵氣泡。六、討論題1.壓力穩(wěn)定是柱性能良好的體現(xiàn)，直接影響純度：①壓力異常升→填料堵塞→分離不均→純度降；②壓力降→填料流失→柱床塌陷→純度低。間接評估：①波動≤5%→柱床穩(wěn)定，純度可靠；②持續(xù)升→排查雜質(zhì)，避免純度受影響；③驟降→換柱，否則純度