制藥工程專業(yè)

實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書匯編

食品與生物工程學(xué)院

2018.09

目錄

《藥物分析一》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書.............................

實(shí)驗(yàn)一煙酸原料藥的鑒別實(shí)驗(yàn)......................

實(shí)驗(yàn)二阿司匹林原料藥的鑒別試驗(yàn)及其特殊雜質(zhì)的檢查.

實(shí)驗(yàn)三高效液相色譜法測定阿司匹林的含量及其有關(guān)物質(zhì)

實(shí)驗(yàn)四中和滴定法測定煙酸的含量..................

《藥物分析三》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書.............................錯(cuò)

實(shí)驗(yàn)一、葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查......................

實(shí)驗(yàn)二、葡萄糖注射液的質(zhì)量檢查....................

實(shí)驗(yàn)三、阿司匹林原料藥的質(zhì)量檢查..................

《藥學(xué)微生物學(xué)》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書...........................

實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌染色與形態(tài)觀察???

實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的的制備滅菌及接種技術(shù)..............

實(shí)驗(yàn)三自然界中微生物的分離與純化................

《醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書...........................

實(shí)驗(yàn)一不同影響因素下家兔呼吸、血壓信號的變化及分析

實(shí)驗(yàn)二大鼠急性肝損傷動(dòng)物模型的制備及鑒定........錯(cuò)

實(shí)驗(yàn)三小鼠肝臟DNA的提取與鑒定..................

實(shí)驗(yàn)四不同來源蛋白質(zhì)的提取與分離................

《藥劑學(xué)》實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書.............................錯(cuò)

實(shí)驗(yàn)一軟膏劑的制備.............................

實(shí)驗(yàn)二栓劑的制備...............................

實(shí)驗(yàn)三微囊的制備...............................

實(shí)驗(yàn)四阿司匹林片劑的制備........................

實(shí)驗(yàn)五阿司匹林B-環(huán)糊精包合物的制備.............

實(shí)驗(yàn)六阿司匹林維生素C泡騰片的制備..............

《藥物分析一》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書

實(shí)驗(yàn)一煙酸原料藥的鑒別實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握鑒別煙酸的原理及方法

2、掌握紫外分光光度法鑒別煙酸的方法原理及紫外吸收圖譜的解析

3、熟悉紫外分光光度計(jì)的操作要點(diǎn)及紫外分光光度法效能指標(biāo)評價(jià)的內(nèi)容

與要求

二、實(shí)驗(yàn)原理

1、鑒別反應(yīng)

(1)煙酸加2,4-二硝基氯苯加熱溶化后，生成季鐵化合物，再加乙醇制氫氧化

鉀溶液，即顯紫紅色，以此鑒別煙酸，反應(yīng)式為:

本反應(yīng)需在無水的條件下進(jìn)行。

(2)煙酸與氫氧化鈉發(fā)生酸堿中和反應(yīng)，遇石蕊試紙顯中性，遇硫酸銅生成

淡藍(lán)色煙酸酮沉淀，以此鑒別煙酸，反應(yīng)式為：

淡藍(lán)色沉淀

(3)煙酸加水溶解后，照紫外-可見分光光度法測定，在262nm的波長處有最

大吸收，在237nm的波長處有最小吸收，且237nm波長處的吸光度與262nm波長

處的吸光度的比值應(yīng)為0.35?0.39；而煙酰胺也在262nm的波長處有最大吸收，在

245nm波長處有最小吸收，在A254nm/A262nm為0.63?0.67。因此可用該方法來

區(qū)別煙酸和煙酰胺。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作

（-）儀器和試劑

1、儀器紫外分光光度計(jì)、配對比色杯一對、試管（25mL,2支）、電爐、藥

物天平、燒杯（50mL,2只）、容量瓶（100mL、10mL各2只）、移液管（1mL,2

只）、乳缽（小號1個(gè)，配乳槌）。

2、試劑煙酸、0.4%氫氧化鈉試液（取氫氧化鈉0.4g,加水使溶解成100mL,

即得）、2,4■?二硝基氯苯、乙醇制氫氧化鉀試液（取氫氧化鉀3.5g,加100mL95%乙

醇使溶解，靜止后取上清液）、硫酸銅溶液（取硫酸銅12.5g,加水溶解成100mL,

即得），蒸僧水、95%乙醇

（-）實(shí)驗(yàn)步驟

1、鑒別

（1）取煙酸約4mg,加2,4-二硝基氯苯8mg,研勻，置試管中，緩緩加熱溶

化后，再加熱數(shù)秒鐘，放冷，加乙醇制氫氧化鉀試液3mL,即顯紫紅色。

（2）取煙酸約50mg,加水20mL溶解后，滴加0.4%氫氧化鈉溶液至遇石蕊

試紙顯中性反應(yīng)，加硫酸銅試液3mL,即緩緩析出淡藍(lán)色沉淀。

（3）取煙酸，加水溶解并稀釋制成每1mL中約含20陷的溶液，照紫外-可見

分光光度法（中國藥典2010年版附錄IVA）測定，在262nm的波長處有最大吸收，

在237nm的波長處有最小吸收；在237nm波長處的吸光度與262nni波長處的吸光

度的比值應(yīng)為0.35?0.39。

四、思考題

1、計(jì)算煙酸的A235nm/A262nm

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告書寫要求

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、實(shí)驗(yàn)原理；3、主要儀器與試劑；4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果；5、思考題答案。

實(shí)驗(yàn)二阿司匹林原料藥的鑒別試驗(yàn)及其特殊雜質(zhì)的檢查

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握鑒別阿司匹林的原理及方法。

2、掌握阿司匹林中游離水楊酸的檢查原理及方法。

3、熟悉阿司匹林中由于合成工藝所帶來的其它特殊雜質(zhì)的檢查原理及方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

1、鑒別反應(yīng)

（1）阿司匹林加熱水解產(chǎn)生的水楊酸在中性或弱酸性條件下與三氯化鐵試液

反應(yīng)，生成紫堇色配位化合物，以此鑒別阿司匹林，反應(yīng)式為：

COOHCOOH

OCOCH3+<^Q>OH+CH3COOH

COOH

COO'

6（OVOH+4FeCh-----?廠4Fe+12HC1

0"Ff3

本反應(yīng)極為靈敏。反應(yīng)適宜的pH值為4一6,在強(qiáng)酸性溶液中配位化合物分解。

（2）阿司匹林與碳酸氫鈉試液加熱水解,得水楊酸鈉及醋酸鈉，加過量稀硫

酸酸化后，則生成白色水楊酸沉淀,并發(fā)生醋酸的臭氣，以此鑒別阿司匹林。反應(yīng)

式為：

COOHCOONa

<^Q^~OCOCH3+Na2cO3—

OH+CH3coONa+CO2t

COONaCOOH

OH+H2SO4>2(OVOH+Na2sO4

2CH3COONa+H2sO4>2CH3COOH+Na2sO4

沉淀物于100℃-105℃干燥后，熔點(diǎn)為156℃-161℃o

2、特殊雜質(zhì)檢查

（1）溶液的澄清度澄清的定義：指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑或

未超過0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液。本實(shí)驗(yàn)系檢查碳酸鈉試液中不溶物。不溶物雜質(zhì)有未反

應(yīng)完全的酚類，或水楊酸精制時(shí)溫度過高，產(chǎn)生脫頻副反應(yīng)的苯酚，以及合成工藝

過程中由副反應(yīng)生成的醋酸苯酯、水楊酸苯酯和乙酰水楊酸苯酯等。這些雜質(zhì)均不

溶于碳酸鈉試液，而阿司匹林可溶解，利用溶解行為的差異，由一定量的阿司匹林

在碳酸鈉試液中溶解應(yīng)澄清來加以控制。

原理：用規(guī)定物質(zhì)制成不同濃度的對照濁度標(biāo)準(zhǔn)液與供試液比較，判定供試品

的澄清度。

（2）游離水楊酸檢查的原理是利用阿司匹林結(jié)構(gòu)中無酚羥基，不能與高

鐵鹽作用，而水楊酸則可與高鐵鹽反應(yīng)呈紫堇色，與一定量水楊酸對照液生成的色

澤比較，從而控制游離水楊酸的限量。方法靈敏，可檢出水楊酸。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作

（-）儀器和試劑

1、儀器：燒杯（50mL,4只）、電爐、藥物天平、恒溫水浴鍋、配對比濁管

（內(nèi)徑15—16mm,平底、具塞、以無色、透明、中性硬質(zhì)玻璃制成）2支、量瓶

（100mL,5只）、移液管（10mL、5mL、lmL各2支）、量瓶（10mL、50mL、1000mL

各2只）。

2、試劑：阿司匹林、水楊酸、三氯化鐵試液（取FeCL9g,加水使溶解成100mL,

即得）、蒸儲水、碳酸鈉試液（取無水Na2co310.5g,加水使溶解成100mL,即得）、

稀硫酸（取硫酸57mL,加水稀釋至1000mL,即得）、硫酸腓、10%烏洛托品（六亞

甲基四胺）、乙醇、硫酸鐵鐵指示液（取硫酸鐵鐵8g,加水100mL使溶解，即得）、

鹽酸溶液（9-100）。

【注】實(shí)驗(yàn)前一周應(yīng)先配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

（二）實(shí)驗(yàn)步驟

1、鑒別

（1）取本品約0.1g,置50mL燒杯中，加水10mL,煮沸，放冷，加三氯化鐵

試液1滴，即顯紫黃色。

（2）取本品約0.5g,置50mL燒杯中，加碳酸鈉試液10mL,煮沸2分鐘后，放

冷，加過量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并發(fā)生醋酸的臭氣。

2、檢查

（1）溶液的澄清度

【濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備】稱取硫酸腫1.00g,置100mL量瓶中，加水適量

使溶解（必要時(shí)在40℃的水浴中溫?zé)崛芙猓铀♂尩娇潭?，搖勻，放置4~6h

后使用；取此溶液與等容量的10%烏洛托品溶液混合，搖勻，于25c避光靜置24

小時(shí)，即得。本液置冷處避光保存，可在兩個(gè)月內(nèi)使用，用前搖勻。

【濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的制備】取濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液15.0mL置1000mL量瓶中，加

水稀釋至刻度，搖勻，即得。本液應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)使用，用前搖勻。

【濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備】取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液2.50mL,置100mL量瓶中，加水稀

釋至刻度，搖勻，即得（該標(biāo)準(zhǔn)液為0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液）。本液應(yīng)臨用時(shí)配制，使用

前充分搖勻。

【供試品溶液制備】取本品0.50g,置50mL燒杯中，加溫?zé)嶂良s45℃的碳

酸鈉試液10mL溶解后，制成供試品溶液（供試品溶解后應(yīng)立即檢視）。

操作方法：將規(guī)定濃度的供試品溶液與等量的濁度標(biāo)準(zhǔn)液分別置于配對的比濁

用玻璃管中，液面的高度為40mm,在濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備后5分鐘，同置黑色背景上，

從比濁管上方向下觀察、比較，用以檢查溶液的澄清度或其渾濁程度。供試品溶液

的澄清度應(yīng)未超過0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液。

（2）游離水楊酸取本品0.10g,加乙醇1mL溶解后，加冷水適量使成50mL,

立即加新制的稀硫酸鐵鍍?nèi)芤骸救←}酸溶液（9-100）1mL,加硫酸鐵鐵指示液2mL

后,再加水適量使成100mL】1mL,搖勻；30秒鐘內(nèi)如顯色，與對照液（精密稱取

水楊酸0.1g,加水溶解后，加冰醋酸1mL,搖勻，再加水使成1000mL,搖勻，精

密量取1mL,加乙醇1mL、水48mL與上述新制的稀硫酸鐵鍍?nèi)芤?mL,搖勻）

比較，不得更深（0.1%）。

四、思考題

1、計(jì)算水楊酸的限量。

2,計(jì)算碳酸鈉試液中不溶物的限量。

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告書寫要求

1,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、實(shí)驗(yàn)原理；3、主要儀器與試劑；4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果；5、思考題

答案。

實(shí)驗(yàn)三高效液相色譜法測定阿司匹林的含量及其有關(guān)物質(zhì)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握內(nèi)標(biāo)法的實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果計(jì)算方法。

2、熟悉高效液相色譜儀性能檢查和色譜參數(shù)測定的方法。

3、了解高效液相色譜儀的使用方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

(-)阿司匹林的含量測定

1、色譜參數(shù)本實(shí)驗(yàn)僅測定下列色譜參數(shù)：

2

(1)理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wi/2)理論塔板高度：H=L/n

如果測得的理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某

些條件(如柱長、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等)，使理論板數(shù)達(dá)到要求。

(2)分離度：定量分析時(shí)，為便于準(zhǔn)確測量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰

之間有較好的分離度。分離度(R)的計(jì)算公式為：

2(tR2—tRl)

R=-----------

WI+W2

式中tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間；

tRl為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間；

W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。

除另外有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。

(3)拖尾因子為保證測量精度，特別當(dāng)采用峰高法測量時(shí)，應(yīng)檢查待測峰

的拖尾因子(T)是否符合各品種項(xiàng)下的規(guī)定，拖尾因子計(jì)算公式為

T=Wo.o5h/2di

式中，Wo.o5h為0.05峰高處的峰寬；5為峰極大至峰前沿之間的距離。

除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.95-1.05之間。

中國藥典規(guī)定，在采用HPLC法檢測藥品時(shí)，必須對儀器進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn),

其試驗(yàn)內(nèi)容即為理論板數(shù)、分離度、拖尾因子以及重復(fù)性。

2、高效液相色譜儀的性能指標(biāo)：本實(shí)驗(yàn)僅檢查重復(fù)性。

重復(fù)性：取各品種項(xiàng)下的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積

測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。

3、內(nèi)標(biāo)法定量分析阿司匹林含量

（1）內(nèi)標(biāo)法的定義：將一個(gè)已知重量，樣品中不含有的純物質(zhì)，加入至待測

樣品溶液中，以此純物質(zhì)的量為標(biāo)桿，對比測定待測i組分的含量的方法謂內(nèi)標(biāo)法。

（2）內(nèi)標(biāo)法特點(diǎn)：在進(jìn)樣量不超限（色譜柱不超載）范圍內(nèi)，定量結(jié)果與進(jìn)

樣量無關(guān)；只要被測組分及內(nèi)標(biāo)物出峰，分離度合乎要求，即可定量，定量結(jié)果與

其它組分是否出峰無關(guān)；很適用于藥物或復(fù)方藥物中某些有效成分的含量測定以及

藥物中微量雜質(zhì)的測定。由于雜質(zhì)與主要成分含量相差懸殊，無法用歸一化法測定

雜質(zhì)含量，這時(shí)可加入一個(gè)與雜質(zhì)量相當(dāng)?shù)膬?nèi)標(biāo)物，加大進(jìn)樣量，增加雜質(zhì)峰面積,

測量雜質(zhì)峰與內(nèi)標(biāo)物峰面積比，即可求出雜質(zhì)的含量。樣品配制比歸一化法麻煩，

內(nèi)標(biāo)物有時(shí)不易找尋是其缺點(diǎn)。

（3）內(nèi)標(biāo)物的要求：內(nèi)標(biāo)物應(yīng)為樣品中不含有的組分；內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間應(yīng)

與待測成分相近，分離度RNL5；內(nèi)標(biāo)物應(yīng)為純物質(zhì)。

內(nèi)標(biāo)法可分為工作曲線法，內(nèi)標(biāo)對比法（內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法）、內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法及校正因

子法等，在HPLC中最常用內(nèi)標(biāo)對比法。使用內(nèi)標(biāo)法可抵消儀器穩(wěn)定性差，進(jìn)樣量

不夠準(zhǔn)確等原因帶來的定量分析誤差。

當(dāng)配制校正因子測定用的含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的對照品溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試

品溶液使用同一份內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時(shí)且內(nèi)標(biāo)物加入量相同，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必

精密稱（量）取。

【工作曲線法】是在待測組分各種濃度的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）溶液中，將相

同量的內(nèi)標(biāo)物加入到同體積的各對照品溶液中，進(jìn)樣。分別測量i組分（對照品）

與內(nèi)標(biāo)物s的峰面積A（或峰高h(yuǎn)）,以其峰面積比Ai/As對Ci（標(biāo)嗡繪制工作曲線，

或求出回歸方程式

C）=a+bAi/As

先用加內(nèi)標(biāo)物的對照品溶液求出直線的斜率b與截距a,有時(shí)測定工作曲線并

非直接用于定量分析，而是檢驗(yàn)是否可用內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行定量分析。因?yàn)橹挥薪鼐?/p>

a為零時(shí)才可用內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法定量，否則需用內(nèi)標(biāo)二點(diǎn)法定量。

樣品測定：將與對照品溶液相同量的內(nèi)標(biāo)物加至樣品溶液中，進(jìn)樣。分別測量

樣品與內(nèi)標(biāo)物峰面積或峰高，以此兩者峰面積或峰高之比代入回歸方程計(jì)算出樣品

中i組分的含量。

【內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法(內(nèi)標(biāo)對比法)】該方法不需知校正因子又具有內(nèi)標(biāo)法的定量

準(zhǔn)確度與進(jìn)樣量無關(guān)的特點(diǎn)，方法簡便實(shí)用。在藥物分析中，校正因子多是未知的，

就可利用此法。

先稱取一定量的內(nèi)標(biāo)物，加入到對照品(或標(biāo)準(zhǔn)品)溶液中，組成對照品(標(biāo)

準(zhǔn)品)溶液(配制對照品溶液的目的實(shí)際上是用來測定校正因子)。然后將相同量

的內(nèi)標(biāo)物，加入到同體積樣品溶液中，組成樣品溶液，將兩種溶液分別進(jìn)樣，由下

式計(jì)算出樣品溶液中待測組分的含量。

由于截距a為零，Ci=bAi/As；若(Cs)對照=(Cs')樣品，則由下式計(jì)算出樣

品溶液中待測組分的含量：

(Ci)#&/(Ci)可照=(Ai/As)樣品/(Ai/As)對照

若(Cs)對照不等于(Cs')樣品，則由下式計(jì)算出樣品溶液中待測組分的含量：

As/CsAs/Cs'

校正因子(f)=(---------)對版=(----------)樣品

Ai/CiAi'/Ci'

式中，As、As'分別為對照品溶液中和樣品溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；Ai、Ci分別

為對照溶液中對照品的峰面積和對照品的濃度；Ai'、Ci'分別為樣品溶液中i組分

的峰面積及其濃度；Cs、Cs'分別為對照品溶液中和樣品溶液中內(nèi)標(biāo)物的濃度。

As/CsAi'

(Ci)樣品=()對第x()樣1s

Ai/CiAs'/Cs'

【校正因子法】用此法需要已知校正因子，而HPLC法的校正因子很難由手冊中查

到，常常需自己測定，校正因子測定方法如下：將精密稱量的被測i組分的對照品

mi克，加一定量精密稱量的內(nèi)標(biāo)物m,克配成溶液，在與測定樣品溶液完全相同的

實(shí)驗(yàn)條件下，進(jìn)樣5—10次，測定內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積As和i組分的峰面積Ai。用下

式計(jì)算待測物質(zhì)的相對重量校正因子：

As/Cs

fi=

Ai/Ci

求出校正因子fi后，同法配制樣品溶液，進(jìn)樣分析，測量待測i組分的峰面積Ai

和內(nèi)標(biāo)物峰面積As。按下式計(jì)算樣品溶液中所含i組分的含量。

niifiAiCifiAi

----=--------或-----=-------

msfsAsCsfsAs

fiAi

Ci=XCs

fsAs

式中，fi、fs分別為i組分和內(nèi)標(biāo)物的重量校正因子；Ci、Cs分別為樣品溶液中i組

分和內(nèi)標(biāo)物的濃度。如果校正因子是以內(nèi)標(biāo)物質(zhì)作為基準(zhǔn)物質(zhì)而測得，則fs=l。

4、阿司匹林乙醇溶液在（280±1）nm波長處有最大吸收，可以用于定量測定。

在其生產(chǎn)和貯藏過程中，容易引入中間體、水解和分解產(chǎn)物，這些雜質(zhì)也有紫外吸

收，因此采用高效液相色譜儀測定含量是合適的（如USP（24）采用HPLC法測定

阿司匹林片劑、長效與緩釋片劑；Ch.P采用HPLC法測定阿司匹林栓劑）。

（-）阿司匹林中有關(guān)物質(zhì)的檢查

系特殊雜質(zhì)檢查。利用HPLC法檢查化學(xué)物質(zhì)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)。HPLC法

不僅分離藥物與雜質(zhì)的效能高，且可準(zhǔn)確地測定各組分的峰面積。本實(shí)驗(yàn)采用不加

校正因子的主成分自身對照法，用于沒有雜質(zhì)對照品時(shí)阿司匹林中雜質(zhì)的限量檢

查。

原理：當(dāng)沒有雜質(zhì)對照品時(shí)，可采用不加校正因子的主成分自身對照法。對照

溶液的配制：按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)

的溶液作為對照溶液，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)儀器靈敏度（以噪音水平可接受為限）或進(jìn)樣量（以

柱子不過載為限），使對照溶液的主成分色譜峰高約達(dá)滿量程的10%?25%或其峰

面積能準(zhǔn)確積分（面積約為通常條件下滿量程峰積分值10%）。，取供試品溶液和對

照溶液適量，分別進(jìn)樣，前者的記錄時(shí)間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分保留時(shí)間的

2倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對照溶液主成分的峰面積比較，

計(jì)算雜質(zhì)含量。若供試品所含的部分雜質(zhì)未與溶劑峰完全分離，則按規(guī)定先記錄供

試品溶液的色譜圖I,再記錄等體積純?nèi)軇┑纳V圖n。色譜圖I上雜質(zhì)峰的總面

積（包括溶劑峰），減去色譜圖II上的溶劑峰面積，即為總雜質(zhì)峰的校正面積。然

后依法計(jì)算。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作

（-）儀器和試劑

1、儀器：高效液相色譜儀、ODS柱、萬分之一分析天平、量筒（100mL、1000mL

各1個(gè)）、0.455im微孔濾膜（油系膜）、量瓶（50M1,6只；10mL,2只）、移液管

（2mL2支；10mL,2只）、吸耳球1個(gè)。

2、試劑：咖啡因（內(nèi)標(biāo)物）、阿司匹林、乙醇、甲醇（色譜純）、二乙胺（AR）、

冰醋酸（AR）、重蒸偏水。

（二）實(shí)驗(yàn)步驟

1、阿司匹林含量測定

（1）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲

醇一0.1%二乙胺水溶液一冰醋酸（40：60：4）為流動(dòng)相，檢測波長為280nm,理

論板數(shù)按阿司匹林峰計(jì)算應(yīng)不低于2000,阿司匹林峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合

要求。

（2）內(nèi)標(biāo)溶液的制備取咖啡因，加色譜純甲醇制成每1mL中含4mg的溶

液，搖勻，即得。

（3）對照品溶液的制備取阿司匹林對照品約0.15g,精密稱定，置50mL

量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5mL,用色譜純甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量

取2mL,置50mL量瓶中，用色譜純甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。

（4）供試品溶液的制備取阿司匹林約0.15g,精密稱定，置50mL量瓶中，

精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5mL,用色譜純甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2mL,

置50mL量瓶中，用色譜純甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。

（5）測定法用微量注射器量取對照品溶液，進(jìn)樣IORL（若為20RL定量環(huán)

則進(jìn)樣20此），記錄色譜圖，重復(fù)5次，以同樣方法分析供試品溶液（重復(fù)3次）。

按下表記錄峰面積。

對照品溶液供試品溶液

AiAsAi/AsA.AsAi/As

2

3

4

5

平均值

（6）結(jié)果計(jì)算按下式計(jì)算阿司匹林的百分含量

（Ai/As）樣品mi對照

阿司匹林百分含量=（Wi樣品/W"）xlOO%=---------X----X100%

（Ai/As）對原W樣品

式中，W院為阿司匹林稱重，Wi"為樣品中阿司匹林含量，mi對照為阿司匹林對照

品稱重。

2、阿司匹林中有關(guān)物質(zhì)的檢查

測定法色譜條件與阿司匹林含量測定方法相同。取本品適量，加色譜純甲

醇制成每1mL中含3mg的溶液，作為供試品溶液；量取適量，加色譜純甲醇制成

每1mL中含0.06mg的溶液，作為對照溶液。取對照溶液IORL（若為20RL定量環(huán)

則進(jìn)樣20RL）注入液相色譜儀進(jìn)行預(yù)試，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰

高為滿量程的10%;再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各IOFIL分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主

成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的

和，不得大于對照溶液主成分峰的峰面積。

（三）注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)中可通過選擇適當(dāng)長度的色譜柱，調(diào)整流動(dòng)相中甲醇與二乙胺水溶液的比

例或流速，使阿司匹林峰、水楊酸峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度達(dá)到定量分析的要求。

四、思考題

1.此實(shí)驗(yàn)中供試品溶液和對照品溶液中的內(nèi)標(biāo)物濃度是否必須相同？為什么？

2.內(nèi)標(biāo)對比法有何優(yōu)點(diǎn)？

3、如何選擇內(nèi)標(biāo)物質(zhì)？

4、配制供試品溶液時(shí)，為什么要使其濃度與對照品溶液的濃度相接近？

5、內(nèi)標(biāo)法繪制校正曲線時(shí)，如果（A/As）—Ci直線不通過原點(diǎn)，能否用內(nèi)標(biāo)

對比法進(jìn)行定量？

6、什么是分離度？如何提高分離度？

7、本實(shí)驗(yàn)為什么采用含有醋酸的流動(dòng)相？

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告書寫要求

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、實(shí)驗(yàn)原理（簡述）；3、主要儀器與試劑；4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果；5、

回答思考題。

高效液相色譜儀使用說明

島津LC-10AT型高效液相色譜儀操作規(guī)程

1.目的

規(guī)范島津LC-10AT型高效液相色譜儀的使用。

2.范圍

適用于島津LC-10AT型高效液相色譜儀的使用。

3.職責(zé)

質(zhì)檢員對本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。

4.規(guī)程

4.1系統(tǒng)組成：本系統(tǒng)由2個(gè)LC-lOATvp溶劑輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、

Rheodyne7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、SPD-lOAvp紫外-可見檢測器、N2000色譜數(shù)

據(jù)工作站和電腦等組成，另外還包括打印機(jī)、不間斷電源等輔助設(shè)備。

4.2準(zhǔn)備

4.2.1準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45pim濾膜過濾，超聲脫氣20min。

4.2.2根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環(huán)。

4.2.3配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用合適的0.45Rm濾膜

過濾。

4.2.4檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。

4.3開機(jī)：接通電源，依次開啟不間斷電源、B泵、A泵、檢測器，待泵和檢測

器自檢結(jié)束后，打開打印機(jī)、電腦顯示器、主機(jī)，最后打開色譜工作站。

4.4參數(shù)設(shè)定

4.4.1波長設(shè)定：在檢測器顯示初始屏幕時(shí)，按［func］鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波

長值，按［Enter］鍵確認(rèn)。按［CE］鍵退出到初始屏幕。

4.4.2流速設(shè)定：在A泵顯示初始屏幕時(shí)，按［func］鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流

速（柱在線時(shí)流速一般不超過Iml/min）,按［Enter］鍵確認(rèn)。按［CE］鍵退出。443

流動(dòng)相比例設(shè)定：在A泵顯示初始屏幕時(shí)，按［cone］鍵，用數(shù)字鍵輸入流

動(dòng)相B的濃度百分?jǐn)?shù)，按［Enter］鍵確認(rèn)。按［CE］鍵退出。

4.4.4梯度設(shè)定

4.4.4.1在A泵顯示初始屏幕時(shí)，按［edit］鍵，［Enter］鍵；

4.4.4.2用數(shù)字鍵輸入時(shí)間，按［Enter］鍵，重復(fù)按［func］鍵選擇所需功能（FLOW

設(shè)定流速，BCNC設(shè)定流動(dòng)相B的濃度），按［Enter］鍵，用數(shù)字鍵輸入設(shè)定

值，按［Enter］鍵;

4.4.4.3重復(fù)上一步設(shè)定其它時(shí)間步驟；

4.4.4.4用數(shù)字鍵輸入停止時(shí)間，重復(fù)按［func］鍵直至屏幕顯示STOP,按［Enter］

鍵。按［CE］鍵退出。

4.5更換流動(dòng)相并排氣泡

4.5.1將A/B管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動(dòng)相的儲液瓶中；

4.5.2逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)A/B泵的排液閥180°,打開排液閥；

4.5.3按A/B泵的［purge］鍵，pump指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的流速?zèng)_洗，

3min（可設(shè)定）后自動(dòng)停止；

4.5.4將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。

4.5.5如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。

4.5.6如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)

流速為5ml/min,按［pump］鍵，沖洗3min后再按［pump］鍵停泵，重新接上

柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。

4.6平衡系統(tǒng)

4.6.1按《N2000色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程》打開“在線色譜工作站”軟件，輸

入實(shí)驗(yàn)信息并設(shè)定各項(xiàng)方法參數(shù)后，按下“數(shù)據(jù)收集''頁的［查看基線］按

鈕。

4.6.2等度洗脫方式

4.6.2.1按A泵的［pump］鍵，A、B泵將同時(shí)啟動(dòng)，pump指示燈亮。用檢驗(yàn)方法

規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，一般最少需6倍柱體積的流動(dòng)相。

4.6.2.2檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。

4.6.2.3觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)不超過IMPa。如超過則可初

步判斷為柱前管路仍有氣泡，按456操作。

4.624觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移＜0.01mV/min,噪聲為〈O.OOlmV時(shí),

可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。

4.6.3梯度洗脫方式

4.6.3.1以檢驗(yàn)方法規(guī)定的梯度初始條件，按462項(xiàng)下方法平衡系統(tǒng)。

4.6.3.2在進(jìn)樣前運(yùn)行1~2次空白梯度。方法：按A泵的［run］鍵，指

示燈亮，梯度程序運(yùn)行；程序停止時(shí)，指示燈滅。

4.7進(jìn)樣

4.7.1進(jìn)樣前按檢測器［zero］鍵調(diào)零，按軟件中［零點(diǎn)校正］按鈕校正基線零

點(diǎn)，再按一下［查看基線］按鈕使其彈起。

4.7.2用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。

實(shí)驗(yàn)四中和滴定法測定煙酸的含量

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、掌握中和滴定法測定煙酸含量的原理及方法

2、掌握中和滴定法測定煙酸含量的操作要點(diǎn)、注意事項(xiàng)與結(jié)果計(jì)算

3、熟悉中和滴定法的終點(diǎn)確定、效能指標(biāo)評價(jià)的內(nèi)容與要求

二、實(shí)驗(yàn)原理

煙酸為一元強(qiáng)酸性物質(zhì)，因此，可直接采用強(qiáng)酸的酸堿滴定法測定其含量。具

體方法為以酚酰為指示劑，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液滴定煙酸的水溶液，根據(jù)消耗的

氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液的用量，計(jì)算以C6H5NO2計(jì)的煙酸的含量，并將滴定的結(jié)果用

空白試驗(yàn)校正。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作

（-）儀器與試劑

1、儀器：三角燒瓶（100mL12只）、堿式滴定管（25ml、一根）、酸式滴定

管（50ml,1根）、量筒（50ml,2只）、萬分之一電子天平

2、試劑：0.1mol/L氫氧化鈉滴定液（取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6mL,加新

沸過的冷水使成1000mL,即得）、水、酚猷指示液（取酚猷1g,加乙醇100mL使

溶解，即得）

（二）實(shí)驗(yàn)步驟

1、氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的標(biāo)定

取在105℃干燥至恒重的基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀約0.6g,精密稱定，加新沸過的

冷水50mL,振搖，使其盡量溶解；加酚醐指示液2滴，用本液滴定，在接近終點(diǎn)

時(shí)，應(yīng)使鄰苯二甲酸氫鉀完全溶解，滴定至溶液顯粉紅色。每1mL氫氧化鈉滴定

液（lmol/L）相當(dāng)于20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀。根據(jù)本液的消耗量與鄰苯二甲酸

氫鉀的取用量，算出本液的濃度。平行測定3次，3次結(jié)果的相對平均偏差不得大

于01%

注：本滴定液應(yīng)置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔內(nèi)各插入玻璃

管1支，1管與鈉石灰管相連，1管供吸出本液使用。

2、煙酸的含量測定

(1)實(shí)驗(yàn)方法：取本品0.3g,精密稱定，加50mL新沸過的冷水溶解后，加3

滴酚猷指示液，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液(O.lmol/L)滴定至粉紅色，記錄消耗氫氧

化鈉滴定液的體積數(shù)(mL),每1mL氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于12.31mg

的煙酸(C6H5NO2),即得。

(2)結(jié)果計(jì)算

煙酸(以C6H5NO2計(jì))的質(zhì)量分?jǐn)?shù)仞，數(shù)值以％表示，按下式計(jì)算：

(V-V^)xcxO.1231xlOO

/=

m

其中：V-消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液的體積數(shù)，單位為mL；

Vo-空白實(shí)驗(yàn)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液的體積數(shù)，單位為mL；

c-氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液實(shí)際濃度數(shù)值，單位為moVL；

實(shí)驗(yàn)室樣品的質(zhì)量數(shù)值，單位為g;

注：該實(shí)驗(yàn)測得的為煙酸濕品的含量，測得煙酸干燥失重的結(jié)果后可將該結(jié)果

換算為干燥品的含量。

本實(shí)驗(yàn)平行操作2次，允許相對差在0.3%以內(nèi)。

四、思考題

1、什么叫中和滴定突躍范圍。

2、根據(jù)什么選擇酸堿指示劑？舉例說明。

3、如何計(jì)算氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液的濃度

4、如果標(biāo)定氫氧化鈉滴定液的基準(zhǔn)未烘干，將使標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的標(biāo)定結(jié)果偏

高還是偏低？

五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告書寫要求

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、實(shí)驗(yàn)原理；3、主要儀器與試劑；4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果；5、思考題

答案。

《藥物分析三》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書

實(shí)驗(yàn)一、葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、熟悉藥物中一般雜質(zhì)限量檢查的方法及限量計(jì)算方法。

2、熟悉藥物中一般雜質(zhì)檢查的目的和意義。

3、掌握氯化物、硫酸鹽、鐵鹽的檢查原理。

二、實(shí)驗(yàn)原理

(一)葡萄糖的生產(chǎn)工藝

葡萄糖是用淀粉以無機(jī)酸水解或在酶催化下經(jīng)過水解得稀葡萄糖液，再經(jīng)脫

色、濃縮結(jié)晶制得。國內(nèi)生產(chǎn)方法如下：

1、酸水解法以無機(jī)酸將淀粉水解為葡萄糖。

HC1

(C6Hl0O5)rt+/JH2O,-&?r/C6Hi2O6

2、雙酶水解法以生物酶為催化劑將淀粉水解為葡萄糖。

生物酶一

(C6H10O5)W+?H2O?CfiH|2O6

△

3、酸酶水解法以鹽酸為液化劑，糖化酶為催化劑，將淀粉水解為葡萄糖。

精化院》

(C6lIl0Os)?+HC;6Hl

△

根據(jù)葡萄糖生產(chǎn)工藝特點(diǎn)，應(yīng)進(jìn)行氯化物、硫酸鹽、鐵鹽等一般雜質(zhì)檢查，

進(jìn)行蛋白質(zhì)、可溶性淀粉等特殊雜質(zhì)檢查。

(二)各種雜質(zhì)檢查原理

1、氯化物檢查法

氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定量

的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液和硝酸銀在同樣條件下處理生成的氯化銀渾濁相比較，測定供

試品中氯化物的限量。

Cl-+Ag+——>AgClj

2、硫酸鹽檢查法

藥物中微量硫酸鹽與氯化鋼在酸性溶液中作用，生成硫酸鋼微粒而顯白色渾

濁液，同一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液與氯化鋼在同樣條件下，用同法處理生成的渾濁

比較，判斷藥物中含硫酸鹽的限量。

22+

SO4~+Ba—>BaSO4i

3、鐵鹽檢查法

三價(jià)鐵鹽在硝酸酸性溶液中與硫氟酸鹽生成紅色可溶性硫富酸鐵絡(luò)離子，與

一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后進(jìn)行比色。

Fe3,4-6SCN—>[Fe(SCN)6]3-紅色

進(jìn)行葡萄糖的鐵鹽檢查時(shí)，需在顯色前加硝酸3滴，煮沸5min,使Fe?+氧化為

Fe3+o由于硝酸中可能含有亞硝酸，亞硝酸也能與硫氟酸根離子反應(yīng)生成紅色的亞

硝酰硫氟化物，影響比色，因此加入顯色劑之前加熱煮沸有助于除去氧化氮，以消

除氧化氮生產(chǎn)的亞硝酸干擾。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作

(一)儀器和試劑

1、材料

葡萄糖(藥用)。

2、試劑

⑴酚酸指示液：取酚獻(xiàn)1g,加乙醇100ml使溶解，即得。

⑵氫氧化鈉滴定液(0.02mol/L)：取氫氧化鈉4.000g,加水振搖使溶解成飽和溶液，

冷卻后，置聚乙烯塑料瓶中，靜置數(shù)日，澄清后備用。

取澄清的氫氧化鈉飽和溶液5.6ml,加新沸過的冷水使成1000ml,搖勻，精

密量取溶液2ml,置10ml容量瓶中加水稀釋至刻度，即得。

(3)標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液：稱取氯化鈉0.165g,置1000ml容量瓶中，加水適量使溶解并

稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。

(4)稀硝酸：取硝酸105ml加水稀釋至1加0ml,即得。

(5)硝酸銀試液(0.1mol/L)：取硝酸銀17.5g,加水適量使溶解成1000mL

搖勻，置玻璃塞的棕色玻瓶中，密閉保存。

(6)標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液：稱取硫酸鉀0.181g,置1000ml容量瓶中，加水適量使溶

解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當(dāng)于100〃g的S04)o

(7)稀鹽酸:取鹽酸234ml,加水稀釋至1000mL即得。

(8)25%氯化鋼溶液：取氯化車貝25g,加水適量使溶解成100ml,即得。

(9)標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液：稱取硫酸鐵鍍[FeNH4(SO4)2-12H2O]0.863g,置1000ml容量

瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml,用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。

(10)硫氟酸鏤溶液：取硫氟酸鏤30g,加水適量使溶解成100ml,即得。

(11)其它：乙醇、石蕊試紙。

3、器材

量筒(100ml1個(gè)、500ml2個(gè)、1000ml1個(gè))；

刻度吸管(1ml1支、5ml1支、10ml1支、20ml1支)；

容量瓶(10ml1個(gè)、100ml2個(gè)、1000ml2個(gè))：

移液管(2ml1支)；

聚乙烯塑料瓶(500ml2個(gè))；

玻璃塞的棕色玻瓶(1000ml2個(gè))；

無色廣口瓶(1000ml2個(gè))；

納氏比色管(50ml6支)；

燒杯(50ml6只、100ml4只)；

試管(50ml4支)；

加熱回流裝置，電子天平，水浴鍋，電爐。

(-)實(shí)驗(yàn)步驟

1、酸度

取本品2.0g,加水20ml溶解后，加酚酗指示液3滴與氫氧化鈉滴定液(0.02

mol/L)0.20mL應(yīng)顯粉紅色。

2、乙醇溶液的澄清度

取本品1.0g,加90%乙醇30ml,置水浴上加熱回流約lOmin,溶液應(yīng)澄清。

3、氯化物

(1)標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液的制備

精密量氯化鈉貯備液10mL置100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，

即得(每1ml相當(dāng)于10〃g的C1)。

(2)供試溶液的配制

取本品0.60g,加水溶解使成25ml(溶液如顯堿性，可滴加硝酸使遇石蕊試

紙顯中性反應(yīng))，再加稀硝酸10ml,溶液如不澄清，應(yīng)用事先已洗浮Ct的濾紙

濾過；置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml,搖勻，即得供試溶液。

(3)對照溶液的配制

取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液6.0ml,置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10mL用水稀

釋使成約40ml,搖勻，即得對照溶液。

(4)檢查

于供試溶液與對照溶液中分別加硝酸銀試液(0.1mol/L)1.0ml,用水稀釋使

成50ml,搖勻，在暗處放置5min,同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，

比較所產(chǎn)生的渾濁，樣品管不得比對照管更濃(0.01%)。

4、硫酸鹽

(1)標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液的制備

稱取硫酸鉀0.181g,置1000ml容量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，

搖勻，即得(每1ml相當(dāng)于100的SO4)o

(2)供試溶液的配制

取本品2.0g,加水溶解使成約40ml(如溶液顯堿性，可滴加鹽酸使遇石蕊試

紙顯中性反應(yīng))；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸2ml,

搖勻，即得供試溶液。

(3)對照溶液的配制

取標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液2.0ml,置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml,加稀

鹽酸2ml,搖勻，即得對照溶液。

(4)檢查

于供試溶液與對照溶液中分別加入25%氯化鋼溶液5ml,加水稀釋至50ml,

充分搖勻，放置lOmin,同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較所產(chǎn)生

的渾濁，樣品管不得比對照管更濃(0.01%)。

5、鐵鹽

(1)標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液的制備

精密量取硫酸鐵鐵貯備液10ml,置100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖

勻，即得(每1ml相當(dāng)于10〃g的Fe)。

(2)檢查

取本品2.0g,加水20ml溶解后，加硝酸3滴，緩緩煮沸5min,放冷，加

水稀釋使成45mL加硫鼠酸鍍?nèi)芤?30-100)3ml,搖勻，如顯色，與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶

液2.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深(0.001%)。

四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告書寫要求

樣品名稱來源批號

數(shù)據(jù)記錄

檢查項(xiàng)目現(xiàn)象及數(shù)據(jù)結(jié)果

五、注意事項(xiàng)

1、納氏比色管的選擇與洗滌

比色或比濁操作，一般均在納氏比色管中進(jìn)行，因此在選用比色管時(shí)，必須

注意使樣品與標(biāo)準(zhǔn)管的體積相等，玻璃色質(zhì)一致，最好不帶任何顏色，管上的刻

度均勻，如有差別，不得大于2mm。納氏比色管用后應(yīng)立即沖洗，比色管洗滌時(shí)避

免用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁劃出條痕影響比色或比濁。

2、平行操作原則

進(jìn)行比色、比濁檢查時(shí)，樣品溶液與對照溶液的實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)盡可能一致，嚴(yán)

格按照操作步驟平行操作，按規(guī)定順序加入試劑。比色、比濁前可利用手腕轉(zhuǎn)動(dòng)

360°的旋搖使比色管內(nèi)試劑充分混勻。比色方法一般是將兩管同置于白色背景

上，從側(cè)面觀察；比濁方法是將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下地觀察。

3、實(shí)驗(yàn)中應(yīng)準(zhǔn)確選用量具，雜質(zhì)檢查中允許的誤差為±10%,量筒的絕對

誤差為1ml,刻度吸管的絕對誤差為0.01?0.1ml,在實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)根據(jù)樣品、標(biāo)

準(zhǔn)液的取用量正確選用量器。例如，取標(biāo)準(zhǔn)液2ml應(yīng)選擇刻度吸管或移液管吸取

標(biāo)準(zhǔn)液。取樣品2g,允許的誤差為0.2g,可選用稱量精度為0.1g的普通天平。

4、進(jìn)行鐵鹽檢查時(shí)，采用硝酸將Fe?+氧化為Fe3+,標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)與樣品液同法

操作。樣品液加硝酸煮沸時(shí)，應(yīng)注意防止暴沸，必要時(shí)補(bǔ)充適量水。

六、思考題

1、比色、比濁操作中應(yīng)注意什么原則？

2、進(jìn)行葡萄糖的鐵鹽檢查時(shí)，在加入顯色劑之前應(yīng)如何操作?為什么？

3、各雜質(zhì)的雜質(zhì)限量計(jì)算

實(shí)驗(yàn)二、葡萄糖注射液的質(zhì)量檢查

一、目的要求

1、掌握葡萄糖注射液的鑒別原理及方法。

2、葡萄糖注射液中特殊雜質(zhì)檢查原理及方法。

3、熟練使用旋光儀，掌握旋光法測定葡萄糖含量的操作并能進(jìn)行有關(guān)計(jì)算。

二、實(shí)驗(yàn)原理

（-）鑒別

葡萄糖分子中含有皴基，具還原性，能還原堿性酒石酸銅試液（斐林試液）生成

氧化亞銅紅色沉淀。

CH2OHCH20H

葡萄糖Fehling試劑葡萄糖酸

CU2(OH)2Cu2Oj+H2O

紅色)

（二）葡萄糖注射液中5-羥甲基糠醛的檢查

采用紫外分光光度法檢查5-羥甲基糠醛的含量。利用5-羥甲基糠醛在284nm

波長處有最大吸收。本品每100ml中含1.0g葡萄糖的水溶液在284nm波長處的

吸收度不得大于0.32o

（三）含量測定

葡萄糖采用旋光法測定其含量。根據(jù)測得供試品的旋光度與2.0852相乘，

計(jì)算出葡萄糖在供試品中的百分比濃度和標(biāo)示量的百分比。

三、試劑與器材

1、材料

葡萄糖注射液（規(guī)格20ml:10g）o

2、試劑

（1）堿性酒石酸銅試液：

①取硫酸銅結(jié)晶6.93g,加水使溶解成100mlo

②取酒石酸鉀鈉結(jié)晶34.6g與氫氧化鈉10g,加水使溶解成100mlo

用時(shí)將兩液等量混合，即得。

（2）氨試液：取濃氨溶液400ml,加水使成1000ml,即得。

3、器材

刻度吸管（2ml2支）；

容量瓶（100ml2個(gè)，或100ml1個(gè)、50ml1個(gè)）；

移液管（20ml1支，或10ml1支）；

試管（25ml2支）；

試劑瓶（250ml4個(gè)）；

水浴，紫外一可見分光光度儀，旋光儀。

四、實(shí)驗(yàn)步驟

（一）性狀

觀察葡萄糖注射液的性狀，本品為無色或幾乎無色的澄明液體；味甜。

（二）鑒別

取本品，緩緩滴入微溫的堿性酒石酸銅試液中，即生成氧化亞銅的紅色沉淀。

（三）5-羥甲基糠醛的檢查

1、測定液的配制：

①100ml容量瓶：

精密量取本品適量（約相當(dāng)于葡萄糖L0g,即精密量取本品2ml）置100ml容量

瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

②50ml容量瓶：

精密量取本品適量（約相當(dāng)于葡萄糖0.5g,即密量取本品1ml）置50ml容

量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2、測定：取配制的測定液盛入1cm厚的石英池中，置預(yù)先校正好的紫外分

光光度計(jì)的試樣室中，以水為空白，在284nm波長處測定其吸收度，重復(fù)三次，

取其平均值，《中國藥典》2005規(guī)定，其吸收度不得大于0.32。

（四）含量測定

《中國藥典》2010規(guī)定，本品含葡萄糖（C6Hl2。6?一0）應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%~

105.0%o

1、測定液的配制：

①100ml容量瓶：

精密量取本品適量（約相當(dāng)于葡萄糖10g,即精密量取本品20ml）,置100ml

容量瓶中，加氨試液0.2ml,用水稀釋至刻度，搖勻，靜置10分鐘，即得。

②50ml容量瓶：

精密量取本品適量（約相當(dāng)于葡萄糖5g,即精密量取本品10ml）,置50ml

容量瓶中，加氨試液0.2ml,用水稀釋至刻度，搖勻，靜置10分鐘，即得。

2、測定：依法測定該溶液的旋光度，與2.0852相乘（測定管長度為1dm）,即

得供試品中含有C6H1206-H20的重量（g）。

3、計(jì)算

10852x122

標(biāo)?---------------W~xl00%

20

五、數(shù)據(jù)記錄及處理

樣品名稱：來源：批號:

現(xiàn)象結(jié)論

（一）性狀

（二）鑒別

（三）5-羥甲基糠醛檢查

讀數(shù)1讀數(shù)2讀數(shù)3

吸收度

平均值

判斷0.32

結(jié)論

（四）含量測定

讀數(shù)1讀數(shù)2讀數(shù)3

旋光度

平均值

含量計(jì)算公式

判斷95.0%~105.0%

結(jié)論

六、注意事項(xiàng)

1、堿性酒石酸銅試液是由堿性酒石酸銅試液I（硫酸銅溶液）