川陳皮素對(duì)囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)整因子的激活作

用

川陳皮素對(duì)囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)整因子的激活作用#楊爽，

于波，張耀方，王雪，楊紅**5101520

2530(遼寧師范高校生命科學(xué)學(xué)院，遼寧省生物技術(shù)與藥物

研發(fā)重點(diǎn)試驗(yàn)室，大連116033)摘要：

目的:

探討川陳皮素(nobiletin)對(duì)囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)因子

(cysticfibrosistransmembraneconductanceregulator,CFTR)

氯離子通道的激活作用。

方法：

利用熒光淬滅試驗(yàn)和膜片鉗技術(shù)在穩(wěn)定表達(dá)人CFTR和熒光

綠蛋白突變體EYFP/H148Q的Fischer大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞

(Fischerratthyroid,FRT)上，測(cè)定川陳皮素對(duì)CFTRCl一通

道活性的影響。

結(jié)果：

發(fā)覺川陳皮素以劑量依靠的方式激活CFTR氯離子通道的C1

一轉(zhuǎn)運(yùn)活性，且這種活性是快速、可逆的，并能夠被CFTR特異

性抑制劑CFTRinh-172完全抑制。

初步的分子機(jī)制探討表明川陳皮素是以與CFTR干脆作用來

激活通道活性的。

進(jìn)一步的探討結(jié)果顯示，川陳皮素能夠有效地刺激小鼠氣管

粘膜下腺液體分泌速度。

因此，川陳皮素可能發(fā)展成為治療包括支氣管擴(kuò)張?jiān)趦?nèi)的

CFTR相關(guān)疾病的先導(dǎo)藥物。

關(guān)鍵詞：

細(xì)胞生物學(xué)；囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)因子；川陳皮素；激活劑

中圖分類號(hào)：

R96Theactivationeffectofnobiletinoncystic

fibrosistransmonbranceconductanceregulatorchloride

channelYangShuang,YUBo,ZhangYaofang,WangXue,YangHong

(LiaoningProvincialKeyLabroatoryofBiotechnologyandDrug

Discovery,LiaoningNormalUniversity,Dalian,116033)Abstract:

Aim:Aimofthepresentstudyistoinvestigateactivation

effectofnobiletinoncysticfibrosistransmembrane

conductanceregulator(CFTR)chloridechannelactivity.

Method:CFTR-mediatediodideinfluxassayandpatch-clamp

testsweredoneonFRTcel1sstablyco-transfectedwithhuman

CFTRandEYFP/H148Q.Result:NobiletinpotentlyactivatedCFTR

chaloridechannelactivityinadose-andtime-dependentmanner.

TheCFTRblockerCFTRinh-172couldcompletelyreversethe

effect.Primarymechanismstudyindicatedthatnobiletin

activatedCFTRchloridechannelthroughadirectbindingway.

Tnaddition,exvivotestsdoneonmicetracheashowedthat

nobiletintime-dependentlystimulatedsubmucosalglandfluid

secretion.Nobiletinmaypresentatherapeuticleadcompound

intreatingCFTR-relateddiseasesincludingdisseminated

bronchiectasis.Keywords:cellbiology;CFTR;nobiletin;

activator350引言囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)整因子(cystic

fibrosistransmembraneconductanceregulator,CFTR)是——種

cAMP依靠的氯離子通道蛋白，也是迄今為止發(fā)覺的唯一作為通道的

ATP結(jié)合蛋白家族(ATP-bindingcassette,ABC)成員[1]o

CFTR由5個(gè)功能結(jié)構(gòu)域組成：

2個(gè)由406個(gè)連續(xù)串聯(lián)的跨膜區(qū)組成的跨膜結(jié)構(gòu)域

(membrane-spanningdomains,MSDs),2個(gè)核昔酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域

(nucleotide-bindingdomains,NBDs),以及一個(gè)連接在其之

間的具有多個(gè)磷酸基金項(xiàng)目：

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.30973577)；遼寧省重點(diǎn)試驗(yàn)室項(xiàng)

目(LS2010094)；高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助課題

(20112136110002)作者簡(jiǎn)介：

楊爽(1987-01),女，碩士探討生，膜通道的結(jié)構(gòu)和功能

通信聯(lián)系人：

楊紅(196772),女,博士生導(dǎo)師，膜通道的結(jié)構(gòu)和功能.

E-mail:hyanglnnu@gmail-1-化位點(diǎn)的調(diào)整結(jié)構(gòu)

域(R-domain)。

CFTR表達(dá)于氣管、消化道、生殖道等哺乳動(dòng)物全部與分泌

汲取相關(guān)組織的上皮細(xì)胞的頂膜上［2-5］,主要功能是為氯離子跨上

皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)供應(yīng)選擇性通道，對(duì)體內(nèi)液體轉(zhuǎn)運(yùn)起至關(guān)重要的作用。

CFTR突變會(huì)引起CFTR合成、轉(zhuǎn)運(yùn)以及功能45

505560障礙，到目前為止能引起CFTR突

變的形式可達(dá)1300多種，其中第508位phe缺失突變(F508)

是最主要的突變形式之一［6］o

CFTR突變會(huì)引發(fā)囊性纖維化、支氣管擴(kuò)張、慢性胰腺炎、

腸梗阻、習(xí)慣性便秘等多種疾?。?-8］。

川陳皮素又稱川皮亭、蜜橘黃素，是從橘果皮中提取的一種

常見的多甲氧基黃銅類化合物。

它具有抗血細(xì)胞凝集、抗血栓形成、抗氧化、抗炎、降低

膽固醇等藥理作用，對(duì)肺癌、胃癌、纖維癌等多種腫瘤具有極強(qiáng)

的抗癌活性［9T0］。

本課題組在前期工作中，利用細(xì)胞熒光淬滅模型從自然化合

物中篩選到大量能夠有效激活CFTR氯離子通道活性的化合物，其

中包括川陳皮素。

本探討利用細(xì)胞熒光測(cè)定模型和膜片鉗技術(shù)對(duì)川陳皮素激活

CFTR氯離子通道的分子藥理學(xué)機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)分析，并在離體條

件下探討了該化合物對(duì)小鼠氣管粘膜下腺體液體分泌速度的影響。

1材料與方法1.1材料F12Coons細(xì)胞培育基、

Forskolin(FSK)、Genistein^IBMX均購(gòu)于Sigma公司，標(biāo)準(zhǔn)胎

牛血清購(gòu)于Hyclone(IlyCloneCompany,USA),川陳皮素、

CFTRinh-172本試驗(yàn)室自行合成［11］,其他試劑均為分析純，野

生型昆明小鼠為吉大二院中心試驗(yàn)室供應(yīng)。

1.2方法CFTR氯離子通道細(xì)胞熒光測(cè)定模型的建立及測(cè)

定方法1.2.1首先將表達(dá)人CFTR的質(zhì)粒和熒光綠蛋白突變體

YFP-H148Q表達(dá)質(zhì)粒穩(wěn)定共轉(zhuǎn)染到Fischer大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞

上，然后選擇能夠穩(wěn)定表達(dá)這兩種蛋白的細(xì)胞系作為細(xì)胞熒光測(cè)定

模型在含有F12Coons的細(xì)胞培育基中培育［12-13］。

65將FRT上皮細(xì)胞細(xì)胞懸液置于黑壁透亮的96孔板中，

每孔細(xì)胞數(shù)量為20,000,然后將細(xì)胞放入二氧化碳孵箱中培育

24-36小時(shí)（37℃、90%濕度、5%CO2）,直到細(xì)胞長(zhǎng)成單層后，

再用FluoStar熒光儀測(cè)定其氯離子通道功能［14］。

膜片鉗技術(shù)對(duì)野生型CFTR氯離子通道的激活影響的測(cè)定方

法1.2.2膜片鉗技術(shù)測(cè)定野生型CFTR氯離子通道活性的方法詳

見參考文獻(xiàn)［15］。

測(cè)定條件為：

70首先將wt-CFTR細(xì)胞在24孔板中培育2-4天，然后

利用膜片鉗EPC10放大器（HEKA,Lamberecht/Pfalz,Germany）設(shè)

置電流頻率，玻璃吸頭的電阻為3-5兆歐姆，再利用八極Bessel

過濾器將電流過濾成100Hz,之后以500Hz的頻率在磁盤上將細(xì)

胞膜捕獲，測(cè)定膜電位在-50和+50mV之間變更時(shí)膜電流變更。

-2-1.2.3小鼠氣管粘膜下腺液體分泌速度

的測(cè)定方法7580將昆明小鼠（8-10周，重25-35g）引

頸處死，快速取出氣管粘膜區(qū)域。

用Krebs-Henseieit(KH)將氣管粘膜區(qū)域沖洗干凈、去除

血塊后，粘膜側(cè)朝上展平固定于KH液飽和的海綿上，然后放入

二氧化碳孵箱中孵育10T5min。

用棉球?qū)⒄衬ど系恼骋狠p拭干凈后加入50L激活劑，再在氣

管表面上覆蓋30L水飽和礦物油，置于解剖鏡下連續(xù)視察5min并

用照相機(jī)拍攝記錄單個(gè)粘膜下腺液體的分泌狀況口6］。

選擇呈圓形的液滴圖像，用ImageJ測(cè)量半徑，假設(shè)液滴為

規(guī)則的球體，計(jì)算出液滴體積，與時(shí)間作比即是單個(gè)粘膜下腺液體

的分泌速度。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析1.2.4試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用GraphPadPrism統(tǒng)計(jì)

軟件進(jìn)行分析，除代表性熒光記錄曲線外，其余數(shù)據(jù)均用平均數(shù)

標(biāo)準(zhǔn)差(XS)表示。

2結(jié)果2.1川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通道的激活作用85

9095本次試驗(yàn)以PBS為陰性比照，

Genistein為陽性比照，利用熒光測(cè)定細(xì)胞模型對(duì)川陳皮素激活

CFTR氯離子通道活性進(jìn)行分析，結(jié)果見圖E

用不同濃度的川陳皮素激活CFTR氯離子通道的開放，結(jié)果

顯示，6.25molLl的川陳皮素可以激活通道，而且隨著川陳皮素濃

度的增大激活作用也相應(yīng)的增加，呈現(xiàn)出劑量效應(yīng)關(guān)系，當(dāng)濃度達(dá)

到400molLl時(shí)激活作用達(dá)到最大。

圖1川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通道

的激活作用的熒光淬滅分析結(jié)果。

A.川陳皮素對(duì)wt-CETR-FRT細(xì)胞激活作用的代表性熒光猝滅

的曲線。

其中，PBS為陰性比照，Genistein為陽性比照；全部試驗(yàn)

結(jié)果均是在lOOnmolLlFSK存在的條件下測(cè)得。

B.川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通道激活作用的劑量效應(yīng)關(guān)系曲

線。

劑量效應(yīng)圖顯示川陳皮素和Genistein對(duì)CFTR氯離子通

道的激活作用呈現(xiàn)劑量依靠特性(XS,n=3)0

Fig.1TheactivationeffectsofnobiletinonCFTR

chloridechannelactivity.(A)Typicalfluorescencequenching

curvesofYFP/H148QfluorescenceinCFTR-expressingFRTcells

stimulatedbyindicatedconcentrationsofnobi1etin.PBSwas

usedasanegativecontrolandgenisteinwasusedasaposition

control.Testsweredoneinthe100presenceoflOOnmolLlFSK.

(B)Dose-responserelationshipsshowingtheactivationofCFTR

bynobiletinand-3-genistein(XS,n=3).

2.2膜片鉗記錄川陳皮素對(duì)野生型CFTR氯離子通道的激活影響我

們進(jìn)一步利用膜片鉗技術(shù)探討了川陳皮素對(duì)在野生型CFTR氯離子

通道活性的影響。

測(cè)定時(shí)，首先加入25UmLlPKA和ImmolLlATP使CFTR充

分磷酸化，然后以ImmolLl105ATP產(chǎn)生的電流作為比照組，分

析比較了不同濃度川陳皮素存在的條件下，CFTR介導(dǎo)的C1-電流。

結(jié)果如圖2所示，與比照組相比，20niolLl的川陳皮素能使

CFTR氯離子通道的電流提高35%左右；當(dāng)川陳皮素的濃度為

40molLl時(shí)，其對(duì)CFTR氯離子通道的激活作用達(dá)到最大值，此

時(shí)CFTR氯離子通道的電流提高大約80%左右。

在去除川陳皮素后，上述電流快速?gòu)?fù)原正常，結(jié)果說明川陳

皮素對(duì)CFTR的激活作用是可逆的。

110圖2川陳皮素對(duì)CFTR的氯離

子通道激活作用的膜片鉗分析結(jié)果。

圖A顯示利用膜片鉗技術(shù)記錄不同濃度川陳皮素對(duì)CFTR氯

離子通道電流的影響。

圖B顯示川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通道的激活作用呈現(xiàn)出劑

量115效應(yīng)關(guān)系。

圖中顯示膜片鉗記錄了川陳皮素對(duì)CFTR通道活性是呈現(xiàn)劑量

依靠性且作用是可逆的u

Fig.2TheeffectsofnobiletinonCFTRactivityinpatches

clamprecordings.(A)RepresentativetracesofCFTR-mediated

Cl-currents.Thepatcheswereactivatedwith1mmolLlMgATP

plus25UmLlPKA,thenfollowedby1mmolLIMgATPplusindicated

concentrationofnobiletin.(B)Averagedcurrentfrom

indicatednumberofsimilarrecordingsasinnormalizedto

basiccurrent(1mmolLlMgATPcontrolgroup).120

1252.3川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通道活性的特異性分析

CFTRinh-172是已知的CFTR氯離子通道特異性阻斷劑。

在試驗(yàn)中，我們分別檢測(cè)了在不同濃度的CFTRinh-172存在

的條件下，川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通道激活作用的影響。

結(jié)果表明，川除皮素對(duì)CFTR氯離子通道的激活作用能夠被

CFTR特異性阻斷劑CFTRinh-172抑制，且抑制作用與抑制劑的濃

度呈正相關(guān)。

當(dāng)CFTRinh-172濃度達(dá)到lOmolLl時(shí)通道活性基本被完全

抑制（見圖3）o

-4-圖3CFTRinh-172

抑制川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通道的激活作用。

圖中顯示200molLl的川陳皮素對(duì)CFTR的激活作用在

CFTRinh-172的作用下能夠被抑制，且抑制作用隨著CFTRinh-172

的濃度的增加也隨之增加（XS,n=3）o

130Fig.3CFTRactivationbynobiletinwasreversed

byCFTRinhibitorCFTRinh-172.CFTRinh-172dose-dependently

inhibitedtheactivationofCFTRby200molLInobiletinor50

molLlgenistein.（XS,n=3）.2.4川陳皮素激活CFTR氯離

子通道動(dòng)力學(xué)和可逆性分析利用熒光測(cè)定細(xì)胞模型對(duì)川陳皮素轉(zhuǎn)運(yùn)

氯離子活性的動(dòng)力學(xué)和可逆性進(jìn)行分析，結(jié)果表135

140明川陳皮素能夠在2min時(shí)使CFTR氯離子通道達(dá)到最大激活

作用（圖4A）,在去除川陳皮素后，激活作用能在10分鐘之

內(nèi)徹底消逝(圖4B),說明這種激活作用是快速、可逆的。

圖4川陳皮素對(duì)CFTR激活作用的

動(dòng)力學(xué)分析及動(dòng)力學(xué)分析。

A.川陳皮素對(duì)CFTR激活作用的動(dòng)力學(xué)分析S,n=3)o

B.川陳皮素對(duì)CFTR激活作用的可逆性分析((XXS,

n=3)o

圖中顯示在100nmolLl的FSK存在的條件下,200moiL1的

川陳皮素能夠在2min內(nèi)達(dá)到最大激活作用；在去除川陳皮素后，

激活作用能在10分鐘之內(nèi)徹底消逝。

Fig.4Character!seticsofwt-CFTRactivationby

nobiletin.(A)KineticsofCFTRactivationbynobiletin.The

145maximumactivationwereacquiredin2minafteraddition

of200molLlnobiletin.(B)ReversaloftheCFTRactivation

afternobiletinwashout.FRTcellswereincubatedwith200molLl

nobiletinfor10minbeforewashout.(XS,n=3).-5-

2.5川陳皮素對(duì)CFTR激活作用機(jī)制的分析CFTR的激活途徑包括

提高CFTR磷酸化水平、抑制CFTR的去磷酸化以及干脆與CFTR

150155160165蛋白相互作用3

種。

目前常用的激活劑有FSK、IBMX和Genistein,并且這三種

激活劑的激活途徑互不相同。

FSK通過提高細(xì)胞cAMP水平而提高CFTR的磷酸化，IBMX

通過抑制磷酸二酯酶的活性進(jìn)而抑制CFTR的去磷酸化，而

Genistein則通常被認(rèn)為是與CFTR蛋白干脆發(fā)生相互作用

[17-19]o

CFTR是cAMP依靠性通道，F(xiàn)SK可以提高細(xì)胞胞漿內(nèi)cAMP

的生理水平，我們分別檢測(cè)在不同濃度FSK的存在下，川陳皮素

對(duì)CFTR氯離子通道激活作用的影響。

結(jié)果表明，川陳皮素對(duì)CFTR的激活作用依靠于FSK,隨著

FSK濃度的增加，川陳皮素對(duì)CFTR的激活作用也隨之增加；在

沒有FSK存在的狀況下，高濃度的川陳皮素（lOOmolLl）對(duì)CFTR

也表現(xiàn)出肯定的激活作用（圖5A）。

以5molLlFSK和lOOmolLlIBMX為陰性比照,以5molLl

FSK,lOOmolLlIBMX和25molLlGenistein為陽性比照，用

5molLlFSK,lOOmolLlTBMX和200molLl川陳皮素與細(xì)胞孵育

15min后檢測(cè)對(duì)細(xì)胞的激活作用的影響。

結(jié)果表明，川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通道的激活作用與FSK

和TBMX有明顯的相加作用。

由于FSK和IBMX已經(jīng)使細(xì)胞的cAMP達(dá)到飽和狀態(tài)，說明

川陳皮素對(duì)CFTR的激活作用并不影響CFTR的磷酸化，也就是說

川陳皮素可能是通過與CFTR干脆作用來激活通道活性的（圖5B）o

本次試驗(yàn)利用細(xì)胞熒光測(cè)定模型檢測(cè)川陳皮素在激活CFTR

氯離子通道開放時(shí)與Genistein的協(xié)同作用。

以5molLlFSK和20moiLIGenistein為比照，結(jié)果表明在

FSK和Genistein存在下，川陳皮素對(duì)通道的激活作用并沒有增

加，說明川陳皮素在激活CFTR氯離子通道時(shí)并沒有與Genistein

發(fā)生協(xié)同作用(圖5C)o

-6-

170圖5川陳皮素對(duì)CFTR激活作用機(jī)制的分析。

A.川陳皮素對(duì)CFTR激活作用的FSK依靠性分析(MeanSE,

n=3)o

B.川陳皮素對(duì)CFTR激活作用與FSK和IBMX存在相加效應(yīng)

的分析(MeanSE,n=3)。

圖中顯示在5molLlFSK和lOOmolLlTBMX使細(xì)胞磷酸化水平

達(dá)到最大的狀況下，川陳皮素還能提高對(duì)CFTR的激活作用但是沒

有Genistein的激活作用強(qiáng)。

C.川陳皮素對(duì)CFTR激活作用與Genistein協(xié)同作用的分析

(XS,n=3)o

175Fig.5Mechanismsofwt-CFTRactivationby

nobiletin.(A)Dose-responserelationshipforFSKdependentof

CFTRactivationbynobiletin.FSK-dependentexperiments

indicatedthatactivationofCFTRbynobiletindependsonCFTR

phosphorylationlevel.Athigherconcentration(lOOmolLl),

nobiletinalsocanactiveCFTRwithoutFSK,thoughitspotency

waslow.(B)AdditiveeffectofnobiletinwithFSKandIBMX.

CFTRproteinswere180maximalphosphorylatedby5molLlFSKand

lOOmolLlIBMX,noibiletincouldfurtheractivatedCFTR

chloridechannelactivity.(C)Synergyeffectofnobiletinwith

genistein.DatawereexpressedasXSof3independenttests.

2.6川陳皮素對(duì)小鼠氣管粘膜下腺液體分泌速度的影響CFTR在小

鼠器官粘膜下腺體高表達(dá)，在氣管液體分泌過程中發(fā)揮重要作用。

本試驗(yàn)以185生理鹽水為陰性比照，以Pilocarpin為陽性

比照，探討了川陳皮素對(duì)小鼠氣管粘膜下腺液體分泌速度的影響。

試驗(yàn)結(jié)果顯示川陳皮素能夠有效地刺激小鼠氣管粘膜下腺液體

分泌速度，并且CFTRinh-172能夠抑制其分泌(圖6)。

-7-圖6

川陳皮素對(duì)小鼠氣管粘膜下腺液體分泌速度的影響。

A.川陳皮素對(duì)單個(gè)小鼠氣管粘膜下腺液體分泌速

190度的影響，(a)生理鹽水，(b)lOmolLl川陳皮素，(c)

川陳皮素+100molLlCFTRinh-172,(d)lOmolLlPilocarpin,(c)

Pilocarpin+lOOmolLlCFTRinh-172w

B.川陳皮素川陳皮素對(duì)小鼠氣管粘膜下腺液體分泌速度的統(tǒng)

計(jì)學(xué)分析(XS,n=3)o

Fig.6Nobiletinstimulatedsubmucosalfluidsecretionin

mousetracheamucosa.(A)Theincreasingoffluid195droplets

secretedfromsinglesubmucosalglandinbrightfield

micrographs,(a)saline;(b)lOmolLlnobiletin;(c)lOmolLl

nobiletinpluslOOmolLlCFTRinh-172;(d)lOmolLlpilocarpin;

(e)lOmolLlpilocarpinpluslOOmolLlCFTRinh-172.(B)Linear

volumeincreaseofglandsecretionbynobiletinstimulatedthe

submucosal3探討glandsofmousetrachea(XS,n=6).200

205210本探討利用細(xì)胞熒光測(cè)定模型和膜片鉗技術(shù)確定

了川陳皮素能夠以劑量依靠方式特異的激活CETR氯離子通道活

性，這些活性作用具有依靠cAMP、快速、可逆的特點(diǎn)，并被CFTR

特異性抑制劑CFTRinh-172完全抑制。

在動(dòng)物體外試驗(yàn)中顯示川陳皮素可刺激小鼠氣管粘膜下腺液

體的分泌且能夠被CFTRinh-172抑制，試驗(yàn)結(jié)果也進(jìn)一步說明川陳

皮素能夠有效的激活CFTR氯離子通道，所以說川陳皮素有可能發(fā)

展成為治療包括支氣管擴(kuò)張?jiān)趦?nèi)的CFTR相關(guān)疾病的先導(dǎo)藥物。

雖然本試驗(yàn)還不足以系統(tǒng)地對(duì)川陳皮素激活CFTR氯離子通

道活性進(jìn)行深化的探討，但是通過已有的試驗(yàn)結(jié)果顯示，川陳皮

素可能是與CFTR蛋白干脆作用來達(dá)到激活效果的。

R前可知的CFTR激活途徑是通過提高CFTR的磷酸化或抑

制其去磷酸化以及和CFTR蛋白直接結(jié)合3種激活途徑來發(fā)揮作

用的。

激活CFTR氯離子通道需依靠于cAMP的激烈劑，即須耍通

過FSK來提高細(xì)胞內(nèi)鴕的cAMP生理環(huán)境來使通道激活。

在沒有FSK的狀況下，高-8-濃度的川陳皮素

也可以激活CFTR氯離子通道，這說明川陳皮素對(duì)CFTR氯離子通

道的構(gòu)象的變更有肯定的影響。

當(dāng)FSK和IBMX使細(xì)胞的cAMP水平達(dá)到飽和狀態(tài)時(shí),川陳

皮素還可以進(jìn)一步激活CFTR氯離子通道，說明川陳皮素對(duì)CFTR

的激活機(jī)制有別于FSK和IBMX,但同時(shí)川陳皮素沒有與

Genistein發(fā)生協(xié)同作用，即有可能與Genistein作用機(jī)制一樣是

通過215220225230235

240245250干脆作用于CFTR蛋白而達(dá)到激活作用的。

本探討通過體內(nèi)外試驗(yàn)證明了川陳皮素對(duì)于激活CFTR是牢

靠、有效的激活劑，為探討CFTR的結(jié)構(gòu)和功能供應(yīng)理論價(jià)值，也

為進(jìn)一步治療CFTR相關(guān)疾病機(jī)制供應(yīng)有力的依據(jù)。

4結(jié)論本文利用熒光淬滅試驗(yàn)和膜片鉗技術(shù)發(fā)覺川陳皮素

以劑量依靠的方式激活CFTR氯離子通道的C1一轉(zhuǎn)運(yùn)活性，且這

種活性是快速，可逆的，并能夠被CFTR特異性抑制劑

CFTRinh-172完全抑制。

初步的分子機(jī)制探討表明川陳皮素是以與CFTR干脆作用來激

活通道活性的。

進(jìn)一步的探討結(jié)果顯示，川陳皮素能夠有效地刺激小鼠氣管

粘膜下腺液體分泌速度。

因此，川陳皮素可能發(fā)展成為治療包括支氣管擴(kuò)張?jiān)趦?nèi)的

CFTR相關(guān)疾病的先導(dǎo)藥物。

致謝真誠(chéng)感謝吉大一院中心試驗(yàn)室供應(yīng)的大力幫助。

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