1、2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體,2002年12月30日，兩場(chǎng)籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號(hào)飛船上舉行，植物細(xì)胞“新人”黃花煙草和革新一號(hào)煙草葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體，動(dòng)物細(xì)胞“新人”是小鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，兩批新人同時(shí)在電融合儀內(nèi)孕育新生命。,“太空婚禮”,這兩場(chǎng)“太空婚禮”實(shí)質(zhì)是哪兩項(xiàng)細(xì)胞工程技術(shù),？,植物體細(xì)胞雜交技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù),雜種細(xì)胞,愈傷組織,雜種植株,植物細(xì)胞A,植物細(xì)胞B,原生質(zhì)體A,原生質(zhì)體B,去壁,原生質(zhì)體融合,植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交,溫故知新,細(xì)胞A,細(xì)胞B,雜交細(xì)胞,滅活的病毒,物理法化學(xué)法,概念：動(dòng)物細(xì)胞融合是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)雜

2、交細(xì)胞的過(guò)程。,特點(diǎn)：融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。,喪失感染活性保留融合活性,一、動(dòng)物細(xì)胞融合,滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面,細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通,細(xì)胞膜連接,細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）,過(guò)程,打破了生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。,其中最有價(jià)值的應(yīng)用是制備單克隆抗體。,意義,應(yīng)用,單克隆抗體的創(chuàng)始人英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒,2、抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？,3、一個(gè)漿細(xì)胞能產(chǎn)生幾種抗體？,漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）,1、什么是抗體？,抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。,復(fù)習(xí)回顧,一種,4、抗體的傳統(tǒng)制備方法？有

3、什么特點(diǎn)？,特定抗原,反復(fù)注射動(dòng)物,從動(dòng)物的血清中分離抗體,產(chǎn)量低、純度低，特異性差,怎樣獲得某種化學(xué)性質(zhì)單一的抗體呢？,?,抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法,Q1：如何才能讓漿細(xì)胞產(chǎn)生大量單一的抗體,一個(gè)漿細(xì)胞,克隆,一群漿細(xì)胞,大量單一抗體,單克隆抗體,將單個(gè)的B淋巴細(xì)胞克隆形成細(xì)胞群，產(chǎn)生只識(shí)別單一抗原的抗體,一個(gè)漿細(xì)胞,Q2：如何才能讓B淋巴細(xì)胞獲得無(wú)限增殖的能力呢？,B淋巴細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞,Q3：雜交瘤細(xì)胞應(yīng)該具有哪些特點(diǎn)？,B淋巴細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞,體外無(wú)限增殖產(chǎn)生大量特定抗體,如何獲得已免疫的B淋巴細(xì)胞？誘導(dǎo)融合后，培養(yǎng)基中可能有幾種細(xì)胞？只考慮兩兩融合，形成的融合細(xì)胞有

4、幾種？用什么方法篩選出雜交瘤細(xì)胞？融合的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的是同一種抗體嗎？如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？,二、單克隆抗體的制備,合作探究,如何獲得已免疫的B淋巴細(xì)胞？,B淋巴細(xì)胞,用特定的抗原注射到動(dòng)物體內(nèi)，刺激機(jī)體產(chǎn)生大量的針對(duì)抗原的B淋巴細(xì)胞，然后從動(dòng)物的免疫器官中獲得B淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)融合后，培養(yǎng)基中可能有幾種細(xì)胞？只考慮兩兩融合，形成的融合細(xì)胞有幾種？,B淋巴細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,融合,多種細(xì)胞,5種,3種,用什么方法篩選出雜交瘤細(xì)胞？,B淋巴細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,融合,多種細(xì)胞,置于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng),用特定的選擇培養(yǎng)基來(lái)篩選，雜交瘤細(xì)胞存活，其他細(xì)胞都死亡,融合的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的是同一

5、種抗體嗎？,B淋巴細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞,融合,多種細(xì)胞,置于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng),多孔細(xì)胞培養(yǎng)板,專一抗體檢驗(yàn)克隆化培養(yǎng),用培養(yǎng)液稀釋,專一抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性,多孔細(xì)胞培養(yǎng)板,注射到小鼠體內(nèi),體外培養(yǎng),單克隆抗體,如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？,特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量大,知識(shí)梳理,將注射入小鼠體內(nèi),細(xì)胞,細(xì)胞,細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞,E,體外培養(yǎng),抗體,抗原,B淋巴,骨髓瘤,融合,具有篩選作用的培養(yǎng)基,雜交瘤,專一抗體檢驗(yàn)克隆化培養(yǎng),產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤,注射到小鼠體內(nèi),單克隆,動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。,第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)

6、生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。,1、用a表示骨髓瘤細(xì)胞，b表示漿細(xì)胞，則細(xì)胞融合過(guò)程中兩次篩選的目的分別為()Aa、aa、ab、bb、ba、aa、abab培養(yǎng)Ba、aa、ab、bb、bab產(chǎn)生特定抗體的ab培養(yǎng)Ca、aa、ab、bb、bab、bb、bab培養(yǎng)Da、aa、ab、bb、baa能無(wú)限增殖的aa培養(yǎng),B,鞏固練習(xí),1、用a表示骨髓瘤細(xì)胞，b表示漿細(xì)胞，則細(xì)胞融合過(guò)程中兩次篩選的目的分別為()Aa、aa、ab、bb、ba、aa、abab培養(yǎng)Ba、aa、ab、bb、bab產(chǎn)生特定抗體的ab培養(yǎng)Ca、aa、ab、bb、bab、bb、bab培養(yǎng)Da、aa、ab、bb、baa能無(wú)限增殖的aa培養(yǎng),B,

7、鞏固練習(xí),1、用a表示骨髓瘤細(xì)胞，b表示漿細(xì)胞，則細(xì)胞融合過(guò)程中兩次篩選的目的分別為()Aa、aa、ab、bb、ba、aa、abab培養(yǎng)Ba、aa、ab、bb、bab產(chǎn)生特定抗體的ab培養(yǎng)Ca、aa、ab、bb、bab、bb、bab培養(yǎng)Da、aa、ab、bb、baa能無(wú)限增殖的aa培養(yǎng),B,鞏固練習(xí),2、關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合的說(shuō)法不正確的是（）A.動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程B.動(dòng)物細(xì)胞融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞C.常用的誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的手段有：聚乙二醇、滅活的病毒、電激、紫外線照射D.細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交

8、方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能,C,鞏固練習(xí),3、單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞融合后，要用特定的培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是()B淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞ABCD,D,鞏固練習(xí),1.右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案,制備單克隆抗體,不能，沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。,(1).該實(shí)驗(yàn)方案的目的是：_,(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？,課堂練習(xí),(3).A是從小鼠的脾臟中取得_該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_。,(4).圖中B為_(kāi)過(guò)程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_