1、蛋黃卵磷脂提取方法的研究,指導(dǎo)教師：林松毅 副教授 學(xué)生姓名：黃金枝 學(xué) 院：軍需科技學(xué)院 答辯日期：2009年6月5日,Study on extraction of lecithin from egg yolk,結(jié)構(gòu)安排：,研究背景和意義,近年來卵磷脂被譽為與蛋白質(zhì)、維生素E并列的“三大營養(yǎng)素”倍受社會關(guān)注 ，需求量也日益增大。 傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑法是目前應(yīng)用最廣泛的提取方法，但此法所得卵磷脂產(chǎn)品一般純度不高。 為適應(yīng)大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的要求，開發(fā)研究步驟簡單、提取率高、有機(jī)溶劑殘留低、生產(chǎn)成本低的卵磷脂提取方法十分必要 。,溶劑法提取,質(zhì)量檢測,研究內(nèi)容,一、蛋黃卵磷脂溶劑法提取,實驗材料 蛋黃粉

2、：北京金鍵力公司生產(chǎn)； 乙醇、丙酮試劑：分析純，由北京化工廠生產(chǎn)； 實驗設(shè)備 AG204M型分析天平：ETTLER TOLLEDO公司； HJ-6型多頭磁力加熱攪拌器：江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司； SHZ-D（）型循環(huán)水式真空泵：鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司； R1002型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：鞏義市英裕高科儀器廠； DZMK-D型水浴鍋：余姚市東方電工儀器廠； DZF-6050型真空干燥箱：上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。,實驗方法,蛋黃卵磷脂生產(chǎn)工藝流程：,蛋黃粉,丙酮萃取,抽濾,乙醇提取,抽濾,濃縮干燥,蛋黃卵磷脂粗品,純化,成品,1.蛋黃卵磷脂提取技術(shù)單因素實驗方案,萃取時間對卵磷脂得率影響

3、,蛋黃粉與丙酮的料液比對提取率的影響,丙酮浸提時間對不溶物得率的影響,乙醇與丙酮不溶物粉料液比對卵磷脂得率影響,乙醇濃度對卵磷脂得率影響,蛋黃粉與丙酮的料液比對提取率的影響,由于丙酮具有毒性易造成殘留且浪費，從提取效果和減少丙酮殘留角度選取1：9為最佳料液比。,丙酮浸提時間對不溶物得率的影響,從提高提取效果及節(jié)約資源的角度分析，選取60min為最佳提取時間,乙醇與丙酮不溶物料液比對卵磷脂得率的影響,從提高提取率與節(jié)約材料的角度考慮，選取1：7的料液比,乙醇濃度對卵磷脂得率的影響,為了提高卵磷脂的提取率并節(jié)約資源，選擇乙醇濃度為95%。,萃取時間對卵磷脂得率影響,從提高卵磷脂品質(zhì)并且節(jié)省時間兩方

4、面考慮，選擇1.5小時,2. U10（104）均勻設(shè)計實驗方案,U10（104）優(yōu)化蛋黃卵磷脂提取最優(yōu)工藝條件的結(jié)果與分析,丙酮不溶物與乙醇料液比11：1，乙醇濃度95%，提取溫度35 ，提取時間2h,實驗結(jié)果回歸分析,按照實驗結(jié)果得到回歸方程為 y3.79+0.402X1+ 0.141X2+0.300X3-8.34e-2X4,回歸方程顯著，具有良好的線性關(guān)系。,二、蛋黃卵磷脂HPLC分析方法,試驗材料 卵磷脂，吉林大學(xué)營養(yǎng)與功能食品實驗室提供； 試驗試劑 卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)品：色譜純級，美國SIGMA公司生產(chǎn)； 甲醇、乙腈：色譜純級，美國DIMA公司生產(chǎn)； 超純水：由0.45um濾膜過濾備用。 試驗

5、設(shè)備 LC-2010A型島津高效液相色譜儀：日本島津公司生產(chǎn)； 752PC型紫外可見分光光度計：上海光譜儀器有限公司生產(chǎn)； 2XZ-1型旋片式真空泵：浙江黃巖生產(chǎn)； DZF-6050型真空干燥箱：上海博迅生產(chǎn)； MILLIPORE牌超純水機(jī)：美國生產(chǎn)； BUCHI R-250旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：瑞士生產(chǎn)。,試驗方法,卵磷脂HPLC色譜條件： 色譜柱：Lichrosorb si60柱； 流動相：甲醇-乙腈-水（60：30：10)； 流速：1ml/min； 柱溫：40； 檢測波長：206nm。,1.卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制,精密稱取卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻

6、得對照品溶液（1mg/ml）。將對照品溶液在紫外可見分光光度計下進(jìn)行波譜掃描，記錄其特征峰值（206nm）。用微量進(jìn)樣器分別吸取不同體積（1、2、3、4、5、6l）的標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。,卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)工作曲線測定結(jié)果,用最小二乘法作線性回歸，制得的卵磷脂含量與峰面積的標(biāo)準(zhǔn)回歸方程為y=7.502701e-004x -37.97849， 相關(guān)系數(shù)R=0.9992173，說明線性關(guān)系良好,圖為卵磷脂的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 Fig. Working curve of standard L-Lecithin,卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)品保留時間為6.66min左右。采用外標(biāo)法

7、計算出蛋黃卵磷脂的純度為71.52%。,流動相空白圖譜,卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)品圖譜,蛋黃卵磷脂樣品圖譜,2.樣品純度測定結(jié)果,3.HPLC的方法學(xué)驗證實驗,精密度及 穩(wěn)定性實驗,重現(xiàn)性 實驗,加樣回收率 實驗,方 法 可 靠,HPLC的方法學(xué)驗證實驗,精密度及穩(wěn)定性實驗： 精密吸取對照品溶液5l按色譜條件進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣5l，測定卵磷脂峰面積大小。 從表3中可以看出，RSD（%）值為2.4%，說明本方法的測量數(shù)據(jù)之間接近程度高。由于精密度試驗是在每隔20分鐘左右進(jìn)樣檢測一次，所以同時考察了標(biāo)準(zhǔn)品不同時段的穩(wěn)定性試驗，由結(jié)果可知，本試驗的樣品在一定時間內(nèi)較穩(wěn)定。,HPLC的方法學(xué)驗證實驗,精密度及穩(wěn)定性

8、實驗： 從表4中可以看出，RSD（%）值為2.06%，說明本試驗的樣品在一定時間內(nèi)較穩(wěn)定。,HPLC的方法學(xué)驗證實驗,重現(xiàn)性實驗： 精密吸取樣品溶液5l按色譜條件進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣5l，測定卵磷脂峰面積大小。 重現(xiàn)性實驗結(jié)果見表5，RSD=2.58%，說明此方法可靠，重現(xiàn)性良好，樣品的檢測受環(huán)境的因素影響較小。,HPLC的方法學(xué)驗證實驗,加樣回收率實驗： 精密量取已知卵磷脂含量的樣品溶液0.2、0.2、0.3、0.3、0.4、0.4ml（6份），加放一定量標(biāo)準(zhǔn)品，按色譜條件進(jìn)樣6次，測定峰面積，計算加樣回收率。 加樣回收率實驗結(jié)果見下表，回收率結(jié)果為98.65%104.33之間，RSD=2.2

9、7%，說明此方法可靠，回收率好。,結(jié) 論,1、本文對有機(jī)溶劑法提取蛋黃粉中卵磷脂的工藝條件進(jìn)行了系統(tǒng)研究，得出如下結(jié)論： （1）根據(jù)各因素標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)的絕對值，各因素對提取率的主次影響順序為料液比乙醇濃度提取溫度提取時間。 （2）根據(jù)單因素試驗和回歸方程和得出最優(yōu)的試驗條件為：蛋黃粉與丙酮料液比為1：9丙酮提取時間1h。丙酮不溶物與乙醇料液比11:1,乙醇濃度95，提取溫度35，提取時間2h。 （3）由于最優(yōu)工藝條件的沒有出現(xiàn)在所做U10（104） 10次試驗中，需要進(jìn)行驗證試驗。平行重復(fù)三次，得出卵磷脂的提取率為19.72%。 2、在優(yōu)化卵磷脂提取方法的基礎(chǔ)上，利用高效液相色譜法測定了所得卵

10、磷脂的純度為71.52%。并對HPLC法進(jìn)行了精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和加樣回收率的方法學(xué)驗證，其RSD值分別為2.4%、2.06%、2.58%、2.27%，表明該方法可靠。,已發(fā)表的論文,1.黃金枝,林松毅,宮新統(tǒng),李丹,劉靜波.均勻設(shè)計法優(yōu)化蛋黃卵磷脂提取工藝的研究J. 食品科學(xué),2008,29（10）:257-258 2.宮新統(tǒng)、林松毅、劉靜波、李丹、黃金枝.HPLC在高純度蛋黃卵磷脂提取技術(shù)中的應(yīng)用研究J.食品科學(xué),2008,29(12):242-245,致 謝,本論文是在導(dǎo)師林松毅副教授悉心指導(dǎo)下完成的。論文的選題、實驗工作的順利開展以及論文的完成，都凝結(jié)著導(dǎo)師的心血。在此我表示深深地謝意！ 感謝劉靜波院長和張鐵華老師，班主任潘風(fēng)光老師的幫助和支持，感謝學(xué)院為我們提供良好的學(xué)習(xí)生活和實驗環(huán)境！ 感謝營養(yǎng)與功能實驗室的老師和師兄師姐們對我的指導(dǎo)和幫