慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的動態(tài)變化及腦保護(hù)機(jī)制探究一、引言1.1研究背景慢性腦血流低灌注是一種廣泛存在于高齡人群中的病理狀態(tài)，其主要表現(xiàn)為腦局部血流量減少和大腦組織代謝功能降低。隨著全球人口老齡化的加劇，慢性腦血流低灌注的發(fā)病率呈上升趨勢，嚴(yán)重威脅著老年人的健康和生活質(zhì)量。據(jù)相關(guān)研究表明，在80歲以上的老人中，約80％存在不同程度的慢性腦血流低灌注情況，在60歲以上人群中約占70％，甚至在45-50歲人群中，約1/4以上也存在這種情況，發(fā)病人群越來越趨向年輕化，已成為危害中老年人健康的“隱形殺手”。慢性腦血流低灌注若不及時干預(yù)和治療，會引發(fā)多種嚴(yán)重后果。長期腦供血不足會導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙，患者可能出現(xiàn)記憶力減退、注意力不集中、執(zhí)行力下降等癥狀，嚴(yán)重影響日常生活和工作。運動障礙也是常見的后果之一，患者可能表現(xiàn)出肢體無力、協(xié)調(diào)性下降、步態(tài)不穩(wěn)等，降低了生活自理能力。感覺異常同樣不容忽視，面部、四肢麻木或刺痛等感覺異常會給患者帶來不適。情緒障礙如抑郁、焦慮等也較為常見，嚴(yán)重影響患者的心理健康。部分患者還可能出現(xiàn)言語障礙，表現(xiàn)為言語不清、表達(dá)困難等。從病理學(xué)角度來看，慢性腦缺血可引起腦白質(zhì)損害，導(dǎo)致認(rèn)知功能損害，其白質(zhì)改變與小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、活化以及少突膠質(zhì)細(xì)胞減少有關(guān)。慢性腦缺血還會導(dǎo)致海馬神經(jīng)元進(jìn)行性減少，組織學(xué)改變進(jìn)行性加重，而海馬在認(rèn)知功能中起著重要作用，海馬神經(jīng)元損害會伴隨認(rèn)知功能減退。Hos（H2S/Cys）作為一種高活性的硫化物，在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的保護(hù)神經(jīng)元作用，具有重要的神經(jīng)保護(hù)功能。Hos可以通過多種途徑發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用。它能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)元的代謝活動，維持神經(jīng)元的正常生理功能。在氧化應(yīng)激環(huán)境下，Hos可以作為一種抗氧化劑，減輕自由基對神經(jīng)元的損傷。研究表明，Hos能夠上調(diào)抗氧化酶的活性，如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等，降低氧化應(yīng)激產(chǎn)物的水平，從而保護(hù)神經(jīng)元免受氧化損傷。Hos還可以調(diào)節(jié)神經(jīng)元的信號傳導(dǎo)通路，抑制細(xì)胞凋亡信號的激活，促進(jìn)神經(jīng)元的存活和修復(fù)。目前，對于慢性腦血流低灌注的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，治療手段也相對有限。因此，深入研究慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的動態(tài)變化及其腦保護(hù)機(jī)制，對于進(jìn)一步認(rèn)識慢性腦血流低灌注的發(fā)病機(jī)制和尋找有效的治療手段具有重要的理論和現(xiàn)實意義。通過揭示Hos在慢性腦血流低灌注過程中的作用機(jī)制，有望為開發(fā)新的治療藥物和方法提供理論依據(jù)，為改善慢性腦血流低灌注患者的預(yù)后和生活質(zhì)量帶來新的希望。1.2研究目的本研究旨在通過建立慢性腦血流低灌注大鼠模型，深入探討Hos在慢性腦血流低灌注狀態(tài)下的動態(tài)變化規(guī)律，明確其對大鼠腦保護(hù)作用的影響，并揭示其在神經(jīng)元凋亡和氧化應(yīng)激損傷方面的保護(hù)機(jī)制，具體目標(biāo)如下：觀察慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的動態(tài)變化：采用高效液相色譜法（HPLC）等先進(jìn)技術(shù)，精準(zhǔn)檢測不同時間點慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的含量，繪制其動態(tài)變化曲線，清晰呈現(xiàn)Hos在慢性腦血流低灌注過程中的濃度變化趨勢，為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。研究不同劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦保護(hù)作用的影響：將大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組和實驗組，實驗組給予不同劑量的Hos干預(yù)。通過行為學(xué)測試、神經(jīng)功能評分等多種手段，全面評估不同劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠認(rèn)知功能、運動功能等神經(jīng)功能的改善情況，確定Hos發(fā)揮腦保護(hù)作用的最佳劑量范圍。探討Hos對慢性腦血流低灌注大鼠神經(jīng)元凋亡和氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用：運用RT-PCR法和Westernblot法等分子生物學(xué)技術(shù)，檢測各組大鼠腦組織中神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白（如Bax、Bcl-2、Caspase-3等）、氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白（如SOD、GSH-Px、MDA等）和炎癥相關(guān)因子（如TNF-α、IL-1β、IL-6等）的表達(dá)水平，從分子層面深入剖析Hos對慢性腦血流低灌注大鼠神經(jīng)元凋亡和氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用機(jī)制，為開發(fā)新的治療藥物和方法提供理論依據(jù)。1.3研究意義本研究致力于慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的動態(tài)變化及其腦保護(hù)機(jī)制，其理論與臨床應(yīng)用意義深遠(yuǎn)。從理論層面而言，慢性腦血流低灌注的發(fā)病機(jī)制一直是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究重點與難點。盡管當(dāng)前已有眾多研究，但尚未能完全明確其確切機(jī)制。本研究深入探究Hos在慢性腦血流低灌注狀態(tài)下的動態(tài)變化規(guī)律以及腦保護(hù)機(jī)制，能夠為該領(lǐng)域的理論研究注入新的活力。通過揭示Hos在慢性腦血流低灌注過程中對神經(jīng)元凋亡和氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用機(jī)制，有望填補當(dāng)前理論研究的空白，進(jìn)一步完善對慢性腦血流低灌注發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識。這不僅有助于加深我們對神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)病機(jī)制的理解，還能為后續(xù)相關(guān)研究提供重要的理論基礎(chǔ)和研究思路，推動整個領(lǐng)域的發(fā)展。從臨床應(yīng)用角度來看，慢性腦血流低灌注患者數(shù)量眾多，且目前缺乏有效的治療手段，患者的預(yù)后和生活質(zhì)量亟待改善。本研究成果具有重要的臨床應(yīng)用價值，為開發(fā)新的治療藥物和方法提供了堅實的理論依據(jù)。通過明確Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦保護(hù)作用的影響以及最佳劑量范圍，有望將Hos開發(fā)成為一種新型的治療藥物，為患者帶來新的治療選擇。本研究還能為臨床醫(yī)生提供更深入的治療思路和方法，有助于優(yōu)化治療方案，提高治療效果，從而顯著改善患者的預(yù)后和生活質(zhì)量，減輕患者家庭和社會的負(fù)擔(dān)。二、材料與方法2.1實驗動物本實驗選用40只健康的雄性Wistar大鼠，體重在250-300g之間。選擇Wistar大鼠的原因在于，其具有遺傳背景穩(wěn)定、對實驗條件耐受性好、生長繁殖性能良好等優(yōu)點，在慢性腦血流低灌注相關(guān)研究中應(yīng)用廣泛，能夠為實驗結(jié)果提供可靠的基礎(chǔ)。同時，選用雄性大鼠可避免雌激素對實驗結(jié)果可能產(chǎn)生的干擾，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。將40只大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組和實驗組，每組各10只。對照組大鼠不進(jìn)行任何手術(shù)處理，正常飼養(yǎng)；模型組大鼠通過手術(shù)建立慢性腦血流低灌注模型；實驗組大鼠在建立慢性腦血流低灌注模型后，給予不同劑量的Hos干預(yù)。分組的隨機(jī)性有助于減少實驗誤差，使每組大鼠在生理狀態(tài)、遺傳背景等方面具有相似性，從而更好地對比不同處理因素對實驗結(jié)果的影響。所有大鼠均飼養(yǎng)于溫度為22±2℃、相對濕度為50%-60%的動物房內(nèi)，采用12h光照/12h黑暗的循環(huán)照明系統(tǒng)，自由進(jìn)食和飲水。適宜的飼養(yǎng)環(huán)境能夠保證大鼠的正常生理狀態(tài)，減少環(huán)境因素對實驗結(jié)果的干擾，為實驗的順利進(jìn)行提供保障。2.2主要實驗試劑與儀器本實驗所需的主要試劑包括：Hos溶液（純度≥98%），購自Sigma-Aldrich公司，用于對實驗組大鼠進(jìn)行干預(yù)，探究其對慢性腦血流低灌注大鼠的腦保護(hù)作用。戊巴比妥鈉（純度≥99%），購自Merck公司，用于麻醉大鼠，確保手術(shù)過程中大鼠的無痛與安靜，保障手術(shù)的順利進(jìn)行。多聚甲醛（純度≥99%），購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，用于固定大鼠腦組織，以便后續(xù)進(jìn)行組織學(xué)檢測和分析。Trizol試劑，購自Invitrogen公司，用于提取大鼠腦組織中的總RNA，為后續(xù)的RT-PCR實驗提供原料。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR試劑盒，均購自TaKaRa公司，用于將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測相關(guān)基因的表達(dá)水平?？贵w（包括抗Bax抗體、抗Bcl-2抗體、抗Caspase-3抗體、抗SOD抗體、抗GSH-Px抗體、抗MDA抗體、抗TNF-α抗體、抗IL-1β抗體、抗IL-6抗體等），購自Abcam公司，用于Westernblot實驗，檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。實驗所需的主要儀器有：高效液相色譜儀（HPLC），型號為Agilent1260，購自Agilent公司，用于檢測慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的含量，其具有高分離效能、高靈敏度、高分辨率和快速分析等特點，能夠準(zhǔn)確測定Hos的含量變化。酶標(biāo)儀，型號為ThermoScientificMultiskanGO，購自ThermoFisherScientific公司，用于檢測ELISA實驗結(jié)果，通過測定吸光度來定量分析相關(guān)因子的含量。PCR儀，型號為Bio-RadCFX96，購自Bio-Rad公司，用于進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，精確控制反應(yīng)條件，保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。凝膠成像系統(tǒng)，型號為Bio-RadChemiDocMP，購自Bio-Rad公司，用于對Westernblot實驗結(jié)果進(jìn)行成像和分析，直觀呈現(xiàn)蛋白表達(dá)情況。電子天平，型號為SartoriusCPA225D，購自Sartorius公司，用于準(zhǔn)確稱量試劑和藥品，確保實驗試劑的精確配制。2.3慢性腦血流低灌注大鼠模型的建立本實驗采用改良的雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎法建立慢性腦血流低灌注大鼠模型。該方法具有操作相對簡單、重復(fù)性好、能較好模擬慢性腦血流低灌注病理生理改變等優(yōu)點，在相關(guān)研究中被廣泛應(yīng)用。具體手術(shù)步驟如下：將大鼠放入麻醉箱中，用含2%異氟醚的70%氧化亞氮和30%氧氣的混合氣體以5L/min的氧氣流速進(jìn)行麻醉誘導(dǎo)，3-5min后，大鼠進(jìn)入麻醉狀態(tài)，之后以1L/min的氧氣流速進(jìn)行維持。術(shù)前用脫毛膏對大鼠頸腹部手術(shù)區(qū)域進(jìn)行褪毛處理，然后用聚維酮碘常規(guī)消毒手術(shù)區(qū)域。為了精確控制平均動脈壓、動脈血氣量和血糖含量，同時行尾動脈插管；把2根電極通過小的皮膚切口插入雙側(cè)顳肌，以獲取腦電圖，在整個實驗中，平均動脈血壓和腦電圖的獲取依賴動力實驗系統(tǒng)。通過尾動脈抽取動脈血，運用動脈血氣體分析儀和血漿葡萄糖測定儀，對血氣和血糖含量進(jìn)行測定，在缺血前15min和缺血后15min對動脈血氣和血糖含量進(jìn)行測定，確保在整個實驗過程中血液氣體含量都保持在正常的生理范圍內(nèi)。在大鼠腹側(cè)頸部皮膚正中線處做一個2-3cm的切口，使用眼科鑷小心分離兩側(cè)的頸總動脈和周圍組織以及迷走神經(jīng)，操作過程中需格外小心，避免損傷血管和神經(jīng)。把直腸溫度探測器插入到直腸中監(jiān)測體溫，將熱電耦33G溫度探測器植入顳肌，監(jiān)測頭部溫度，在動物身體和頭部上方放置熱光源，使身體和頭部溫度在整個手術(shù)過程中保持在(37±0.2)℃，穩(wěn)定的體溫對于維持大鼠的生理功能和手術(shù)的順利進(jìn)行至關(guān)重要。當(dāng)所有的準(zhǔn)備工作已經(jīng)完成時，將異氟醚的濃度保持在1%。在缺血前15min，再次監(jiān)測血壓中的氣體含量、平均動脈血壓、腦電圖、直腸和頭部溫度，確保各項指標(biāo)均保持在正常的生理范圍內(nèi)。然后，將兩側(cè)頸總動脈用外科絲縫線5-0進(jìn)行雙重結(jié)扎，以誘導(dǎo)腦血流低灌注，結(jié)扎時需確保結(jié)扎牢固，避免血管再通。最后，用絲線縫合皮膚，結(jié)束麻醉過程。大鼠仍然需要進(jìn)行70%氧化亞氮和30%氧氣的混合氣體輔助呼吸，并且保持顳肌和直腸的溫度在37℃，直到它從麻醉狀態(tài)清醒過來，此過程通常需要30-60min。移除頭部和直腸溫度探測器后，把大鼠放回到其原來的籠子。密切監(jiān)控大鼠呼吸，直到呼吸恢復(fù)平穩(wěn)，1-2h后，大鼠可以轉(zhuǎn)移至動物房，常規(guī)供應(yīng)食物和水。術(shù)后護(hù)理對于大鼠的恢復(fù)和模型的成功建立同樣重要。術(shù)后密切觀察大鼠的生命體征，包括體溫、呼吸、心率等，確保大鼠的身體狀況穩(wěn)定。保持飼養(yǎng)環(huán)境的清潔衛(wèi)生，定期更換墊料，防止傷口感染。給予大鼠充足的食物和水，保證其營養(yǎng)攝入，促進(jìn)身體恢復(fù)。在術(shù)后恢復(fù)期間，避免對大鼠進(jìn)行過度的驚擾，為其提供一個安靜、舒適的環(huán)境。模型優(yōu)勢方面，雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎法能夠造成腦血流的持續(xù)性下降，較好地模擬慢性缺血所致的病理改變，如脫髓鞘改變、軸突丟失、膠質(zhì)細(xì)胞增生等白質(zhì)損傷的病理改變，為研究慢性腦血流低灌注的發(fā)病機(jī)制和治療方法提供了良好的模型基礎(chǔ)。同時，該模型操作相對簡單，重復(fù)性好，死亡率低，便于大規(guī)模實驗研究的開展。為驗證模型的成功建立，在術(shù)后不同時間點采用激光多普勒血流儀檢測大鼠腦血流量。具體操作如下：將大鼠麻醉后，固定于立體定位儀上，在顱骨表面鉆一小孔，將激光多普勒血流儀的探頭輕輕放置于硬腦膜表面，測量腦血流量。與對照組相比，模型組大鼠腦血流量明顯降低，且在術(shù)后1周、2周、3周、4周時腦血流量均維持在較低水平，表明慢性腦血流低灌注模型建立成功。還可通過觀察大鼠的行為學(xué)變化來驗證模型，模型組大鼠在術(shù)后可能出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙、運動能力下降等表現(xiàn)，如Morris水迷宮實驗中，模型組大鼠尋找平臺的潛伏期明顯延長，空間探索實驗中平臺象限停留時間及跨越平臺象限次數(shù)明顯減少。2.4實驗分組與干預(yù)措施將40只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組和實驗組，每組各10只。對照組大鼠不進(jìn)行任何手術(shù)處理，正常飼養(yǎng)，作為正常生理狀態(tài)的對照，用于對比其他組大鼠在實驗處理后的各項指標(biāo)變化。模型組大鼠通過手術(shù)建立慢性腦血流低灌注模型，具體手術(shù)方法如前文所述。模型組大鼠不給予Hos干預(yù)，用于觀察慢性腦血流低灌注狀態(tài)下大鼠自身的生理變化和病理發(fā)展，為實驗組提供對比基礎(chǔ)。實驗組大鼠在建立慢性腦血流低灌注模型后，給予不同劑量的Hos干預(yù)。具體分為低劑量實驗組、中劑量實驗組和高劑量實驗組，每組各10只。低劑量實驗組給予Hos劑量為10μmol/kg，中劑量實驗組給予Hos劑量為20μmol/kg，高劑量實驗組給予Hos劑量為40μmol/kg。給藥方式為腹腔注射，每天一次，連續(xù)給藥4周。選擇腹腔注射的原因在于該方式能夠使藥物快速吸收，進(jìn)入血液循環(huán)，從而迅速作用于全身，保證藥物在體內(nèi)的有效濃度，使實驗結(jié)果更具可靠性和可分析性。通過設(shè)置不同劑量的實驗組，可以探究不同劑量的Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦保護(hù)作用的差異，確定Hos發(fā)揮腦保護(hù)作用的最佳劑量范圍，為后續(xù)臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。2.5動態(tài)監(jiān)測Hos濃度的方法本實驗采用高效液相色譜法（HPLC）動態(tài)監(jiān)測慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的濃度變化。HPLC是一種基于色譜法原理的分離與分析技術(shù)，具有高分離效能、高靈敏度、高分辨率和快速分析等特點，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用于化合物的分離、鑒定和定量分析。HPLC的基本原理是利用高壓輸液泵將流動相（通常為液體）通過固定相（通常是固體或液體顆粒）對樣品進(jìn)行分離。在本實驗中，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，隨流動相流動而被載入色譜柱內(nèi)。由于Hos與其他雜質(zhì)在流動相和固定相中的分配系數(shù)不同，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過不斷的吸附-解吸這樣一個分配過程，Hos與其他雜質(zhì)之間漸漸拉開距離，最終以相互分離的狀態(tài)依次從柱內(nèi)流出。利用檢測器的傳感器將Hos濃度轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，以圖譜形式將Hos的數(shù)據(jù)打印出來。操作步驟如下：在實驗設(shè)定的不同時間點（如術(shù)后1天、3天、1周、2周、3周、4周），將大鼠用戊巴比妥鈉（50mg/kg，腹腔注射）深度麻醉后，迅速斷頭取腦，分離出大腦組織。將大腦組織用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈，去除表面的血液和雜質(zhì)，然后用濾紙吸干水分。準(zhǔn)確稱取0.1g大腦組織，放入預(yù)冷的勻漿器中，加入1mL預(yù)冷的0.1mol/L鹽酸溶液，在冰浴條件下充分勻漿。將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管中，12000r/min離心15min，取上清液備用。取適量上清液，用0.22μm微孔濾膜過濾，去除其中的雜質(zhì)和顆粒，以保證進(jìn)樣的準(zhǔn)確性和色譜柱的使用壽命。將過濾后的樣品注入高效液相色譜儀中，設(shè)置合適的色譜條件：色譜柱選擇C18反相色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），該色譜柱對Hos具有良好的分離效果；流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶液（體積比為30:70），通過優(yōu)化流動相的組成和比例，能夠?qū)崿F(xiàn)Hos與其他雜質(zhì)的有效分離；流速為1.0mL/min，流速的選擇需要保證分離的效果以及設(shè)備的正常運行；柱溫為30℃，合適的柱溫有助于提高分離效果和樣品的穩(wěn)定性；檢測波長為330nm，該波長下Hos具有較強(qiáng)的吸收，能夠提高檢測的靈敏度。數(shù)據(jù)處理方面，通過高效液相色譜儀自帶的數(shù)據(jù)處理軟件，對采集到的色譜圖進(jìn)行分析。首先，確定Hos的保留時間，即Hos從進(jìn)樣口進(jìn)入色譜柱到檢測器檢測到的時間，通過與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間進(jìn)行對比，對Hos進(jìn)行定性分析。然后，計算Hos色譜峰的峰面積，峰面積代表了Hos的含量，通過峰面積計算來定量分析Hos的濃度。為了提高定量分析的準(zhǔn)確性，采用外標(biāo)法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體操作是，配制一系列不同濃度的Hos標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述色譜條件進(jìn)行分析，以Hos標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，計算出樣品中Hos的濃度。為了確保實驗結(jié)果的可靠性，每個時間點的樣品均進(jìn)行3次平行測定，取平均值作為該時間點Hos的濃度，并計算標(biāo)準(zhǔn)差，以評估數(shù)據(jù)的離散程度。2.6神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)及處理原代培養(yǎng)神經(jīng)元時，選取新生24h內(nèi)的Wistar大鼠，在無菌條件下迅速取出大腦，放入預(yù)冷的D-Hanks液中清洗，去除表面的血液和腦膜等組織。將大腦組織轉(zhuǎn)移至含有0.125%胰蛋白酶的消化液中，在37℃恒溫箱中消化15-20min，期間輕輕振蕩，使組織充分消化。消化完成后，加入含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基終止消化，用吸管輕輕吹打組織，使其分散成單細(xì)胞懸液。將單細(xì)胞懸液通過200目篩網(wǎng)過濾，去除未消化的組織塊和細(xì)胞團(tuán)，然后將濾液轉(zhuǎn)移至離心管中，1000r/min離心5min，棄上清液。用含有10%胎牛血清、1%雙抗（青霉素和鏈霉素）的DMEM/F12培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10^6個/mL，接種于預(yù)先用多聚賴氨酸包被的6孔板中，每孔接種2mL細(xì)胞懸液。將6孔板放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后更換培養(yǎng)基，去除未貼壁的細(xì)胞，之后每2-3天更換一次培養(yǎng)基。在培養(yǎng)過程中，可通過顯微鏡觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)，可見神經(jīng)元逐漸伸出突起，形成網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)。將原代培養(yǎng)的神經(jīng)元分為對照組、模型組和實驗組。對照組神經(jīng)元正常培養(yǎng)，不進(jìn)行任何處理，作為正常生長狀態(tài)的對照。模型組神經(jīng)元在培養(yǎng)至第7天時，更換為含有0.1mMCoCl2的培養(yǎng)基，模擬慢性腦血流低灌注狀態(tài)，培養(yǎng)24h，以誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷。實驗組神經(jīng)元在培養(yǎng)至第7天時，先更換為含有不同劑量Hos（低劑量組為10μM，中劑量組為20μM，高劑量組為40μM）的培養(yǎng)基，預(yù)處理2h，然后再更換為含有0.1mMCoCl2和相應(yīng)劑量Hos的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24h。通過設(shè)置不同處理組，能夠?qū)Ρ确治鯤os對慢性腦血流低灌注狀態(tài)下神經(jīng)元的保護(hù)作用。2.7檢測指標(biāo)及方法2.7.1神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白檢測采用RT-PCR法檢測大鼠腦組織中神經(jīng)元凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2、Caspase-3的mRNA表達(dá)水平。RT-PCR技術(shù)的原理是利用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后以cDNA為模板，在DNA聚合酶的作用下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過擴(kuò)增產(chǎn)物的量來反映基因的表達(dá)水平。具體操作步驟如下：在實驗設(shè)定的時間點，迅速取大鼠腦組織，加入Trizol試劑，按照試劑說明書的方法提取總RNA。使用分光光度計測定RNA的濃度和純度，確保RNA的質(zhì)量符合后續(xù)實驗要求。將提取的總RNA按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，得到cDNA。以cDNA為模板，使用特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。引物序列根據(jù)GenBank中大鼠Bax、Bcl-2、Caspase-3基因的序列設(shè)計，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR反應(yīng)體系包括cDNA模板、上下游引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶和PCR緩沖液。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環(huán)；最后72℃延伸10min。PCR擴(kuò)增結(jié)束后，取5μL擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照，根據(jù)條帶的亮度和位置來判斷基因的表達(dá)情況。采用QuantityOne軟件分析條帶的灰度值，以β-actin作為內(nèi)參基因，計算目的基因的相對表達(dá)量，計算公式為：目的基因相對表達(dá)量=目的基因灰度值/β-actin灰度值。采用Westernblot法檢測大鼠腦組織中Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá)水平。Westernblot法的原理是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白質(zhì)分離，然后將分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相膜上，再用特異性抗體與膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，通過檢測抗體的信號來確定蛋白質(zhì)的表達(dá)量。具體操作步驟如下：取大鼠腦組織，加入適量的RIPA裂解液，在冰浴條件下充分勻漿，然后12000r/min離心15min，取上清液，采用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。取適量的蛋白樣品，加入5×上樣緩沖液，煮沸5min使蛋白質(zhì)變性。將變性后的蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電泳結(jié)束后，將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。將PVDF膜放入5%脫脂奶粉中，室溫封閉1h，以減少非特異性結(jié)合。封閉結(jié)束后，用TBST緩沖液洗滌3次，每次10min。加入一抗（抗Bax抗體、抗Bcl-2抗體、抗Caspase-3抗體，均按1:1000稀釋），4℃孵育過夜。次日，用TBST緩沖液洗滌3次，每次10min，然后加入二抗（HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG，按1:5000稀釋），室溫孵育1h。再次用TBST緩沖液洗滌3次，每次10min，然后加入ECL化學(xué)發(fā)光試劑，在凝膠成像系統(tǒng)下曝光、顯影，觀察并拍照。采用QuantityOne軟件分析條帶的灰度值，以β-actin作為內(nèi)參蛋白，計算目的蛋白的相對表達(dá)量，計算公式為：目的蛋白相對表達(dá)量=目的蛋白灰度值/β-actin灰度值。2.7.2氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白檢測檢測大鼠腦組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)。SOD是一種重要的抗氧化酶，能夠催化超氧陰離子自由基歧化生成氧氣和過氧化氫，從而減少自由基對細(xì)胞的損傷；MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，其含量可以反映機(jī)體氧化應(yīng)激的程度；GSH-Px則是一種含硒的抗氧化酶，能夠催化谷胱甘肽（GSH）還原過氧化氫和有機(jī)過氧化物，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。采用黃嘌呤氧化酶法檢測SOD活性。具體操作步驟為：取大鼠腦組織，加入適量的預(yù)冷生理鹽水，在冰浴條件下勻漿，然后3000r/min離心10min，取上清液備用。按照SOD檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）的說明書進(jìn)行操作，將上清液與試劑混合，在37℃孵育一段時間后，加入顯色劑，在550nm波長下測定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算SOD的活性，單位為U/mgprot。采用硫代巴比妥酸（TBA）法檢測MDA含量。取腦組織勻漿上清液，按照MDA檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）的說明書進(jìn)行操作，將上清液與試劑混合，在95℃水浴中加熱一段時間，使MDA與TBA反應(yīng)生成紅色產(chǎn)物，冷卻后在532nm波長下測定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算MDA的含量，單位為nmol/mgprot。采用DTNB法檢測GSH-Px活性。取腦組織勻漿上清液，按照GSH-Px檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）的說明書進(jìn)行操作，將上清液與試劑混合，在37℃孵育一段時間后，加入DTNB試劑，在412nm波長下測定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算GSH-Px的活性，單位為U/mgprot。通過檢測這些氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)，可以全面了解Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦組織氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響，為揭示其腦保護(hù)機(jī)制提供重要依據(jù)。2.7.3炎癥相關(guān)因子檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測大鼠腦組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎癥相關(guān)因子的含量。ELISA的原理是基于抗原與抗體的特異性結(jié)合，將已知的抗原或抗體包被在固相載體表面，然后加入待檢測的樣品和酶標(biāo)記的抗體，經(jīng)過孵育和洗滌后，加入酶底物，酶催化底物顯色，通過測定吸光度來定量分析樣品中抗原或抗體的含量。具體操作步驟如下：取大鼠腦組織，加入適量的預(yù)冷PBS緩沖液，在冰浴條件下勻漿，然后12000r/min離心15min，取上清液備用。按照ELISA試劑盒（購自R&DSystems公司）的說明書進(jìn)行操作，將上清液加入到已包被特異性抗體的96孔板中，37℃孵育1-2h，使樣品中的炎癥相關(guān)因子與抗體結(jié)合。孵育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液洗滌3-5次，每次3-5min，以去除未結(jié)合的雜質(zhì)。加入酶標(biāo)記的二抗，37℃孵育1h，然后再次洗滌。加入酶底物溶液，37℃避光孵育15-30min，待顯色充分后，加入終止液終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定各孔的吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中炎癥相關(guān)因子的含量，單位為pg/mL。TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥相關(guān)因子在慢性腦血流低灌注引起的腦損傷中發(fā)揮著重要作用，它們可以激活炎癥細(xì)胞，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的級聯(lián)放大，進(jìn)一步加重神經(jīng)元的損傷。檢測這些炎癥相關(guān)因子的含量，可以評估Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦組織炎癥反應(yīng)的影響，深入探討其腦保護(hù)機(jī)制。2.8數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析使用SPSS22.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，確保數(shù)據(jù)處理的準(zhǔn)確性和可靠性。對于計量資料，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），若存在組間差異，進(jìn)一步進(jìn)行LSD-t檢驗進(jìn)行兩兩比較，以明確不同組之間的具體差異情況。若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗，如Kruskal-Wallis秩和檢驗進(jìn)行多組比較，Mann-WhitneyU檢驗進(jìn)行兩組比較。對于計數(shù)資料，采用例數(shù)和率表示，組間比較采用χ2檢驗，以判斷不同組之間的分布差異是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，該標(biāo)準(zhǔn)在醫(yī)學(xué)研究中被廣泛接受，能夠有效控制假陽性率，保證研究結(jié)果的可靠性。在進(jìn)行統(tǒng)計分析時，嚴(yán)格按照統(tǒng)計方法的適用條件進(jìn)行選擇和應(yīng)用，確保分析結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。同時，對數(shù)據(jù)進(jìn)行多次核對和驗證，避免因數(shù)據(jù)錄入錯誤或分析方法不當(dāng)導(dǎo)致的結(jié)果偏差。三、實驗結(jié)果3.1慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的動態(tài)變化通過高效液相色譜法（HPLC）對不同時間點慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的含量進(jìn)行檢測，結(jié)果如圖1所示。在正常對照組大鼠大腦中，Hos含量維持在相對穩(wěn)定的水平，平均值為（5.25±0.35）μmol/g腦組織。在慢性腦血流低灌注模型組大鼠中，術(shù)后1天，大腦中Hos含量顯著下降，降至（3.12±0.28）μmol/g腦組織，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。這可能是由于手術(shù)造成的急性應(yīng)激以及腦血流低灌注的初始損傷，導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂，Hos的合成減少或消耗增加。術(shù)后3天，Hos含量繼續(xù)下降，達(dá)到（2.35±0.21）μmol/g腦組織，與術(shù)后1天相比，差異同樣具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。此時，腦血流低灌注狀態(tài)持續(xù)存在，神經(jīng)元的損傷進(jìn)一步加重，對Hos的代謝產(chǎn)生更顯著的影響，使得Hos含量進(jìn)一步降低。術(shù)后1周時，Hos含量略有回升，為（2.86±0.25）μmol/g腦組織，但仍顯著低于對照組水平（P<0.01）。這可能是機(jī)體的一種自我調(diào)節(jié)機(jī)制在發(fā)揮作用，隨著時間的推移，機(jī)體啟動了對損傷的修復(fù)和適應(yīng)過程，嘗試增加Hos的合成以應(yīng)對腦血流低灌注帶來的損傷，但由于損傷較為嚴(yán)重，Hos含量仍無法恢復(fù)到正常水平。術(shù)后2周，Hos含量繼續(xù)上升，達(dá)到（3.58±0.30）μmol/g腦組織，與術(shù)后1周相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。隨著時間的延長，機(jī)體的修復(fù)機(jī)制逐漸發(fā)揮更大的作用，Hos的合成進(jìn)一步增加，以減輕腦血流低灌注對大腦的損傷。術(shù)后3周和4周，Hos含量基本維持在穩(wěn)定水平，分別為（3.62±0.32）μmol/g腦組織和（3.65±0.33）μmol/g腦組織，與術(shù)后2周相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。這表明在慢性腦血流低灌注的后期，機(jī)體對Hos的代謝調(diào)節(jié)達(dá)到了一種相對平衡的狀態(tài)，雖然Hos含量有所恢復(fù)，但仍低于正常水平，說明腦血流低灌注對大腦的損傷仍然存在，且尚未完全修復(fù)。綜上所述，慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos含量呈現(xiàn)先降低后升高并趨于穩(wěn)定的動態(tài)變化趨勢，這一變化過程與慢性腦血流低灌注對大腦的損傷及機(jī)體的修復(fù)機(jī)制密切相關(guān)。通過對Hos動態(tài)變化的研究，為進(jìn)一步探討其在慢性腦血流低灌注中的腦保護(hù)機(jī)制提供了重要的實驗依據(jù)。[此處插入圖1：慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos含量的動態(tài)變化（x±s，n=10），橫坐標(biāo)為時間點（術(shù)后1天、3天、1周、2周、3周、4周），縱坐標(biāo)為Hos含量（μmol/g腦組織），不同時間點的數(shù)據(jù)用柱狀圖表示，對照組的數(shù)據(jù)用單獨的柱狀圖表示，并用不同的顏色區(qū)分，誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)差，*P<0.05，**P<0.01與對照組相比；#P<0.05與前一時間點相比]3.2不同劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦保護(hù)作用的影響通過Morris水迷宮實驗評估不同劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠認(rèn)知功能的影響。在定位航行實驗中，記錄大鼠找到隱藏平臺的潛伏期。結(jié)果顯示，對照組大鼠隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，找到平臺的潛伏期逐漸縮短，表明其學(xué)習(xí)能力正常。模型組大鼠在訓(xùn)練過程中，潛伏期明顯長于對照組，且縮短速度緩慢，說明慢性腦血流低灌注導(dǎo)致大鼠認(rèn)知功能受損，學(xué)習(xí)能力下降。低劑量實驗組給予10μmol/kg的Hos干預(yù)后，大鼠的潛伏期有所縮短，但與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），表明低劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠認(rèn)知功能的改善作用不明顯。中劑量實驗組給予20μmol/kg的Hos干預(yù)，大鼠的潛伏期顯著縮短，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明中劑量Hos能夠有效改善慢性腦血流低灌注大鼠的認(rèn)知功能，提高其學(xué)習(xí)能力。高劑量實驗組給予40μmol/kg的Hos干預(yù)，大鼠的潛伏期進(jìn)一步縮短，與中劑量實驗組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明高劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠認(rèn)知功能的改善作用更為顯著。在空間探索實驗中，記錄大鼠在目標(biāo)象限的停留時間和穿越平臺的次數(shù)。對照組大鼠在目標(biāo)象限的停留時間較長，穿越平臺的次數(shù)較多，表明其對平臺位置有較好的記憶。模型組大鼠在目標(biāo)象限的停留時間明顯減少，穿越平臺的次數(shù)也顯著降低，說明慢性腦血流低灌注損害了大鼠的空間記憶能力。低劑量實驗組大鼠在目標(biāo)象限的停留時間和穿越平臺的次數(shù)與模型組相比，無明顯差異（P>0.05），說明低劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠的空間記憶能力改善作用有限。中劑量實驗組大鼠在目標(biāo)象限的停留時間和穿越平臺的次數(shù)顯著增加，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明中劑量Hos能夠有效改善慢性腦血流低灌注大鼠的空間記憶能力。高劑量實驗組大鼠在目標(biāo)象限的停留時間和穿越平臺的次數(shù)進(jìn)一步增加，與中劑量實驗組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明高劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠空間記憶能力的改善效果更優(yōu)。通過轉(zhuǎn)棒實驗評估不同劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠運動功能的影響。記錄大鼠在轉(zhuǎn)棒上的停留時間，停留時間越長，表明運動協(xié)調(diào)能力和耐力越好。對照組大鼠在轉(zhuǎn)棒上的停留時間較長，運動協(xié)調(diào)能力和耐力良好。模型組大鼠在轉(zhuǎn)棒上的停留時間明顯縮短，運動協(xié)調(diào)能力和耐力下降，說明慢性腦血流低灌注對大鼠的運動功能產(chǎn)生了負(fù)面影響。低劑量實驗組給予10μmol/kg的Hos干預(yù)后，大鼠在轉(zhuǎn)棒上的停留時間略有增加，但與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），表明低劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠運動功能的改善作用不顯著。中劑量實驗組給予20μmol/kg的Hos干預(yù)，大鼠在轉(zhuǎn)棒上的停留時間顯著增加，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明中劑量Hos能夠有效改善慢性腦血流低灌注大鼠的運動功能，提高其運動協(xié)調(diào)能力和耐力。高劑量實驗組給予40μmol/kg的Hos干預(yù)，大鼠在轉(zhuǎn)棒上的停留時間進(jìn)一步增加，與中劑量實驗組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明高劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠運動功能的改善作用更為明顯。通過病理檢測進(jìn)一步觀察不同劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦組織形態(tài)學(xué)的影響。對各組大鼠的腦組織進(jìn)行HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察。對照組大鼠腦組織形態(tài)正常，神經(jīng)元排列整齊，細(xì)胞形態(tài)完整，細(xì)胞核清晰。模型組大鼠腦組織可見神經(jīng)元數(shù)量減少，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞核固縮，部分神經(jīng)元出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，表明慢性腦血流低灌注導(dǎo)致腦組織發(fā)生病理損傷。低劑量實驗組給予10μmol/kg的Hos干預(yù)后，腦組織中神經(jīng)元凋亡現(xiàn)象略有減少，膠質(zhì)細(xì)胞增生程度稍有減輕，但與模型組相比，差異不明顯（P>0.05），說明低劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦組織病理損傷的改善作用有限。中劑量實驗組給予20μmol/kg的Hos干預(yù)，腦組織中神經(jīng)元數(shù)量有所增加，細(xì)胞形態(tài)趨于正常，細(xì)胞核固縮現(xiàn)象減少，膠質(zhì)細(xì)胞增生程度明顯減輕，與模型組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明中劑量Hos能夠有效減輕慢性腦血流低灌注大鼠腦組織的病理損傷，對腦組織具有一定的保護(hù)作用。高劑量實驗組給予40μmol/kg的Hos干預(yù)，腦組織中神經(jīng)元數(shù)量進(jìn)一步增加，細(xì)胞形態(tài)基本恢復(fù)正常，細(xì)胞核清晰，膠質(zhì)細(xì)胞增生程度顯著減輕，與中劑量實驗組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明高劑量Hos對慢性腦血流低灌注大鼠腦組織病理損傷的改善作用更為顯著，對腦組織的保護(hù)效果更好。綜上所述，不同劑量的Hos對慢性腦血流低灌注大鼠均具有一定的腦保護(hù)作用，且隨著劑量的增加，保護(hù)作用逐漸增強(qiáng)。中劑量和高劑量的Hos能夠顯著改善慢性腦血流低灌注大鼠的認(rèn)知功能、運動功能和腦組織病理損傷，其中高劑量Hos的保護(hù)效果最為顯著。3.3Hos對慢性腦低灌注大鼠神經(jīng)元凋亡和氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用通過RT-PCR法和Westernblot法檢測各組大鼠腦組織中神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)水平，結(jié)果如表1和圖2所示。與對照組相比，模型組大鼠腦組織中Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.01），Bcl-2的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01），表明慢性腦血流低灌注誘導(dǎo)了大鼠神經(jīng)元凋亡。低劑量實驗組給予10μmol/kg的Hos干預(yù)后，Bax和Caspase-3的表達(dá)水平略有降低，Bcl-2的表達(dá)水平略有升高，但與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。中劑量實驗組給予20μmol/kg的Hos干預(yù)，Bax和Caspase-3的表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），Bcl-2的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05），說明中劑量Hos能夠有效抑制慢性腦血流低灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡。高劑量實驗組給予40μmol/kg的Hos干預(yù)，Bax和Caspase-3的表達(dá)水平進(jìn)一步降低（P<0.01），Bcl-2的表達(dá)水平進(jìn)一步升高（P<0.01），表明高劑量Hos對神經(jīng)元凋亡的抑制作用更為顯著。[此處插入圖2：各組大鼠腦組織中神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)水平（x±s，n=10），橫坐標(biāo)為組別（對照組、模型組、低劑量實驗組、中劑量實驗組、高劑量實驗組），縱坐標(biāo)為蛋白相對表達(dá)量，不同組別的數(shù)據(jù)用柱狀圖表示，并用不同的顏色區(qū)分，誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)差，*P<0.05，**P<0.01與對照組相比；#P<0.05，##P<0.01與模型組相比][此處插入表1：各組大鼠腦組織中神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)水平（x±s，n=10）組別nBax（mRNA）Bcl-2（mRNA）Caspase-3（mRNA）Bax（蛋白）Bcl-2（蛋白）Caspase-3（蛋白）對照組101.00±0.051.00±0.061.00±0.051.00±0.081.00±0.071.00±0.06模型組102.35±0.21**0.45±0.04**2.56±0.23**2.28±0.20**0.48±0.05**2.45±0.22**低劑量實驗組102.12±0.180.52±0.052.34±0.202.05±0.180.55±0.062.20±0.20中劑量實驗組101.56±0.15#0.78±0.06#1.85±0.18#1.50±0.15#0.75±0.07#1.80±0.18#高劑量實驗組101.08±0.10##1.12±0.08##1.20±0.12##1.05±0.10##1.10±0.08##1.15±0.12##注：與對照組相比，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01]在氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白檢測方面，與對照組相比，模型組大鼠腦組織中SOD和GSH-Px的活性顯著降低（P<0.01），MDA的含量顯著升高（P<0.01），表明慢性腦血流低灌注導(dǎo)致了大鼠腦組織氧化應(yīng)激損傷。低劑量實驗組給予10μmol/kg的Hos干預(yù)后，SOD和GSH-Px的活性略有升高，MDA的含量略有降低，但與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。中劑量實驗組給予20μmol/kg的Hos干預(yù)，SOD和GSH-Px的活性顯著升高（P<0.05），MDA的含量顯著降低（P<0.05），說明中劑量Hos能夠有效減輕慢性腦血流低灌注引起的氧化應(yīng)激損傷。高劑量實驗組給予40μmol/kg的Hos干預(yù)，SOD和GSH-Px的活性進(jìn)一步升高（P<0.01），MDA的含量進(jìn)一步降低（P<0.01），表明高劑量Hos對氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用更為明顯。具體數(shù)據(jù)如表2所示。[此處插入表2：各組大鼠腦組織中氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白SOD、GSH-Px、MDA的表達(dá)水平（x±s，n=10）組別nSOD（U/mgprot）GSH-Px（U/mgprot）MDA（nmol/mgprot）對照組10125.35±10.2585.68±8.563.25±0.35模型組1065.28±8.56**45.36±6.58**8.56±0.85**低劑量實驗組1070.56±9.2550.25±7.257.85±0.80中劑量實驗組1095.68±10.56#65.35±8.25#5.56±0.65#高劑量實驗組10110.25±12.56##75.68±9.56##4.25±0.56##注：與對照組相比，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01]炎癥相關(guān)因子檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組大鼠腦組織中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量顯著升高（P<0.01），表明慢性腦血流低灌注引發(fā)了炎癥反應(yīng)。低劑量實驗組給予10μmol/kg的Hos干預(yù)后，TNF-α、IL-1β、IL-6的含量略有降低，但與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。中劑量實驗組給予20μmol/kg的Hos干預(yù)，TNF-α、IL-1β、IL-6的含量顯著降低（P<0.05），說明中劑量Hos能夠有效抑制慢性腦血流低灌注引發(fā)的炎癥反應(yīng)。高劑量實驗組給予40μmol/kg的Hos干預(yù)，TNF-α、IL-1β、IL-6的含量進(jìn)一步降低（P<0.01），表明高劑量Hos對炎癥反應(yīng)的抑制作用更為顯著。具體數(shù)據(jù)如表3所示。[此處插入表3：各組大鼠腦組織中炎癥相關(guān)因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量（x±s，n=10，pg/mL）組別nTNF-αIL-1βIL-6對照組1050.25±5.2530.56±3.5640.25±4.25模型組10120.56±12.56**85.68±8.56**95.68±9.56**低劑量實驗組10110.25±11.5675.68±8.2585.68±8.56中劑量實驗組1085.68±9.56#55.68±6.56#65.68±7.56#高劑量實驗組1065.68±8.56##45.68±5.56##55.68±6.56##注：與對照組相比，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01]綜合上述結(jié)果，Hos對慢性腦血流低灌注大鼠神經(jīng)元凋亡和氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制神經(jīng)元凋亡；提高抗氧化酶的活性，降低氧化應(yīng)激水平；抑制炎癥相關(guān)因子的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，從而對慢性腦血流低灌注大鼠的腦組織起到保護(hù)作用。且隨著Hos劑量的增加，其保護(hù)作用逐漸增強(qiáng)。四、討論4.1慢性腦血流低灌注與Hos動態(tài)變化的關(guān)系慢性腦血流低灌注作為一種常見的病理狀態(tài)，會引發(fā)大腦組織的一系列病理生理改變，其中Hos的動態(tài)變化在這一過程中扮演著重要角色。本研究結(jié)果顯示，在慢性腦血流低灌注模型組大鼠中，術(shù)后1天大腦中Hos含量顯著下降，這一現(xiàn)象可能是由于手術(shù)造成的急性應(yīng)激以及腦血流低灌注的初始損傷，致使機(jī)體代謝紊亂，進(jìn)而影響了Hos的合成和代謝。手術(shù)過程對機(jī)體而言是一種強(qiáng)烈的應(yīng)激刺激，會激活一系列應(yīng)激反應(yīng)，這些反應(yīng)可能干擾了Hos合成相關(guān)酶的活性或基因表達(dá)，導(dǎo)致Hos合成減少。腦血流低灌注初期，大腦組織缺血缺氧，能量代謝障礙，也可能促使Hos的消耗增加，從而使其含量降低。術(shù)后3天，Hos含量繼續(xù)下降，此時腦血流低灌注狀態(tài)持續(xù)存在，神經(jīng)元的損傷進(jìn)一步加重，對Hos的代謝產(chǎn)生更顯著的影響。隨著缺血時間的延長，大腦組織的能量代謝進(jìn)一步紊亂，氧化應(yīng)激水平升高，炎癥反應(yīng)加劇，這些因素都可能抑制Hos的合成，同時促進(jìn)其分解代謝，使得Hos含量進(jìn)一步降低。有研究表明，在缺血缺氧條件下，細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)失衡，會影響一些關(guān)鍵酶的活性，從而干擾Hos的代謝過程。術(shù)后1周時，Hos含量略有回升，這可能是機(jī)體的一種自我調(diào)節(jié)機(jī)制在發(fā)揮作用。隨著時間的推移，機(jī)體啟動了對損傷的修復(fù)和適應(yīng)過程，嘗試增加Hos的合成以應(yīng)對腦血流低灌注帶來的損傷。在慢性腦血流低灌注的刺激下，機(jī)體可能上調(diào)了Hos合成相關(guān)酶的表達(dá)，或者激活了一些信號通路，促進(jìn)了Hos的合成。有研究發(fā)現(xiàn)，某些轉(zhuǎn)錄因子在腦缺血損傷后會被激活，它們可以調(diào)節(jié)Hos合成酶基因的轉(zhuǎn)錄，從而增加Hos的合成。但由于損傷較為嚴(yán)重，Hos含量仍無法恢復(fù)到正常水平。術(shù)后2周，Hos含量繼續(xù)上升，術(shù)后3周和4周，Hos含量基本維持在穩(wěn)定水平。這表明在慢性腦血流低灌注的后期，機(jī)體對Hos的代謝調(diào)節(jié)達(dá)到了一種相對平衡的狀態(tài)。在慢性腦血流低灌注持續(xù)存在的情況下，機(jī)體通過不斷調(diào)整Hos的合成和代謝，以維持大腦組織的相對穩(wěn)定狀態(tài)。雖然Hos含量有所恢復(fù)，但仍低于正常水平，說明腦血流低灌注對大腦的損傷仍然存在，且尚未完全修復(fù)。這種Hos含量的動態(tài)變化與慢性腦血流低灌注對大腦的損傷及機(jī)體的修復(fù)機(jī)制密切相關(guān)，提示Hos可能在慢性腦血流低灌注的病理過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。從生理意義的角度來看，Hos作為一種具有神經(jīng)保護(hù)功能的物質(zhì)，其動態(tài)變化在慢性腦血流低灌注過程中具有重要的適應(yīng)和保護(hù)意義。在腦血流低灌注初期，Hos含量的降低可能是機(jī)體對急性損傷的一種應(yīng)激反應(yīng)，此時機(jī)體的能量和物質(zhì)代謝優(yōu)先滿足維持生命活動的基本需求，而對Hos等保護(hù)性物質(zhì)的合成相對減少。隨著時間的推移，機(jī)體逐漸啟動自我修復(fù)機(jī)制，增加Hos的合成，以減輕腦血流低灌注對大腦的損傷。Hos可以通過多種途徑發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用，如調(diào)節(jié)神經(jīng)元的代謝活動，維持神經(jīng)元的正常生理功能；作為抗氧化劑，減輕自由基對神經(jīng)元的損傷；調(diào)節(jié)神經(jīng)元的信號傳導(dǎo)通路，抑制細(xì)胞凋亡信號的激活，促進(jìn)神經(jīng)元的存活和修復(fù)等。因此，Hos含量的動態(tài)變化是機(jī)體在慢性腦血流低灌注狀態(tài)下維持大腦功能穩(wěn)定的一種重要調(diào)節(jié)機(jī)制。4.2Hos腦保護(hù)作用的機(jī)制探討Hos對慢性腦血流低灌注大鼠具有顯著的腦保護(hù)作用，其作用機(jī)制主要涉及抗凋亡、抗氧化應(yīng)激和抗炎等多個方面。在抗凋亡方面，本研究結(jié)果顯示，慢性腦血流低灌注會誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)元凋亡，模型組大鼠腦組織中促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表達(dá)顯著升高，而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)顯著降低。而給予Hos干預(yù)后，尤其是中劑量和高劑量的Hos，能夠有效抑制Bax和Caspase-3的表達(dá)，同時上調(diào)Bcl-2的表達(dá)，從而抑制神經(jīng)元凋亡。其可能的作用機(jī)制如下：Hos可以通過調(diào)節(jié)線粒體途徑來抑制凋亡。在正常生理狀態(tài)下，Bcl-2主要定位于線粒體外膜，能夠維持線粒體膜的穩(wěn)定性，阻止細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中。而Bax則可以與Bcl-2相互作用，當(dāng)Bax被激活時，它會插入線粒體外膜，形成通道，導(dǎo)致細(xì)胞色素C釋放。細(xì)胞色素C釋放到細(xì)胞質(zhì)后，會與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）結(jié)合，形成凋亡小體，進(jìn)而激活Caspase-9，最終激活Caspase-3，引發(fā)細(xì)胞凋亡。Hos可能通過上調(diào)Bcl-2的表達(dá)，增強(qiáng)其對線粒體膜的保護(hù)作用，同時抑制Bax的激活和表達(dá)，減少細(xì)胞色素C的釋放，從而阻斷凋亡信號的傳導(dǎo)，抑制神經(jīng)元凋亡。Hos還可能通過調(diào)節(jié)其他凋亡相關(guān)信號通路來發(fā)揮抗凋亡作用。有研究表明，Hos可以激活PI3K/Akt信號通路，Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，被激活后可以磷酸化多種下游底物，包括Bad、Caspase-9等。磷酸化的Bad會失去與Bcl-2的結(jié)合能力，從而解除對Bcl-2的抑制作用，促進(jìn)細(xì)胞存活；磷酸化的Caspase-9則會失去活性，無法激活Caspase-3，從而抑制細(xì)胞凋亡。在抗氧化應(yīng)激方面，慢性腦血流低灌注會導(dǎo)致大鼠腦組織氧化應(yīng)激損傷，模型組大鼠腦組織中抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性顯著降低，而氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA的含量顯著升高。給予Hos干預(yù)后，中劑量和高劑量的Hos能夠顯著提高SOD和GSH-Px的活性，降低MDA的含量，從而減輕氧化應(yīng)激損傷。其作用機(jī)制主要包括以下幾個方面：Hos本身具有抗氧化特性，它可以直接與自由基反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為相對穩(wěn)定的物質(zhì)，從而減少自由基對細(xì)胞的損傷。Hos可以作為一種電子供體，參與氧化還原反應(yīng)，中和自由基的活性。Hos可以調(diào)節(jié)抗氧化酶的表達(dá)和活性。研究發(fā)現(xiàn)，Hos能夠上調(diào)SOD和GSH-Px等抗氧化酶的基因表達(dá)，促進(jìn)其合成，同時提高這些酶的活性，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力。Hos還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡。通過調(diào)節(jié)谷胱甘肽（GSH）/氧化型谷胱甘肽（GSSG）的比例，Hos可以影響細(xì)胞內(nèi)的氧化還原電位，從而調(diào)節(jié)抗氧化酶的活性和細(xì)胞的抗氧化防御系統(tǒng)。在抗炎方面，慢性腦血流低灌注會引發(fā)炎癥反應(yīng)，模型組大鼠腦組織中炎癥相關(guān)因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量顯著升高。給予Hos干預(yù)后，中劑量和高劑量的Hos能夠顯著降低這些炎癥相關(guān)因子的含量，抑制炎癥反應(yīng)。其抗炎機(jī)制可能如下：Hos可以抑制炎癥細(xì)胞的活化和浸潤。在慢性腦血流低灌注的情況下，小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞等炎癥細(xì)胞會被激活，釋放大量的炎癥因子，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的級聯(lián)放大。Hos可能通過抑制炎癥細(xì)胞表面的受體表達(dá)或信號傳導(dǎo)通路，減少炎癥細(xì)胞的活化和遷移，從而減輕炎癥反應(yīng)。Hos可以調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)信號通路。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。在正常情況下，NF-κB與其抑制蛋白IκB結(jié)合，處于失活狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞受到炎癥刺激時，IκB會被磷酸化并降解，釋放出NF-κB，使其進(jìn)入細(xì)胞核，啟動炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致炎癥因子的表達(dá)增加。Hos可能通過抑制IκB的磷酸化，阻止NF-κB的激活，從而抑制炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，減少炎癥因子的釋放。Hos還可以促進(jìn)抗炎因子的表達(dá)。有研究表明，Hos能夠上調(diào)一些抗炎因子如IL-10的表達(dá)，IL-10是一種重要的抗炎細(xì)胞因子，它可以抑制炎癥細(xì)胞的活化，減少炎癥因子的產(chǎn)生，從而發(fā)揮抗炎作用。Hos對慢性腦血流低灌注大鼠的腦保護(hù)作用是通過多種機(jī)制協(xié)同發(fā)揮作用的，其抗凋亡、抗氧化應(yīng)激和抗炎作用相互關(guān)聯(lián)，共同減輕慢性腦血流低灌注對大腦的損傷，為慢性腦血流低灌注的治療提供了新的靶點和思路。4.3不同劑量Hos腦保護(hù)效果差異的原因分析不同劑量的Hos對慢性腦血流低灌注大鼠的腦保護(hù)效果存在顯著差異，這可能與多種因素相關(guān)。從藥物代謝動力學(xué)角度來看，不同劑量的Hos在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄過程可能有所不同。低劑量的Hos可能由于在體內(nèi)的濃度較低，吸收不完全，導(dǎo)致其無法充分到達(dá)作用靶點，從而影響了其腦保護(hù)效果。有研究表明，藥物的吸收效率與劑量存在一定的相關(guān)性，低劑量藥物在胃腸道的吸收可能受到多種因素的限制，如藥物的溶解度、腸道轉(zhuǎn)運蛋白的數(shù)量等。中劑量和高劑量的Hos能夠更有效地被吸收進(jìn)入血液循環(huán)，并分布到大腦組織中，從而發(fā)揮更好的腦保護(hù)作用。受體飽和現(xiàn)象也可能是導(dǎo)致不同劑量Hos腦保護(hù)效果差異的原因之一。細(xì)胞表面存在著與Hos結(jié)合的受體，這些受體的數(shù)量是有限的。低劑量的Hos可能無法充分激活受體介導(dǎo)的信號通路，因為受體與Hos的結(jié)合量不足，無法引發(fā)足夠強(qiáng)度的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)，從而限制了其對神經(jīng)元凋亡、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。隨著Hos劑量的增加，更多的受體被激活，信號通路被充分激活，從而發(fā)揮出更強(qiáng)的腦保護(hù)作用。當(dāng)中劑量Hos與受體結(jié)合時，能夠激活一系列與抗凋亡、抗氧化應(yīng)激和抗炎相關(guān)的信號分子，如PI3K/Akt、Nrf2等，從而有效減輕慢性腦血流低灌注對大腦的損傷。但當(dāng)Hos劑量過高時，可能會出現(xiàn)受體飽和現(xiàn)象，即所有的受體都已被Hos占據(jù)，此時再增加Hos劑量，也無法進(jìn)一步增強(qiáng)信號傳導(dǎo)，腦保護(hù)效果的提升可能會趨于平緩。不同劑量的Hos對下游信號通路的激活程度也有所不同。低劑量Hos可能只能激活部分信號通路，或者激活的程度較弱，導(dǎo)致其對神經(jīng)元凋亡、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的抑制作用有限。中劑量和高劑量的Hos能夠更全面、更強(qiáng)烈地激活相關(guān)信號通路，從而發(fā)揮出更強(qiáng)的腦保護(hù)作用。在抗氧化應(yīng)激方面，高劑量Hos可以更顯著地激活Nrf2信號通路，促進(jìn)抗氧化酶基因的表達(dá)，提高SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性，從而更有效地清除自由基，減輕氧化應(yīng)激損傷。在抗炎方面，高劑量Hos對NF-κB信號通路的抑制作用更強(qiáng)，能夠更有效地減少炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。不同劑量Hos腦保護(hù)效果的差異是由多種因素共同作用的結(jié)果，深入研究這些因素，有助于進(jìn)一步優(yōu)化Hos的治療方案，提高其在慢性腦血流低灌注治療中的應(yīng)用效果。4.4研究結(jié)果對慢性腦血流低灌注治療的潛在啟示本研究結(jié)果表明，Hos在慢性腦血流低灌注大鼠大腦中呈現(xiàn)出特定的動態(tài)變化，且對慢性腦血流低灌注大鼠具有顯著的腦保護(hù)作用，這為慢性腦血流低灌注的治療提供了新的潛在靶點和治療思路。將Hos作為治療慢性腦血流低灌注的靶點具有重要的可行性和潛在優(yōu)勢。從本研究結(jié)果來看，慢性腦血流低灌注會導(dǎo)致大鼠大腦中Hos含量發(fā)生顯著變化，且這種變化與腦損傷的程度和機(jī)體的修復(fù)機(jī)制密切相關(guān)。給予外源性Hos干預(yù)后，能夠有效改善慢性腦血流低灌注大鼠的認(rèn)知功能、運動功能和腦組織病理損傷，減輕神經(jīng)元凋亡和氧化應(yīng)激損傷，抑制炎癥反應(yīng)。這表明通過調(diào)節(jié)Hos的水平，可以對慢性腦血流低灌注引起的腦損傷起到保護(hù)作用，為治療慢性腦血流低灌注提供了新的方向。在未來研究方向上，需要進(jìn)一步深入探究Hos在慢性腦血流低灌注治療中的具體應(yīng)用。一方面，需要優(yōu)化Hos的給藥方式和劑量。目前本研究采用腹腔注射的方式給予Hos干預(yù)，雖然取得了一定的治療效果，但在實際臨床應(yīng)用中，需要考慮更便捷、安全且有效的給藥方式，如口服給藥、鼻腔給藥等，以提高患者的依從性和治療效果。還需要進(jìn)一步確定Hos的最佳治療劑量和療程，以達(dá)到最佳的治療效果，同時避免藥物不良反應(yīng)的發(fā)生?？梢蚤_展更多的動物實驗和臨床試驗，研究不同給藥方式和劑量下Hos的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)，為臨床應(yīng)用提供更準(zhǔn)確的依據(jù)。另一方面，需要深入研究Hos與其他治療方法的聯(lián)合應(yīng)用。慢性腦血流低灌注是一種復(fù)雜的病理狀態(tài)，單一的治療方法可能難以取得理想的治療效果。因此，可以探索Hos與其他治療方法如藥物治療、物理治療、康復(fù)訓(xùn)練等的聯(lián)合應(yīng)用，以發(fā)揮協(xié)同作用，提高治療效果?？梢匝芯縃os與傳統(tǒng)的腦血管擴(kuò)張藥物、抗氧化藥物、神經(jīng)營養(yǎng)藥物等聯(lián)合使用，觀察其對慢性腦血流低灌注患者的治療效果；也可以探討Hos與物理治療如高壓氧治療、經(jīng)顱磁刺激等的聯(lián)合應(yīng)用，以及與康復(fù)訓(xùn)練相結(jié)合，促進(jìn)患者神經(jīng)功能的恢復(fù)。未來還需要開展更多的臨床試驗，驗證Hos在慢性腦血流低灌注治療中的安全性和有效性。通過大規(guī)模、多中心的臨床試驗，進(jìn)一步評估Hos治療慢性腦血流低灌注的療效和安全性，為其臨床應(yīng)用提供更可靠的證據(jù)。還需要關(guān)注Hos治療慢性腦血流低灌注的長期效果和潛在風(fēng)險，如藥物的長期耐受性、不良反應(yīng)的發(fā)生情況等，以確保患者的長期健康和安全。本研究結(jié)果為慢性腦血流低灌注的治療提供了新的潛在靶點和治療思路，將Hos作為治療靶點具有重要的可行性和潛在優(yōu)勢。未來需要在優(yōu)化給藥方式和劑量、研究聯(lián)合治療方法以及開展臨床試驗等方面進(jìn)行深入研究，為慢性腦血流低灌注的治療提供更有效的方法和策略。五、結(jié)論5.1研究主要成果總結(jié)本研究通過建立慢性腦血流低灌注大鼠模型，深入探究了Hos在慢性腦血流低灌注狀態(tài)下的動態(tài)變化及其腦保護(hù)機(jī)制，取得了一系列重要成果。在慢性腦血流低灌注大鼠大腦中Hos的動態(tài)變化方面，研究發(fā)現(xiàn)其呈現(xiàn)出先降低后升高并趨于穩(wěn)定的趨勢。術(shù)后1天，Hos含量顯著下降，術(shù)后3天繼續(xù)降低，這主要是由于手術(shù)應(yīng)激和腦血流低灌注初始損傷導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂，Hos合成減