腫瘤代謝異常的基因編輯糾正策略演講人01腫瘤代謝異常的基因編輯糾正策略02引言：腫瘤代謝異常作為治療靶點(diǎn)的科學(xué)內(nèi)涵與臨床意義03腫瘤代謝異常的關(guān)鍵特征與分子基礎(chǔ)04基因編輯技術(shù)的進(jìn)展與腫瘤代謝干預(yù)的適用性05針對(duì)腫瘤代謝異常的基因編輯糾正策略06臨床轉(zhuǎn)化挑戰(zhàn)與未來(lái)方向07總結(jié)與展望目錄01腫瘤代謝異常的基因編輯糾正策略02引言：腫瘤代謝異常作為治療靶點(diǎn)的科學(xué)內(nèi)涵與臨床意義引言：腫瘤代謝異常作為治療靶點(diǎn)的科學(xué)內(nèi)涵與臨床意義腫瘤細(xì)胞的代謝重編程是繼基因組不穩(wěn)定、凋亡逃逸、無(wú)限增殖后的“第六大hallmark”，其核心特征是通過(guò)異常的代謝途徑滿足快速增殖的能量需求、生物合成前體供應(yīng)及氧化還原平衡。與正常細(xì)胞依賴氧化磷酸化（OXPHOS）不同，腫瘤細(xì)胞即使在有氧條件下也優(yōu)先通過(guò)糖酵解獲取能量（Warburg效應(yīng)），同時(shí)增強(qiáng)谷氨酰胺分解、脂質(zhì)合成及氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)等途徑，形成獨(dú)特的“代謝依賴性”。這種代謝異常不僅是腫瘤發(fā)生發(fā)展的驅(qū)動(dòng)因素，更因其“腫瘤特異性”（正常細(xì)胞對(duì)代謝穩(wěn)態(tài)的調(diào)控能力更強(qiáng)）成為極具潛力的治療靶點(diǎn)。近年來(lái)，隨著基因編輯技術(shù)的突破，尤其是CRISPR-Cas9系統(tǒng)的成熟，我們得以從“基因根源”糾正代謝異常相關(guān)的分子缺陷，而非僅抑制下游代謝酶活性。作為腫瘤代謝領(lǐng)域的研究者，我深刻體會(huì)到：基因編輯不僅是一種工具，引言：腫瘤代謝異常作為治療靶點(diǎn)的科學(xué)內(nèi)涵與臨床意義更是連接“基因突變-代謝紊亂-表型異?！钡摹胺肿邮中g(shù)刀”，其精準(zhǔn)性和可設(shè)計(jì)性為破解腫瘤代謝的“不可成藥性”提供了全新視角。本文將從腫瘤代謝異常的分子基礎(chǔ)、基因編輯技術(shù)進(jìn)展、針對(duì)性糾正策略及臨床轉(zhuǎn)化挑戰(zhàn)四個(gè)維度，系統(tǒng)闡述該領(lǐng)域的最新進(jìn)展與未來(lái)方向。03腫瘤代謝異常的關(guān)鍵特征與分子基礎(chǔ)1糖代謝重編程：Warburg效應(yīng)及其延伸機(jī)制Warburg效應(yīng)是腫瘤糖代謝最經(jīng)典的異常，表現(xiàn)為葡萄糖攝取增加、糖酵解增強(qiáng)、乳酸大量分泌，即使氧氣充足也不充分進(jìn)入TCA循環(huán)。其核心機(jī)制包括：-關(guān)鍵酶的過(guò)表達(dá)與激活：己糖激酶2（HK2）與線粒體外膜結(jié)合，避免線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（MPTP）開(kāi)放誘導(dǎo)的凋亡；磷酸果糖激酶-1（PFK1）被果糖-2,6-二磷酸（F2,6-BP）激活，后者由磷酸果糖激酶-2/果糖二磷酸酶-3（PFKFB3）調(diào)控，在腫瘤中常高表達(dá)；丙酮酸激酶M2（PKM2）通過(guò)二聚體形式抑制糖酵解流向TCA循環(huán)，促進(jìn)核轉(zhuǎn)位調(diào)控基因表達(dá)，形成“代謝-表型”正反饋。-乳酸穿梭與免疫微環(huán)境重塑：?jiǎn)昔人徂D(zhuǎn)運(yùn)體4（MCT4）將乳酸從腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)至胞外，被間質(zhì)細(xì)胞或MCT1攝入后氧化為丙酮酸進(jìn)入TCA循環(huán)（“逆向Warburg效應(yīng)”），同時(shí)乳酸通過(guò)酸化微環(huán)境抑制T細(xì)胞浸潤(rùn)、誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化，形成免疫抑制niche。2谷氨酰胺代謝依賴：替代碳源與氮源供應(yīng)谷氨酰胺是腫瘤細(xì)胞除葡萄糖外最重要的“燃料”，其代謝不僅提供TCA循環(huán)中間體（α-酮戊二酸，α-KG），還通過(guò)谷氨酰胺分解途徑生成谷胱甘肽（GSH）以抵抗氧化應(yīng)激，以及天冬氨酸、嘌呤/嘧啶核苷酸等生物合成前體。關(guān)鍵機(jī)制包括：01-谷氨酰胺酶（GLS）的過(guò)表達(dá)：GLS催化谷氨酰胺轉(zhuǎn)化為谷氨酸，是限速步驟；在MYC、KRAS等癌基因驅(qū)動(dòng)的腫瘤（如肺癌、胰腺癌）中，GLS表達(dá)顯著上調(diào)，敲除GLS可導(dǎo)致TCA循環(huán)“斷流”和細(xì)胞死亡。02-IDH1/2突變與代謝分流：異檸檬酸脫氫酶1/2（IDH1/2）突變使酶獲得催化α-KG生成D-2-羥基戊二酸（D-2HG）的“新活性”，后者競(jìng)爭(zhēng)性抑制α-KG依賴的雙加氧酶（如TET家族、組蛋白去甲基化酶），導(dǎo)致DNA甲基化異常和表觀遺傳沉默，促進(jìn)腫瘤發(fā)生。033脂質(zhì)代謝異常：合成與分解的失衡腫瘤細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的需求遠(yuǎn)超正常細(xì)胞，既需要磷脂構(gòu)成細(xì)胞膜，也需要膽固醇合成類固醇激素或信號(hào)分子。其代謝特征表現(xiàn)為：-從頭脂質(zhì)合成（DNL）增強(qiáng)：ATP-檸檬酸裂解酶（ACLY）將線粒體產(chǎn)生的檸檬酸轉(zhuǎn)運(yùn)至胞質(zhì)裂解為乙酰輔酶A，是DNL的限速步驟；乙酰輔酶A羧化酶（ACC）和脂肪酸合酶（FASN）催化脂肪酸合成，在乳腺癌、前列腺癌中高表達(dá)，與不良預(yù)后相關(guān)。-脂質(zhì)分解與自噬激活：在營(yíng)養(yǎng)缺乏時(shí)，腫瘤細(xì)胞通過(guò)激素敏感脂肪酶（HSL）和自噬途徑分解脂滴為游離脂肪酸，通過(guò)β-氧化（FAO）產(chǎn)生ATP；FAO增強(qiáng)與腫瘤干細(xì)胞（CSC）表型、化療耐藥密切相關(guān)，例如卵巢癌CSC通過(guò)FAO維持線粒體膜電位，抵抗順鉑誘導(dǎo)的凋亡。4氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝失衡：營(yíng)養(yǎng)感知與信號(hào)調(diào)控氨基酸不僅是蛋白質(zhì)合成的原料，更是mTOR、HIF-1α等信號(hào)通路的調(diào)控因子。關(guān)鍵異常包括：-轉(zhuǎn)運(yùn)體過(guò)表達(dá)：中性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體LAT1（SLC7A5）和谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)體ASCT2（SLC1A5）在腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)，分別負(fù)責(zé)大中性氨基酸（如亮氨酸）和谷氨酰胺的攝取；亮氨酸作為mTORC1的激活劑，通過(guò)RagGTPase復(fù)合物促進(jìn)mTORC1轉(zhuǎn)溶酶體，驅(qū)動(dòng)蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞增殖。-氨基酸代謝酶的突變：如精氨酸琥珀酸合成酶1（ASS1）缺失在黑色素瘤、肝癌中常見(jiàn)，導(dǎo)致精氨酸依賴性（“精氨酸饑餓療法”有效）；色氨酸2,3-雙加氧酶（TDO）和吲胺胺2,3-雙加氧酶（IDO）催化色氨酸降解為犬尿氨酸，通過(guò)激活芳烴受體（AhR）抑制T細(xì)胞功能，形成免疫逃逸。04基因編輯技術(shù)的進(jìn)展與腫瘤代謝干預(yù)的適用性基因編輯技術(shù)的進(jìn)展與腫瘤代謝干預(yù)的適用性3.1第一代基因編輯工具：ZFNs與TALENs的局限與啟示鋅指核酸酶（ZFNs）和轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶（TALENs）通過(guò)蛋白質(zhì)模塊（鋅指蛋白或TALE）識(shí)別特定DNA序列，融合FokI核酸酶結(jié)構(gòu)域誘導(dǎo)DSB，再通過(guò)NHEJ或HDR修復(fù)實(shí)現(xiàn)基因編輯。其優(yōu)勢(shì)在于靶向精度較高，但存在明顯缺陷：-蛋白質(zhì)工程復(fù)雜：ZFNs的鋅指單元間存在“相互干擾”，需篩選最優(yōu)組合；TALENs雖識(shí)別單元簡(jiǎn)單，但單體過(guò)大（>3kb），病毒載體遞送效率低。-應(yīng)用場(chǎng)景受限：在腫瘤代謝干預(yù)中，ZFNs/TALENs可敲除代謝酶基因（如HK2），但DSB修復(fù)導(dǎo)致的NHEJ突變可能產(chǎn)生功能獲得性突變（如PKM2激活），反而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。基因編輯技術(shù)的進(jìn)展與腫瘤代謝干預(yù)的適用性3.2第二代基因編輯工具：CRISPR-Cas系統(tǒng)的革命性突破CRISPR-Cas系統(tǒng)（以Cas9為代表）通過(guò)向?qū)NA（gRNA）識(shí)別靶序列，Cas9蛋白切割DSB，實(shí)現(xiàn)了“設(shè)計(jì)-編輯”的簡(jiǎn)化與高效化。其在腫瘤代謝干預(yù)中的優(yōu)勢(shì)包括：-多靶點(diǎn)編輯能力：通過(guò)多個(gè)gRNA同時(shí)編輯多個(gè)代謝相關(guān)基因（如同時(shí)敲除GLS和PKM2），模擬“代謝協(xié)同抑制”效應(yīng)；-條件性編輯：利用腫瘤特異性啟動(dòng)子（如hTERT、Survivin）調(diào)控Cas9或gRNA表達(dá)，實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞特異性編輯，降低對(duì)正常代謝的干擾；-基因糾正而非單純敲除：通過(guò)HDR途徑糾正代謝酶的失活突變（如IDH1R132H突變），恢復(fù)正常代謝功能。3第三代基因編輯工具：精準(zhǔn)性與安全性的優(yōu)化為克服CRISPR-Cas9的脫靶效應(yīng)和DSB相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)，新一代基因編輯工具應(yīng)運(yùn)而生：-堿基編輯（BaseEditing,BE）：融合失活Cas9（nCas9）和胞嘧啶脫氨酶（如APOBEC1），實(shí)現(xiàn)C?G→T?A或A?T→G?C的堿基轉(zhuǎn)換，無(wú)需DSB和供體模板。例如，糾正IDH1R132H突變（CGT→CAT）可通過(guò)胞嘧啶編輯實(shí)現(xiàn)，且無(wú)DSB相關(guān)的染色體易位風(fēng)險(xiǎn)。-先導(dǎo)編輯（PrimeEditing,PE）：由nCas9-逆轉(zhuǎn)錄酶融合蛋白和“逆轉(zhuǎn)錄模板gRNA”（pegRNA）組成，可實(shí)現(xiàn)所有12種單堿基轉(zhuǎn)換、小片段插入/缺失（≤44bp）及“精準(zhǔn)”基因校正。例如，修復(fù)PKM2外顯子9的剪接位點(diǎn)突變，恢復(fù)PKM1同工素表達(dá)，逆轉(zhuǎn)Warburg效應(yīng)。3第三代基因編輯工具：精準(zhǔn)性與安全性的優(yōu)化-表觀遺傳編輯（EpigeneticEditing）：利用失活Cas9（dCas9）或dCas9效應(yīng)域融合（如DNMT3A、TET1、p300），實(shí)現(xiàn)對(duì)代謝基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化或乙?；揎?，調(diào)控基因表達(dá)而不改變DNA序列。例如，通過(guò)dCas9-DNMT3A沉默HK2啟動(dòng)子，抑制糖酵解活性。4遞送系統(tǒng)：體內(nèi)靶向與腫瘤特異性表達(dá)的瓶頸基因編輯工具的遞送是臨床轉(zhuǎn)化的核心挑戰(zhàn)，目前主要包括：-病毒載體：腺相關(guān)病毒（AAV）具有低免疫原性、長(zhǎng)期表達(dá)優(yōu)勢(shì)，但容量有限（<4.8kb），難以裝載Cas9（~4.2kb）+gRNA；慢病毒可整合至宿主基因組，存在插入突變風(fēng)險(xiǎn)，適合體外編輯后細(xì)胞回輸（如CAR-T細(xì)胞代謝重編程）。-非病毒載體：脂質(zhì)納米顆粒（LNP）可封裝mRNA（如Cas9mRNA）或sgRNA，實(shí)現(xiàn)體內(nèi)遞送，2020年FDA批準(zhǔn)的CRISPR療法Casgevy即采用LNP遞送；陽(yáng)離子聚合物（如PEI）和細(xì)胞外囊泡（EVs）也具有潛力，但靶向性和轉(zhuǎn)染效率仍需優(yōu)化。-腫瘤靶向策略：通過(guò)修飾載體表面配體（如葉酸、RGD肽）靶向腫瘤高表達(dá)的受體（如葉酸受體α、整合素αvβ3），或利用腫瘤微環(huán)境響應(yīng)性元件（如pH敏感、基質(zhì)金屬蛋白酶可切割linker），實(shí)現(xiàn)編輯工具的“定點(diǎn)釋放”。05針對(duì)腫瘤代謝異常的基因編輯糾正策略針對(duì)腫瘤代謝異常的基因編輯糾正策略4.1糖代謝異常的編輯策略：從“抑制酵解”到“恢復(fù)OXPHOS”1.1靶向關(guān)鍵糖酵解酶的敲除或抑制-HK2沉默：HK2是糖酵解第一步限速酶，且通過(guò)結(jié)合線粒體抗凋亡蛋白（如VDAC）抑制凋亡。設(shè)計(jì)gRNA靶向HK2啟動(dòng)子或外顯子，通過(guò)CRISPRi（dCas9-KRAB）或CRISPRko（Cas9敲除）抑制其表達(dá)。例如，在肝癌模型中，AAV遞送的sgRNA-Cas9敲除HK2后，腫瘤細(xì)胞葡萄糖攝取減少50%，乳酸分泌下降70%，裸鼠移植瘤體積縮小60%。-PKM2校正：PKM2存在兩種剪接異構(gòu)體，PKM1（高活性，促進(jìn)TCA循環(huán)）和PKM2（低活性，積累中間體用于生物合成）。通過(guò)先導(dǎo)編輯修復(fù)PKM2外顯子9的剪接位點(diǎn)突變（如內(nèi)含子9的GT→GA），使PKM2mRNA正確剪接為PKM1，可逆轉(zhuǎn)Warburg效應(yīng)。在肺癌A549細(xì)胞中，先導(dǎo)編輯校正后，細(xì)胞耗氧率（OCR）增加2倍，細(xì)胞增殖抑制率達(dá)80%。1.2激活糖異生與TCA循環(huán)腫瘤細(xì)胞常通過(guò)抑制糖異生關(guān)鍵酶（如PEPCK、G6Pase）阻斷葡萄糖逆向生成，促進(jìn)糖酵解流向。利用CRISPRa（dCas9-p300或dCas9-VPR）激活PEPCK（PCK1）或G6Pase（G6PC）表達(dá)，可促進(jìn)葡萄糖生成糖原或乳酸清除，減少糖酵解中間體供給。在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中，激活PCK1后，細(xì)胞內(nèi)檸檬酸積累，抑制ACLY活性，從頭脂質(zhì)合成減少，干細(xì)胞自我更新能力喪失。2.1GLS基因敲除或表達(dá)下調(diào)GLS是谷氨酰胺代謝的“門戶酶”，在MYC高表達(dá)的腫瘤（如Burkitt淋巴瘤）中，GLS啟動(dòng)子區(qū)域存在E-box元件，可被MYC直接激活。設(shè)計(jì)sgRNA靶向GLS外顯子2-3的高保守區(qū)域，通過(guò)Cas9敲除或CRISPRi下調(diào)表達(dá)，可阻斷谷氨酰胺分解。在體外實(shí)驗(yàn)中，GLS敲除的淋巴瘤細(xì)胞在谷氨酰胺缺乏條件下存活率<20%，而野生型細(xì)胞存活率>80%；體內(nèi)移植瘤模型中，瘤體重量減少65%，且無(wú)顯著脫靶效應(yīng)。2.2IDH1/2突變的基因糾正IDH1R132H和IDH2R172Q是常見(jiàn)的致癌突變，導(dǎo)致D-2HG積累，抑制表觀遺傳調(diào)控酶。利用堿基編輯（BE）將IDH1的CGT（精氨酸）轉(zhuǎn)換為CAT（組氨酸），可恢復(fù)野生型IDH1活性，降解D-2HG。在IDH1突變型膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，BE處理后D-2HG水平下降99%，組蛋白H3K9me3和DNA甲基化水平恢復(fù)正常，細(xì)胞周期阻滯于G1期。目前，針對(duì)IDH1突變的堿基編輯療法已進(jìn)入臨床前研究階段。4.3脂質(zhì)代謝異常的編輯策略：抑制“瘋狂合成”與“分解利用”3.1ACLY/FASN基因敲除ACLY催化檸檬酸轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A，是脂質(zhì)合成的“原料庫(kù)”；FASN是脂肪酸合成的“執(zhí)行酶”。在乳腺癌中，HER2信號(hào)可上調(diào)ACLY表達(dá)，促進(jìn)脂質(zhì)合成。設(shè)計(jì)sgRNA靶向ACLY外顯子14（催化區(qū)域）或FASN外顯子30（β-酮脂酰合酶結(jié)構(gòu)域），通過(guò)Cas9敲除可阻斷脂質(zhì)合成。在HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞中，ACLY敲除后，細(xì)胞內(nèi)乙酰輔酶A減少60%，棕櫚酸合成減少75%，細(xì)胞凋亡增加3倍。3.2CPT1A激活與FAO抑制肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1A（CPT1A）是脂肪酸β-氧化的限速酶，將長(zhǎng)鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體；在肝癌中，CPT1A高表達(dá)通過(guò)FAO產(chǎn)生ATP，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。利用CRISPRa激活CPT1A抑制因子（如SREBP1）或直接設(shè)計(jì)sgRNA靶向CPT1A啟動(dòng)子（通過(guò)CRISPRi抑制表達(dá)），可阻斷FAO。在肝癌模型中，CPT1A敲除后，細(xì)胞內(nèi)脂滴積累，線粒體膜電位下降，轉(zhuǎn)移灶數(shù)量減少50%。4.4氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝的編輯策略：阻斷“營(yíng)養(yǎng)感知”與“免疫逃逸”4.1氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體LAT1/ASCT2敲除LAT1負(fù)責(zé)亮氨酸攝取，是mTORC1激活的關(guān)鍵；ASCT2負(fù)責(zé)谷氨酰胺攝取，是GLS的底物供應(yīng)者。設(shè)計(jì)sgRNA靶向LAT1（SLC7A5）外顯子2或ASCT2（SLC1A5）外顯子1，通過(guò)Cas9敲除可阻斷氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)。在黑色素瘤中，LAT1敲除后，細(xì)胞內(nèi)亮氨酸濃度下降80%，mTORC1活性抑制，蛋白質(zhì)合成減少，細(xì)胞增殖停滯；聯(lián)合PD-1抗體治療，腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8+T細(xì)胞數(shù)量增加2倍，協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)顯著。4.2ASS1基因校正與IDO1抑制ASS1缺失導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞依賴外源精氨酸，可通過(guò)“精氨酸饑餓療法”（如精氨酸脫氨酶）殺傷；但部分腫瘤通過(guò)ASS1啟動(dòng)子甲基化沉默表達(dá)，可通過(guò)表觀遺傳編輯（dCas9-TET1）去甲基化恢復(fù)ASS1表達(dá)。在肝癌中，dCas9-TET1處理后，ASS1mRNA水平增加5倍，細(xì)胞內(nèi)精氨酸濃度恢復(fù)正常，抵抗精氨酸饑餓的能力增強(qiáng)，但聯(lián)合精氨酸脫氨酶后，細(xì)胞死亡率增加70%。對(duì)于IDO1高表達(dá)的腫瘤，通過(guò)CRISPRko敲除IDO1，可減少犬尿氨酸生成，恢復(fù)T細(xì)胞功能，增強(qiáng)免疫治療療效。06臨床轉(zhuǎn)化挑戰(zhàn)與未來(lái)方向1遞送效率與腫瘤靶向性的優(yōu)化當(dāng)前基因編輯工具的遞送存在“效率低、靶向差、毒性大”的問(wèn)題。例如，LNP遞送Cas9mRNA至肝臟的效率可達(dá)40%，但遞送至胰腺、腦等組織效率<10%；AAV遞送雖持久，但可能引發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)（如抗Cas9T細(xì)胞浸潤(rùn)）。未來(lái)方向包括：-開(kāi)發(fā)新型載體：如“智能”響應(yīng)性載體（pH/酶/氧化還原敏感型LNP）、腫瘤細(xì)胞膜偽裝的EVs（利用腫瘤細(xì)胞的同源靶向能力）；-提高編輯特異性：利用高保真Cas9變體（如eSpCas9、SpCas9-HF1）或AI優(yōu)化gRNA設(shè)計(jì)（減少脫靶位點(diǎn)）；-聯(lián)合局部遞送：如瘤內(nèi)注射、動(dòng)脈介入給藥，提高局部藥物濃度，降低全身毒性。2脫靶效應(yīng)與安全性的評(píng)估基因編輯的脫靶效應(yīng)可能導(dǎo)致正常代謝基因突變（如誤敲除肝臟HK2引發(fā)低血糖）或基因組不穩(wěn)定（如染色體大片段缺失）。目前，通過(guò)全基因組測(cè)序（WGS）、GUIDE-seq、CIRCLE-seq等技術(shù)可檢測(cè)脫靶位點(diǎn)，但體內(nèi)長(zhǎng)期安全性仍需驗(yàn)證。例如，在猴子模型中，AAV遞送的CRISPR-Cas9編輯肝臟細(xì)胞后，6個(gè)月內(nèi)未發(fā)現(xiàn)顯著脫靶突變，但部分動(dòng)物出現(xiàn)肝酶輕度升高，提示需優(yōu)化載體設(shè)計(jì)。3耐藥性與代謝代償?shù)膽?yīng)對(duì)04030102腫瘤代謝具有“高度可塑性”，單一靶點(diǎn)編輯可能導(dǎo)致代償性上調(diào)（如敲除GLS后，GS表達(dá)增加，重新合成谷氨酰胺）。應(yīng)對(duì)策略包括：-多靶點(diǎn)協(xié)同編輯：同時(shí)編輯2-3個(gè)關(guān)鍵代謝基因（如GLS+GS、HK2+PKM2），阻斷代償途徑；-聯(lián)合代謝抑制劑：基因編輯聯(lián)合小分子藥物（如CB-839/GLS抑制劑、Orlistat/FASN抑制劑），增強(qiáng)療效；-動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)代謝重編程：通過(guò)代謝組