1、脂肪乳氨基酸(17)葡萄糖(11%)注射液無(wú)菌保證與細(xì)菌內(nèi)毒素質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告作者： 職務(wù)：日期： 1.簡(jiǎn)介脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11）注射液，商品名卡文，系由費(fèi)森尤斯卡比集團(tuán)公司研制，自2004年起由華瑞公司進(jìn)口銷售。經(jīng)費(fèi)卡董事會(huì)批準(zhǔn)華瑞公司接受費(fèi)卡公司就該產(chǎn)品的技術(shù)轉(zhuǎn)移，在華瑞公司無(wú)錫生產(chǎn)基地建造生產(chǎn)線，產(chǎn)品供應(yīng)中國(guó)市場(chǎng)并出口至亞太地區(qū)市場(chǎng)。項(xiàng)目分為生產(chǎn)線建設(shè)和產(chǎn)品注冊(cè)兩個(gè)相互影響的部分。由于國(guó)內(nèi)藥品生產(chǎn)注冊(cè)申請(qǐng)受理前要求必須具備實(shí)際的生產(chǎn)線并經(jīng)驗(yàn)證生產(chǎn)出注冊(cè)報(bào)批樣品，在等待審批過(guò)程中必然存在生產(chǎn)設(shè)備投資的閑置問(wèn)題。由于生產(chǎn)設(shè)施中自動(dòng)化制袋/灌裝/裝外袋的設(shè)備投資很大，為求得產(chǎn)品注冊(cè)

2、進(jìn)展，項(xiàng)目費(fèi)用、生產(chǎn)能力和市場(chǎng)需求的最優(yōu)平衡，決定分兩個(gè)階段建設(shè)生產(chǎn)設(shè)施：第一階段，2008年實(shí)現(xiàn)投資較低的進(jìn)口成品空袋、半自動(dòng)灌裝，每小時(shí)灌裝200袋的生產(chǎn)能力，以達(dá)到年產(chǎn)100萬(wàn)袋的產(chǎn)能，產(chǎn)品可滿足國(guó)內(nèi)市場(chǎng)需求。但其中配制、滅菌、燈檢、裝箱等設(shè)備和公用工程應(yīng)能為第二階段每小時(shí)900袋的生產(chǎn)能力配套。第二階段，2010年投資一套全自動(dòng)的制袋/灌裝/裝外袋的設(shè)備，以取代第一階段的半自動(dòng)設(shè)備，產(chǎn)品除滿足國(guó)內(nèi)市場(chǎng)外，還可供應(yīng)亞太地區(qū)。根據(jù)上述項(xiàng)目建設(shè)策略，因灌裝速度的限制，會(huì)存在配制批量、滅菌能力超過(guò)第一階段的灌裝能力的問(wèn)題。主要表現(xiàn)為：如以1440ml規(guī)格的產(chǎn)品計(jì)算，脂肪乳注射液最大配制批量20

3、00升生產(chǎn)，灌裝時(shí)間會(huì)達(dá)到40小時(shí)；以最小批量1000升生產(chǎn)，則需要的灌裝時(shí)間為20小時(shí)。1920ml規(guī)格的產(chǎn)品灌裝時(shí)間分別低于上述數(shù)據(jù)。通常，營(yíng)養(yǎng)類輸液產(chǎn)品滅菌前存放時(shí)間超過(guò)12小時(shí)，應(yīng)考慮滅菌前微生物繁殖導(dǎo)致的產(chǎn)品無(wú)菌保證和細(xì)菌內(nèi)毒素質(zhì)量的風(fēng)險(xiǎn)，并采取有針對(duì)性的措施控制風(fēng)險(xiǎn)。而就產(chǎn)品的理化質(zhì)量而言，只要產(chǎn)品灌裝前和灌裝后具有同樣的氮?dú)獗Ｗo(hù)，相對(duì)于產(chǎn)品2年以上的穩(wěn)定性保證，幾十小時(shí)的灌裝時(shí)間不會(huì)造成特殊的風(fēng)險(xiǎn)。本文以產(chǎn)品的無(wú)菌保證和細(xì)菌內(nèi)毒素質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)控制為目標(biāo)，通過(guò)分析藥液長(zhǎng)時(shí)間灌裝導(dǎo)致微生物繁殖的各種風(fēng)險(xiǎn)因素，說(shuō)明項(xiàng)目在設(shè)備與工藝設(shè)計(jì)、質(zhì)量控制策略等方面采用的全面的風(fēng)險(xiǎn)控制策略與方案，并結(jié)

4、合相應(yīng)的驗(yàn)證和試驗(yàn)結(jié)果，以評(píng)估產(chǎn)品的實(shí)際風(fēng)險(xiǎn)控制水平。2.風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估2.1 風(fēng)險(xiǎn)因素分析本項(xiàng)目的最大潛在風(fēng)險(xiǎn)因素在于藥液自配制完成至開始滅菌最長(zhǎng)可能有48小時(shí)的時(shí)間。作為營(yíng)養(yǎng)性輸液產(chǎn)品，藥液中存在的微生物可能以產(chǎn)品為底物大量繁殖，造成滅菌前微生物無(wú)法控制進(jìn)而超出滅菌工藝的能力，威脅產(chǎn)品無(wú)菌保證水平；同時(shí)也可能使革蘭氏陰性菌的代謝物細(xì)菌內(nèi)毒素超出安全水平。產(chǎn)品中細(xì)菌繁殖的總量取決于藥液溫度、微生物的種類、時(shí)間以及藥液的特性，如pH、可供微生物利用的成分等。在本項(xiàng)目中，藥液等待滅菌的時(shí)間是最應(yīng)關(guān)注的因素。此外，微生物的數(shù)量還與滅菌微生物初始污染量、污染種類以及藥液的溫度和性質(zhì)有關(guān)；細(xì)菌內(nèi)毒素?cái)?shù)量與污

5、染菌的種類和數(shù)量相關(guān)。此外，細(xì)菌內(nèi)毒素主要來(lái)自于原料中已有的內(nèi)毒素和藥液中微生物大量繁殖的代謝產(chǎn)物。由于原料中的內(nèi)毒素能均勻分布溶解在藥液中，通過(guò)抽樣檢查可以準(zhǔn)確掌握整批產(chǎn)品來(lái)自原料的內(nèi)毒素情況。而來(lái)自藥液滅菌前微生物繁殖的內(nèi)毒素，在各產(chǎn)品包裝中可能不均勻，必須通過(guò)控制微生物的繁殖來(lái)間接控制該來(lái)源的內(nèi)毒素?？傮w上，控制藥液中滅菌前的微生物總量，就能控制相應(yīng)的細(xì)菌內(nèi)毒素風(fēng)險(xiǎn)。以下分析著重討論微生物的風(fēng)險(xiǎn)因素控制。2.1.1微生物的初始污染導(dǎo)致微生物初始污染的原因有以下多種方面：原料中的微生物，通過(guò)產(chǎn)品配制進(jìn)入藥液，配制過(guò)程中來(lái)自環(huán)境和人員操作的微生物，設(shè)備中殘存的微生物包裝材料中的微生物2.1.

6、2污染的種類從控制的角度，微生物污染的種類是不可控的，但對(duì)污染菌的鑒別有助于對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的評(píng)價(jià)。2.1.3 時(shí)間整個(gè)滅菌前的時(shí)間分為配制時(shí)間、灌裝時(shí)間和灌裝后待滅菌時(shí)間。由于配制在高溫下進(jìn)行，一般生長(zhǎng)態(tài)微生物能被殺死，而芽孢態(tài)微生物在此高溫條件下不死亡也不會(huì)繁殖，因此配制過(guò)程的時(shí)間可以不予考慮。需要考慮的是配制完成藥液冷卻到室溫后開始轉(zhuǎn)移進(jìn)入儲(chǔ)罐直至滅菌開始的時(shí)間。本產(chǎn)品最大灌裝時(shí)間系生產(chǎn)1440ml規(guī)格產(chǎn)品時(shí)，配制2000升的脂肪乳注射劑，其灌裝時(shí)間達(dá)到40小時(shí)，加上藥液轉(zhuǎn)移入儲(chǔ)存罐、灌裝后等待滅菌的時(shí)間，生產(chǎn)方法規(guī)定總共不超過(guò)48小時(shí)。在設(shè)計(jì)驗(yàn)證方案時(shí)，以48小時(shí)為挑戰(zhàn)時(shí)間。2.1.4 產(chǎn)品

7、特性分析三個(gè)單元產(chǎn)品分別為氨基酸溶液、脂肪乳液和葡萄糖溶液，其理化性質(zhì)各異，各有敏感的微生物。從公司掌握的微生物經(jīng)驗(yàn)，葡萄糖、氨基酸液的pH較低，一般微生物不宜在其中繁殖。脂肪乳比較適宜微生物的生長(zhǎng)。2.1.5 溫度適宜的溫度是微生物繁殖的重要條件。三個(gè)產(chǎn)品均在高溫下配制，其中葡萄糖和氨基酸注射液冷卻到室溫儲(chǔ)存，而脂肪乳特別冷卻到2-10儲(chǔ)存。低溫能抑制微生物生長(zhǎng)。2.2 風(fēng)險(xiǎn)控制策略與方案風(fēng)險(xiǎn)控制策略與方案應(yīng)針對(duì)風(fēng)險(xiǎn)因素。2.2.1 設(shè)備與工藝設(shè)計(jì)生產(chǎn)設(shè)備與工藝設(shè)計(jì)的總體目標(biāo)是盡可能降低藥液被微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。整個(gè)配制灌裝系統(tǒng)都設(shè)計(jì)為計(jì)算機(jī)程序控制的全封閉系統(tǒng)，能經(jīng)自動(dòng)在線滅菌程序（SIP）

8、對(duì)包括藥液過(guò)濾器內(nèi)的整個(gè)系統(tǒng)滅菌，滅菌完成后充入經(jīng)0.22微米過(guò)濾的氮?dú)庹龎罕Ｗo(hù)，理論上只要維持正壓，即能保證設(shè)備內(nèi)表面的無(wú)菌狀態(tài)。配制好的氨基酸溶液和葡萄糖溶液，可經(jīng)0.22微米的除菌過(guò)濾器濾除由原料帶入藥液的微生物，得到無(wú)菌溶液，并在灌裝罐中在室溫下無(wú)菌儲(chǔ)存。脂肪乳液（Intralipid 20%）的灌裝罐帶有冷卻加套和溫度測(cè)定控制系統(tǒng)，保證脂肪乳液儲(chǔ)存在2-10。該設(shè)計(jì)基于費(fèi)卡公司(前身為Kabi Pharmacia公司)多年的生產(chǎn)實(shí)踐。該公司的生產(chǎn)常規(guī)為將勻化后的乳液冷卻至2-10并在該條件下儲(chǔ)存，可達(dá)40小時(shí)。在此基礎(chǔ)上，我公司預(yù)測(cè)延長(zhǎng)至48小時(shí)是可行的。因此，從設(shè)計(jì)可以保障藥液在等

9、待灌裝的期間污染微生物或微生物爆發(fā)性繁殖的風(fēng)險(xiǎn)很小。2.2.2 微生物的初始污染原料中的微生物 對(duì)每種主要原輔料均制定了內(nèi)控微生物限度和細(xì)菌內(nèi)毒素限度標(biāo)準(zhǔn)，以減少進(jìn)入藥液的微生物總量和細(xì)菌內(nèi)毒素量。主要原料微生物限度氨基酸類細(xì)菌和真菌各不超過(guò)10cfu/g葡萄糖細(xì)菌和真菌各不超過(guò)10cfu/g電解質(zhì)類細(xì)菌不超過(guò)100cfu/g，真菌不超過(guò)10cfu/g大豆油細(xì)菌和真菌各不超過(guò)10cfu/g甘油細(xì)菌不超過(guò)100cfu/g，真菌不超過(guò)10cfu/g卵磷脂細(xì)菌不超過(guò)100cfu/g，真菌不超過(guò)10cfu/g以最大批量2000升脂肪乳液，2400升氨基酸液，7000升葡萄糖液的工藝配方組合計(jì)算，最差情

10、況下配制完成后氨基酸液中的微生物初始污染水平為12106cfu,相當(dāng)于 葡萄糖液中為15106cfu。兩種溶液均經(jīng)過(guò)Pall公司的20英寸0.22微米除菌過(guò)濾器，其有效過(guò)濾面積為16800cm2，以對(duì)細(xì)菌截留效率107/cm2計(jì)，該型過(guò)濾器的截留細(xì)菌能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)藥液中的帶菌量，理論上能獲得無(wú)菌的氨基酸溶液和葡萄糖溶液。因脂肪乳液無(wú)法通過(guò)0.22微米過(guò)濾器，故對(duì)配制脂肪乳的水、甘油溶液分別通過(guò)0.22微米除菌過(guò)濾，大豆油通過(guò)0.45微米過(guò)濾，氫氧化鈉配制成1M的溶液后投料（一般微生物在強(qiáng)堿液中無(wú)法生存）。0.45微米過(guò)濾器常雖然不作為藥液除菌過(guò)濾器使用，但其孔徑小于絕大多數(shù)微生物的尺寸，廣泛用于

11、無(wú)菌檢查和微生物限度檢查中，實(shí)際上對(duì)微生物也有相當(dāng)好的截留作用。因此由原料帶入脂肪乳中初始污染微生物主要來(lái)自卵磷脂，不超過(guò)2.6106cfu。 配制溫度較高，其中氨基酸配制溫度起始為約80，葡萄糖溶液起始約80，脂肪乳約70，一般生長(zhǎng)態(tài)的微生物可以被殺死。工藝驗(yàn)證報(bào)告836-PQ-R1總結(jié)了對(duì)三批驗(yàn)證生產(chǎn)中配制灌中微生物初始污染量的數(shù)據(jù)：批號(hào)/取樣點(diǎn)配制結(jié)束的微生物污染水平cfu/100mlT5700氨基酸配制罐T5600葡萄糖配制罐T2700脂肪乳灌裝罐80CE80152380CE80283080CE803201該驗(yàn)證數(shù)據(jù)說(shuō)明配制過(guò)程能殺死大部分生長(zhǎng)態(tài)的微生物，藥液在過(guò)濾前的污染水平已經(jīng)很低

12、，原料的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)足夠嚴(yán)格。生產(chǎn)方法中規(guī)定各藥液滅菌前污染菌濃度糾偏限度為100cfu/100ml,與公司多年生產(chǎn)的其他輸液類產(chǎn)品相同。配制過(guò)程中來(lái)自環(huán)境和人員操作的微生物盡管采用了密閉性良好的配制灌裝系統(tǒng)，能有效防止環(huán)境微生物的侵入，但加強(qiáng)環(huán)境和人員微生物的控制有助于進(jìn)一步降低產(chǎn)品污染風(fēng)險(xiǎn)。配制間和灌裝間的生產(chǎn)環(huán)境為符合歐盟標(biāo)準(zhǔn)的C級(jí)，藥液暴露的灌裝環(huán)境局部為A級(jí)。空調(diào)凈化系統(tǒng)系符合歐盟規(guī)范的計(jì)算機(jī)自控的恒風(fēng)量系統(tǒng)，主要房間風(fēng)量經(jīng)初始調(diào)整驗(yàn)證確定后，24小時(shí)恒定風(fēng)量連續(xù)運(yùn)行，從而保證各房間換氣次數(shù)及相鄰房間之間氣流方向的恒定。風(fēng)險(xiǎn)最大的房間為灌裝間，設(shè)計(jì)送風(fēng)量10600m3/h，75循環(huán)

13、風(fēng)，按每人每小時(shí)40m3新風(fēng)量的潔凈室設(shè)計(jì)規(guī)范，理論上可容納60人同時(shí)工作。房間風(fēng)量設(shè)計(jì)和實(shí)測(cè)結(jié)果見下表：設(shè)計(jì)風(fēng)量m3/h實(shí)測(cè)風(fēng)量 m3/h灌裝間1060010694氨基酸配制間60106985葡萄糖配制間44805100藥液中轉(zhuǎn)（儲(chǔ)存）間42605171SOP10-120規(guī)定了空調(diào)凈化系統(tǒng)高效過(guò)濾器、風(fēng)量和層流系統(tǒng)風(fēng)速的再驗(yàn)證，應(yīng)每半年進(jìn)行一次PAO(曾經(jīng)為DOP)試驗(yàn)以及風(fēng)速測(cè)定。該潔凈環(huán)境2009年4月經(jīng)過(guò)靜態(tài)驗(yàn)證，并于5月起轉(zhuǎn)人動(dòng)態(tài)監(jiān)控。按SOP5-319的要求，最終滅菌產(chǎn)品C級(jí)及以上區(qū)域有生產(chǎn)時(shí)每周監(jiān)控一次，連續(xù)無(wú)生產(chǎn)時(shí)每月進(jìn)行一次靜態(tài)監(jiān)測(cè)。從空調(diào)凈化系統(tǒng)和潔凈環(huán)境驗(yàn)證及監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)看，

14、空調(diào)系統(tǒng)和潔凈環(huán)境均能符合設(shè)計(jì)要求。設(shè)備中殘存的微生物設(shè)備中殘存微生物通過(guò)CIP出去，由SIP達(dá)到無(wú)菌保證。在設(shè)備內(nèi)充氮?dú)獠⒕S持正壓以保證維持已建立的微生物潔凈狀態(tài)。其中，因長(zhǎng)期儲(chǔ)存藥液，藥液儲(chǔ)罐至灌裝機(jī)及其所屬管道經(jīng)CIP后必須經(jīng)SIP，伴以最終充氮?dú)獗Ｗo(hù)，以達(dá)到并維持無(wú)菌狀態(tài)；而配制系統(tǒng)則通過(guò)進(jìn)行CIP達(dá)到微生物限度要求，并通過(guò)充氮?dú)饩S持正壓的措施保證微生物潔凈標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，配制系統(tǒng)也能進(jìn)行SIP并通過(guò)了驗(yàn)證。驗(yàn)證報(bào)告836-PQ-R1總結(jié)了配制、灌裝系統(tǒng)SIP的驗(yàn)證結(jié)果。驗(yàn)證方法：通過(guò)經(jīng)驗(yàn)對(duì)整個(gè)系統(tǒng)判斷選取可能的冷點(diǎn)位置50個(gè)為測(cè)量點(diǎn)。將50根熱電偶放置在測(cè)量點(diǎn)設(shè)備的外表面并用隔熱材料包裹

15、。運(yùn)行SIP程序三次，記錄F0值三組。所有150個(gè)F0值數(shù)據(jù)都大于17分鐘。由于達(dá)到了過(guò)度殺滅的標(biāo)準(zhǔn)，決定不必進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。清潔驗(yàn)證報(bào)告838-ClV-R1總結(jié)了三個(gè)驗(yàn)證批經(jīng)CIP后的清潔驗(yàn)證數(shù)據(jù)，其中微生物清潔驗(yàn)證歸納如下：批號(hào)淋洗水 (5 CFU/100ml)擦拭（10CFU/25cm2）取樣點(diǎn)數(shù)結(jié)果取樣點(diǎn)數(shù)結(jié)果80CE80113一個(gè)1，其余為027一個(gè)1，其余為080CE80213一個(gè)1，其余為027全部為080CE80313一個(gè)1，其余為027全部為0驗(yàn)證證明系統(tǒng)經(jīng)CIP能使微生物水平符合驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)。設(shè)備殘存微生物的風(fēng)險(xiǎn)受控內(nèi)包裝材料中的微生物內(nèi)包裝袋由愛爾蘭工廠定點(diǎn)生產(chǎn)。在注

16、冊(cè)進(jìn)口包裝袋的過(guò)程中，對(duì)其生產(chǎn)、質(zhì)量控制、儲(chǔ)存、發(fā)運(yùn)、接收、檢驗(yàn)、儲(chǔ)存、工廠使用等環(huán)節(jié)的質(zhì)量可控進(jìn)行了詳細(xì)評(píng)估。公司制定了包裝袋質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，微生物限度為100cfu/袋，遠(yuǎn)低于滅菌前產(chǎn)品微生物限度；細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為50EU/袋，遠(yuǎn)低于每袋產(chǎn)品允許的細(xì)菌內(nèi)毒素總量。上述控制使來(lái)自于包裝材料的微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素降低到最小程度。另外，由包裝袋進(jìn)入藥液的微生物至滅菌的時(shí)間通常不超過(guò)8個(gè)小時(shí)（一般為5小時(shí)），微生物繁殖的風(fēng)險(xiǎn)較小。SOP3-934規(guī)定了材料轉(zhuǎn)移、使用過(guò)程的防止污染措施。由包裝材料向產(chǎn)品引入微生物的風(fēng)險(xiǎn)可以接受。2.2.3 污染的種類污染的種類無(wú)法預(yù)先控制。通過(guò)對(duì)超過(guò)微生物限度標(biāo)準(zhǔn)的污染

17、菌進(jìn)行鑒別，有助于預(yù)測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的質(zhì)量情況并指導(dǎo)污染原因的調(diào)查。公司已有10多年使用API系統(tǒng)鑒別微生物種的經(jīng)驗(yàn)，能為微生物污染原因調(diào)查提供技術(shù)支持。2.2.4 時(shí)間藥液轉(zhuǎn)移入儲(chǔ)存罐、灌裝及灌裝后等待滅菌的時(shí)間，生產(chǎn)方法規(guī)定總共不超過(guò)48小時(shí)。該時(shí)間對(duì)能利用藥液為底物的微生物而言，是非常長(zhǎng)的。通過(guò)時(shí)間控制微生物繁殖是不夠的。因而控制初始微生物污染是整個(gè)體系的關(guān)鍵。2.2.5 產(chǎn)品特性各單元產(chǎn)品中，葡萄糖、氨基酸液的pH較低，根據(jù)微生物的常識(shí)和公司多年生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)該條件不利于微生物的生長(zhǎng)，驗(yàn)證試驗(yàn)證明了該判斷。（見3.1微生物生長(zhǎng)驗(yàn)證） 2.2.6 溫度由于脂肪乳無(wú)法采用除菌過(guò)濾，儲(chǔ)存期間藥液帶菌的

18、可能性較大。因此，將儲(chǔ)存罐設(shè)計(jì)為帶冷卻加套，能將藥液冷卻至2-10儲(chǔ)存。藥液進(jìn)入灌裝機(jī)前，通過(guò)熱交換器將溫度提升到灌裝溫度。2.2.7 微生物中間控制標(biāo)準(zhǔn)微生物中間控制標(biāo)準(zhǔn)包括滅菌前微生物污染量和污染菌耐熱性標(biāo)準(zhǔn)。制定該標(biāo)準(zhǔn)是產(chǎn)品無(wú)菌保證的必要措施。產(chǎn)品無(wú)菌水平取決于滅菌工藝賦予產(chǎn)品的F0值、滅菌開始時(shí)的產(chǎn)品內(nèi)污染菌總數(shù)（N0）和污染菌的耐熱參數(shù)（D值）。本產(chǎn)品采用殘存概率滅菌法，滅菌溫度121，F(xiàn)0值8.521分鐘。滅菌前污染菌含量糾偏限度為：滅菌前葡萄糖 11%100 CFU/100 mlVamin 201100 CFU/100 ml英脫利匹特 20%100 CFU/100 ml耐熱性置入

19、沸水浴中15分鐘，菌檢陰性滅菌前微生物限度檢查對(duì)產(chǎn)品無(wú)菌保證水平評(píng)價(jià)的意義重大。由于產(chǎn)品內(nèi)的污染菌的種類無(wú)法控制，工藝驗(yàn)證實(shí)際上無(wú)法反映各種可能的污染情況。而本項(xiàng)檢查，能直接實(shí)際反映出產(chǎn)品在完成整個(gè)滅菌前生產(chǎn)過(guò)程中的綜合污染狀況，其意義一是可以為產(chǎn)品無(wú)菌保證水平的評(píng)價(jià)提供關(guān)鍵參數(shù)，二是長(zhǎng)期、大量數(shù)據(jù)的積累可以反映生產(chǎn)系統(tǒng)的微生物控制水平和趨勢(shì)。滅菌前微生物的取樣時(shí)機(jī)應(yīng)能涵蓋整個(gè)生產(chǎn)灌裝的情況。華瑞公司規(guī)定在灌裝的開始、中間和結(jié)束階段抽取樣品，并將樣品存放在與待滅菌產(chǎn)品同樣的條件下，當(dāng)產(chǎn)品開始滅菌時(shí)，將樣品轉(zhuǎn)入冰箱冷藏以抑制微生物可能的繁殖。華瑞公司有多年測(cè)定耐熱芽孢D值的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)，可以測(cè)定污

20、染菌的耐熱性。2.2.8 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)控制了微生物污染，就控制了細(xì)菌內(nèi)毒素的污染。由于通常一批產(chǎn)品的最后階段微生物繁殖的時(shí)間最長(zhǎng)，內(nèi)毒素污染概率最高，可取此階段的樣品作細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。也可對(duì)產(chǎn)品標(biāo)識(shí)生產(chǎn)序號(hào)，根據(jù)微生物檢查的異常情況有針對(duì)性地取樣。3. 驗(yàn)證鑒于微生物污染菌的多樣性，無(wú)法通過(guò)有限的試驗(yàn)獲取生產(chǎn)體系的可靠性的充分證據(jù)，但畢竟驗(yàn)證能提供有益的證據(jù)和線索，證明一般情況下的生產(chǎn)體系的可靠性。驗(yàn)證分為微生物生長(zhǎng)驗(yàn)證和生產(chǎn)工藝驗(yàn)證兩部分。3.1 微生物生長(zhǎng)驗(yàn)證驗(yàn)證報(bào)告V09-023考察了常溫條件下本產(chǎn)品葡萄糖11，氨基酸液Vamin 201在公司多年來(lái)藥液微生物檢查中發(fā)現(xiàn)的多種微生物，包

21、括了革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、球菌、桿菌和芽孢的促生長(zhǎng)性，具有廣泛的代表性。這些微生物接入產(chǎn)品中并在室溫培養(yǎng)48小時(shí)后，均沒(méi)有明顯增長(zhǎng)，說(shuō)明對(duì)大部分微生物而言，上述產(chǎn)品不支持其繁殖。該驗(yàn)證說(shuō)明即使在儲(chǔ)存過(guò)程中藥液污染了少量常見的微生物，在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)也不會(huì)大量繁殖，威脅產(chǎn)品的質(zhì)量。驗(yàn)證報(bào)告V07-038-R考察了2-10下本產(chǎn)品中脂肪乳20對(duì)在公司多年來(lái)藥液微生物檢查發(fā)現(xiàn)的、以及有廣泛代表性的9類微生物的促生長(zhǎng)性報(bào)告。這些微生物接入產(chǎn)品中并在室溫培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后，均沒(méi)有明顯增長(zhǎng)，說(shuō)明對(duì)絕大部分微生物而言，上述產(chǎn)品在該溫度下不支持其繁殖。該驗(yàn)證說(shuō)明即使在配制過(guò)程中藥液污染了少量常見

22、的微生物，在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)也不會(huì)大量繁殖，威脅產(chǎn)品的質(zhì)量。應(yīng)當(dāng)指出，驗(yàn)證使用的菌種并不能代表自然界所有存在的微生物。對(duì)于可能存在的能在上述驗(yàn)證條件下迅速繁殖的微生物，可通過(guò)對(duì)滅菌前微生物樣品的檢查直觀地反映藥液中的微生物狀況。該檢查能有效控制偶然發(fā)生的特殊微生物的污染，從而防止有無(wú)菌保證風(fēng)險(xiǎn)和內(nèi)毒素風(fēng)險(xiǎn)的產(chǎn)品放行。即該風(fēng)險(xiǎn)能被可靠地發(fā)現(xiàn)，從而避免產(chǎn)品對(duì)使用者的風(fēng)險(xiǎn)。3.2 生產(chǎn)工藝驗(yàn)證針對(duì)以上分析的風(fēng)險(xiǎn)因素，在三批生產(chǎn)工藝驗(yàn)證中特別設(shè)計(jì)了最差條件，通過(guò)對(duì)長(zhǎng)達(dá)52小時(shí)儲(chǔ)存條件的模擬灌裝和取樣，考察極端條件下實(shí)際產(chǎn)品滅菌前微生物數(shù)量的變化。所有滅菌前取樣的含菌量檢驗(yàn)結(jié)果全部遠(yuǎn)低于糾偏限度100CF

23、U/100ml。盡管生產(chǎn)工藝驗(yàn)證的批次有限，但已有數(shù)據(jù)一定程度上驗(yàn)證了整個(gè)生產(chǎn)設(shè)施、工藝設(shè)計(jì)和質(zhì)量控制方案的可行性。通過(guò)未來(lái)投產(chǎn)后的同步驗(yàn)證，能獲取更多的信息，獲得跟大的質(zhì)量保證信心。設(shè)備 T5700罐 T5600罐 T2700 罐T5900 罐T5800 罐MCB-A機(jī)MCB-B機(jī)取樣點(diǎn)V5714V5614終端前 終端前 終端前 IL 灌裝口AA 灌裝口GS 灌裝口IL 灌裝口AA 灌裝口GS 灌裝口80CE8010小時(shí)5232300000012小時(shí)8224小時(shí)8200000030小時(shí)6248小時(shí)52000000052小時(shí)83100000036+12小時(shí)10000040+12小時(shí)000001

24、80CE8020小時(shí)8303100011012小時(shí)5124小時(shí)7420040030小時(shí)9148小時(shí)41030080052小時(shí)21370080036+12小時(shí)20150040+12小時(shí)30080080CE8030小時(shí)2012200000012小時(shí)3124小時(shí)5200000030小時(shí)6248小時(shí)23200050052小時(shí)40030070036+12小時(shí)00020040+12小時(shí)000500備注：36+12小時(shí)/40+12小時(shí)表示“在藥液轉(zhuǎn)移開始36或40小時(shí)灌裝取樣，取樣后在2025放置12小時(shí)后再進(jìn)行含菌量檢查”。3.3 滅菌工藝驗(yàn)證產(chǎn)品無(wú)菌的最終保障是滅菌工藝。滅菌工藝熱穿透試驗(yàn)證明滅菌工藝能高度可靠地賦予藥液的F0值為8 -21，即8F0平均3SD21的標(biāo)準(zhǔn)。F0平均系驗(yàn)證過(guò)程中測(cè)定的所有藥液實(shí)際F0值的平均值，SD系實(shí)際F0值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。該滅菌工藝標(biāo)準(zhǔn)代表了行業(yè)先進(jìn)水平，對(duì)滅菌設(shè)備的熱分布均勻性提出了極高的挑戰(zhàn)。歷程滅菌工藝驗(yàn)證和再驗(yàn)證均支持上述結(jié)論。報(bào)告祥見880-PV-R1，882-PV-R1，883-PV-R1。通過(guò)驗(yàn)證同時(shí)獲取了滅菌設(shè)備控制用F0值與產(chǎn)品藥液獲取的F0值間的定量關(guān)系。從而