新冠核酸上崗培訓(xùn)試題一、引言新冠病毒核酸檢測(cè)是疫情防控工作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其結(jié)果的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到疫情的早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早隔離、早治療。為確保每一位核酸檢測(cè)工作人員都具備扎實(shí)的理論基礎(chǔ)、規(guī)范的操作技能和高度的責(zé)任心，特制定本培訓(xùn)試題。本試題旨在檢驗(yàn)培訓(xùn)效果，幫助相關(guān)人員查漏補(bǔ)缺，進(jìn)一步提升業(yè)務(wù)能力與專業(yè)素養(yǎng)，為高質(zhì)量完成核酸檢測(cè)任務(wù)奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。二、考試信息*考試對(duì)象：所有擬從事或需復(fù)核新冠病毒核酸檢測(cè)相關(guān)工作的人員。*考試時(shí)間：[具體時(shí)間待定，通常為____分鐘]*考試方式：閉卷筆試。*總分：100分。*合格線：80分及以上為合格。三、試題部分（一）單項(xiàng)選擇題(每題2分，共20分)1.在進(jìn)行新冠病毒核酸檢測(cè)標(biāo)本采集時(shí)，以下哪種防護(hù)用品是必須佩戴的核心防護(hù)裝備？A.普通醫(yī)用口罩B.醫(yī)用外科口罩C.醫(yī)用防護(hù)口罩（N95/KN95及以上）D.棉布口罩2.新冠病毒核酸檢測(cè)的主要靶基因不包括以下哪一項(xiàng)？A.ORF1abB.N基因C.E基因D.S基因3.關(guān)于標(biāo)本采集管的選擇，下列說法正確的是？A.應(yīng)使用無RNA酶的一次性密閉采樣管B.可使用普通離心管代替專用采樣管C.采樣管內(nèi)無需添加保存液D.采樣后無需旋緊管蓋，以便后續(xù)操作4.標(biāo)本在生物安全柜內(nèi)開蓋處理時(shí)，操作人員的首要注意事項(xiàng)是？A.快速操作以節(jié)省時(shí)間B.確保氣流方向正確且穩(wěn)定C.先處理復(fù)雜標(biāo)本D.邊操作邊記錄數(shù)據(jù)5.核酸提取過程中，以下哪項(xiàng)操作最可能導(dǎo)致樣本間的交叉污染？A.嚴(yán)格按照試劑說明書加樣B.不同樣本使用同一把加樣槍且未更換吸頭C.在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作D.提取完成后及時(shí)封閉反應(yīng)管6.實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應(yīng)體系中，通常不包含以下哪種成分？A.引物和探針B.RNA依賴的DNA聚合酶C.脫氧核糖核苷酸（dNTPs）D.逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑7.在結(jié)果判讀時(shí)，若某樣本的ORF1ab基因Ct值<35，N基因Ct值>40，其他內(nèi)參正常，該結(jié)果應(yīng)判定為？A.陽性B.陰性C.無效，需重新檢測(cè)D.不確定，需復(fù)核8.實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療廢物處理，下列哪項(xiàng)不符合規(guī)范要求？A.感染性廢物必須裝入專用黃色醫(yī)療垃圾袋B.垃圾袋需雙層包裝并有效封口C.廢物轉(zhuǎn)運(yùn)前需進(jìn)行消毒處理D.可將少量生活垃圾混入醫(yī)療廢物9.個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）的穿脫順序，以下哪項(xiàng)是正確的？A.穿：防護(hù)服→口罩→護(hù)目鏡/面屏→手套B.脫：手套→護(hù)目鏡/面屏→防護(hù)服→口罩C.穿：口罩→帽子→防護(hù)服→手套→護(hù)目鏡/面屏D.脫：防護(hù)服→手套→護(hù)目鏡/面屏→口罩10.當(dāng)實(shí)驗(yàn)室發(fā)生少量標(biāo)本溢灑時(shí)，正確的處理流程首先是？A.立即用紙巾覆蓋溢灑物B.報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人C.撤離實(shí)驗(yàn)室所有人員D.用清水沖洗溢灑區(qū)域（二）多項(xiàng)選擇題(每題3分，共15分，多選、少選、錯(cuò)選均不得分)1.新冠病毒核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室分區(qū)，通常包括以下哪些區(qū)域？A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.結(jié)果分析區(qū)E.辦公區(qū)2.關(guān)于新冠病毒核酸檢測(cè)標(biāo)本的運(yùn)輸，以下哪些說法是正確的？A.標(biāo)本應(yīng)在規(guī)定條件下運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融B.運(yùn)輸前需對(duì)標(biāo)本容器進(jìn)行嚴(yán)格密封和消毒C.可與普通貨物混裝運(yùn)輸，但需做好標(biāo)記D.運(yùn)輸過程中需有詳細(xì)的交接記錄E.運(yùn)輸人員無需特殊防護(hù)3.影響實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素可能包括？A.標(biāo)本采集不當(dāng)或保存運(yùn)輸條件不佳B.試劑質(zhì)量不合格或已過有效期C.儀器設(shè)備校準(zhǔn)不及時(shí)D.操作人員技能水平和責(zé)任心E.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度失控4.實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)的核心要素包括？A.風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與管理B.安全設(shè)備與個(gè)體防護(hù)裝備C.規(guī)范的操作規(guī)程D.人員培訓(xùn)與資質(zhì)認(rèn)定E.應(yīng)急預(yù)案與演練5.以下哪些情況可能導(dǎo)致核酸檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陰性？A.采集樣本時(shí)未取到足夠的靶細(xì)胞B.樣本采集后未及時(shí)送檢或保存不當(dāng)導(dǎo)致RNA降解C.擴(kuò)增反應(yīng)體系中探針濃度過高D.病毒變異導(dǎo)致引物探針結(jié)合位點(diǎn)突變E.檢測(cè)前樣本中病毒載量極低（三）判斷題(每題1分，共10分，正確的打√，錯(cuò)誤的打×)1.新冠病毒核酸檢測(cè)標(biāo)本采集后，應(yīng)盡快送檢，如不能及時(shí)送檢，可在室溫下放置不超過24小時(shí)。（）2.生物安全柜在使用前無需進(jìn)行風(fēng)速和負(fù)壓檢測(cè)，只要開啟即可使用。（）3.所有進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室的人員必須嚴(yán)格遵守單向流動(dòng)原則，不得隨意跨區(qū)走動(dòng)。（）4.加樣槍使用完畢后，應(yīng)調(diào)至最大量程并豎直放置。（）5.陽性對(duì)照品的Ct值越小，說明其病毒載量越低。（）6.實(shí)驗(yàn)室清潔消毒時(shí)，對(duì)于物體表面，含氯消毒劑的常用有效氯濃度為500mg/L。（）7.若內(nèi)參基因未檢出，提示本次檢測(cè)可能失敗，樣本需重新采集和檢測(cè)。（）8.操作人員在實(shí)驗(yàn)過程中如不慎皮膚接觸到標(biāo)本，應(yīng)立即用75%酒精擦拭消毒，再用清水沖洗。（）9.核酸檢測(cè)報(bào)告一旦發(fā)出，無論何種原因均不得修改或重新出具。（）10.定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員進(jìn)行技能考核和生物安全培訓(xùn)是保證檢測(cè)質(zhì)量的重要措施。（）（四）簡(jiǎn)答題(共45分)1.請(qǐng)簡(jiǎn)述新冠病毒核酸檢測(cè)中，從標(biāo)本接收至報(bào)告發(fā)出整個(gè)流程的關(guān)鍵質(zhì)量控制點(diǎn)。（10分）2.在個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）穿戴過程中，有哪些關(guān)鍵步驟需要特別注意以確保防護(hù)效果？（8分）3.請(qǐng)?jiān)敿?xì)描述實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)中，“無Ct值”或“Ct值異常偏高”可能的原因及相應(yīng)的處理措施。（12分）4.結(jié)合實(shí)際工作，請(qǐng)闡述如何有效預(yù)防和控制新冠病毒核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的污染問題（至少列舉5點(diǎn)）。（8分）5.當(dāng)你負(fù)責(zé)的檢測(cè)批次中出現(xiàn)一例“陽性”結(jié)果樣本時(shí)，作為操作人員，你的后續(xù)處理流程是什么？（7分）四、參考答案與評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（此部分供考官使用，考生作答時(shí)無需考慮）（一）單項(xiàng)選擇題1.C2.D3.A4.B5.B6.D7.D8.D9.C10.A（二）多項(xiàng)選擇題1.ABCD2.ABD3.ABCDE4.ABCDE5.ABDE（三）判斷題1.×2.×3.√4.√5.×6.√7.√8.√9.×10.√（四）簡(jiǎn)答題(根據(jù)回答的完整性、準(zhǔn)確性和邏輯性酌情給分)1.新冠病毒核酸檢測(cè)全流程關(guān)鍵質(zhì)量控制點(diǎn)（10分）*標(biāo)本接收與驗(yàn)收：核對(duì)信息（姓名、編號(hào)、類型等）是否完整準(zhǔn)確；檢查標(biāo)本管是否破損、滲漏，拭子是否脫落；確認(rèn)標(biāo)本量是否符合要求；記錄接收時(shí)間和狀態(tài)。（2分）*標(biāo)本處理與核酸提?。簢?yán)格分區(qū)操作，防止交叉污染；正確使用PPE；規(guī)范進(jìn)行樣本渦旋、離心（如需要）；核酸提取試劑的有效性；加樣操作的準(zhǔn)確性和重復(fù)性；提取產(chǎn)物的保存條件和時(shí)間。（3分）*RT-PCR擴(kuò)增：反應(yīng)體系配制的準(zhǔn)確性（試劑、樣本量）；加樣后的密封是否完好；擴(kuò)增儀的校準(zhǔn)與狀態(tài)確認(rèn)；反應(yīng)程序設(shè)置是否與試劑要求一致；擴(kuò)增過程中避免中斷和異常溫度波動(dòng)。（2分）*結(jié)果判讀與報(bào)告：嚴(yán)格按照試劑說明書的標(biāo)準(zhǔn)判讀；內(nèi)參、陰陽性對(duì)照結(jié)果是否正常；對(duì)可疑結(jié)果（如單靶標(biāo)陽性、Ct值處于灰區(qū)等）的復(fù)核流程；報(bào)告信息的準(zhǔn)確性、完整性和及時(shí)性；報(bào)告審核與簽發(fā)制度。（2分）*實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與生物安全：各區(qū)域清潔消毒的有效性；醫(yī)療廢物的規(guī)范處理；人員進(jìn)出和操作行為的規(guī)范性。（1分）2.PPE穿戴關(guān)鍵注意事項(xiàng)（8分）*口罩：選擇合適型號(hào)，確保完全遮蓋口鼻和下巴，壓緊鼻夾至貼合面部，進(jìn)行氣密性檢查（如吸氣時(shí)口罩塌陷，呼氣時(shí)無漏氣）。（2分）*護(hù)目鏡/面屏：確保其能完全遮蓋眼部及周圍皮膚，或覆蓋整個(gè)面部，與口罩邊緣緊密貼合，固定穩(wěn)妥，防止滑落。（1.5分）*防護(hù)服：檢查有無破損，穿戴時(shí)確保完全遮蓋軀干、四肢，領(lǐng)口、袖口、腳踝處收緊，拉鏈拉至頂部并密封（如有）。（2分）*手套：選擇合適尺碼，確保覆蓋防護(hù)服袖口；穿戴后檢查有無破損；進(jìn)行操作前可進(jìn)行檢漏測(cè)試（如充氣檢查）。（1.5分）*整體檢查：穿戴完畢后，在鏡子前或由他人協(xié)助檢查，確保所有防護(hù)部位均已覆蓋，無暴露，活動(dòng)自如且不影響操作靈敏度。（1分）3.“無Ct值”或“Ct值異常偏高”的原因及處理措施（12分）*原因：*樣本問題：樣本中無靶核酸（真陰性）；樣本采集量不足、質(zhì)量差（如唾液代替鼻咽拭子）；樣本保存不當(dāng)導(dǎo)致RNA嚴(yán)重降解；樣本中存在PCR抑制物（如血紅蛋白、粘液、藥物殘留等）。（3分）*核酸提取問題：提取試劑失效或操作不當(dāng)（如磁珠未充分洗脫、離心參數(shù)錯(cuò)誤）；RNA模板丟失；提取過程中發(fā)生污染導(dǎo)致抑制。（2分）*反應(yīng)體系配制問題：引物探針設(shè)計(jì)不合理或失效；酶活性降低或失活（如反復(fù)凍融、儲(chǔ)存不當(dāng)）；dNTPs、Mg2+等關(guān)鍵成分濃度異常；加樣錯(cuò)誤或漏加（如漏加模板、酶）；反應(yīng)管未密封好導(dǎo)致蒸發(fā)。（3分）*擴(kuò)增儀問題：溫度模塊故障導(dǎo)致溫度不準(zhǔn)確或均一性差；光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)故障；反應(yīng)程序設(shè)置錯(cuò)誤（如退火溫度、循環(huán)數(shù)）。（2分）*處理措施：*首先檢查陰陽性對(duì)照、內(nèi)參基因是否正常。若對(duì)照和內(nèi)參均異常，提示體系或儀器問題。（1分）*重新核對(duì)反應(yīng)體系配制過程，更換新的試劑、酶等關(guān)鍵組分，重新配制反應(yīng)體系并進(jìn)行擴(kuò)增。（0.5分）*若懷疑樣本問題，重新提取核酸；若樣本抑制，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋后重新擴(kuò)增或采用其他提取方法去除抑制物；必要時(shí)聯(lián)系重新采集樣本。（0.5分）*檢查并校準(zhǔn)擴(kuò)增儀，確保其運(yùn)行正常。（0.5分）*對(duì)于單靶標(biāo)無Ct值或偏高，結(jié)合其他靶標(biāo)情況，按試劑說明書進(jìn)行復(fù)核或判讀。（0.5分）4.預(yù)防和控制實(shí)驗(yàn)室污染的措施（8分，每列舉一點(diǎn)并適當(dāng)闡述給1.5-2分，總分不超過8分）*嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)室分區(qū)與單向流：明確劃分試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)及產(chǎn)物分析區(qū)（如適用），各區(qū)物理隔離，設(shè)備、物品專用，人員嚴(yán)格按照單一方向流動(dòng)，避免交叉。*規(guī)范操作流程：嚴(yán)格執(zhí)行SOP，包括加樣、提取、擴(kuò)增等各環(huán)節(jié)；使用帶濾芯吸頭，避免氣溶膠產(chǎn)生；不同樣本加樣前更換吸頭，避免交叉污染。*定期清潔與消毒：每日實(shí)驗(yàn)前后及實(shí)驗(yàn)中對(duì)工作臺(tái)面、生物安全柜、移液器等進(jìn)行清潔消毒（如75%酒精、有效氯消毒劑）；定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室空氣進(jìn)行消毒（如紫外燈照射）。*設(shè)立陰陽性對(duì)照和質(zhì)控品：每批次實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性對(duì)照（如無RNA酶水、陰性標(biāo)本）、陽性對(duì)照和內(nèi)參對(duì)照，監(jiān)控整個(gè)檢測(cè)過程是否受到污染。*產(chǎn)物管理：擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)在指定區(qū)域內(nèi)操作，避免帶入上游區(qū)域；使用一次性密閉離心管和反應(yīng)管；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，產(chǎn)物及相關(guān)耗材立即高壓滅菌或按感染性廢物處理。*人員培訓(xùn)與意識(shí)提升：加強(qiáng)對(duì)操作人員的污染防控知識(shí)和技能培訓(xùn)，提高其責(zé)任心和操作規(guī)范性，養(yǎng)成良好實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。*定期環(huán)境監(jiān)測(cè)：對(duì)各區(qū)域進(jìn)行環(huán)境樣本（如臺(tái)面、地面、空氣）核酸檢測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在污染。*儀器設(shè)備維護(hù)：定期對(duì)生物安全柜、PCR儀、離心機(jī)等進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)，確保其正常運(yùn)行和防護(hù)效果。5.陽性結(jié)果樣本后續(xù)處理流程（7分）*立即復(fù)核原始數(shù)據(jù)與實(shí)驗(yàn)記錄：確認(rèn)樣本信息、檢測(cè)過程、儀器狀態(tài)、對(duì)照結(jié)果是否正常，排除操作失誤或儀器故障導(dǎo)致的假陽性。（1.5分）*啟動(dòng)復(fù)檢程序：使用原提取核酸，更換另一批次或不同廠家的檢測(cè)試劑，由另一名有資質(zhì)的操作人員在不同的PCR儀上進(jìn)行復(fù)核檢測(cè)。（2分）*若復(fù)檢結(jié)果仍為陽性：立即上報(bào)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，并按規(guī)定流程向相關(guān)疫情防控部門和送檢單位報(bào)告。（1.5分）*樣本的保存與追溯：將原始標(biāo)本和提取的核酸妥善保存（如-70℃或