1、.超離心技術(shù)簡介超速離心機(jī)的離心速度為每分鐘60000轉(zhuǎn)或更多，離心力約為重力加速度的500000倍。在操作技術(shù)上，最常用的是差速離心和密度梯度離心。前者是交替使用低速和高速離心，用不同強(qiáng)度的離心力使具有不同質(zhì)量的物質(zhì)分級分離的方法。此法適用于混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大組分的分離。欲分離沉降系數(shù)接近的物質(zhì)，則廣泛使用密度梯度離心法。這種方法使用一種密度能形成梯度（在離心管中，其密度從上到下連續(xù)增高）又不會使所分離的生物活性物質(zhì)凝聚或失活的溶劑系統(tǒng)，離心后各物質(zhì)顆粒能按其各自的比重平衡在相應(yīng)的溶劑密度中形成區(qū)帶。一、差速離心差速離心是交替使用低速和高速離心，用不同強(qiáng)度的離心力使具有不同質(zhì)量的物

2、質(zhì)分級分離的方法。此法適用于混合樣品中各沉降系數(shù)差別較大組分的分離。離心速度較低，較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達(dá)到分離不同大小顆粒的目的。原理：不同沉降系數(shù)的組分在不同的離心速度下沉降的速度不同，以此用來分離亞細(xì)胞組份。物體圍繞中心軸旋轉(zhuǎn)時會受到離心力的作用，離心力越大，被離心物質(zhì)沉降得越快。 應(yīng)用：此法多用于分離細(xì)胞勻漿中的各種亞細(xì)胞組分，用低滲勻漿、超聲破碎或研磨等方法可使細(xì)胞質(zhì)膜破損，形成細(xì)胞核、線粒體、葉綠體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體等細(xì)胞器和細(xì)胞組分組成的混合勻漿，再通過差速離心將各種質(zhì)量和密度

3、不同的亞細(xì)胞組分和各種顆粒分開。2、 密度梯度離心密度梯度離心使用一種密度能形成梯度（在離心管中，其密度從上到下連續(xù)增高）又不會使所分離的生物活性物質(zhì)凝聚或失活的溶劑系統(tǒng)，離心后各物質(zhì)顆粒能按其各自的比重平衡在相應(yīng)的溶劑密度中形成區(qū)帶。常用的密度梯度溶劑是蔗糖或氯化銫（CsCl）溶液。用蔗糖時，先將蔗糖溶液制成密度梯度溶液，再在其頂端加樣品。離心后，如欲收集所分離的組分，可在離心管的下端刺一小洞，然后分部收集。如用CsCl這種密度大又?jǐn)U散迅速的溶劑系統(tǒng)時，可將樣品均勻地混合于溶劑中。離心達(dá)到平衡后， CsCl溶液形成密度梯度，樣品中各組分也在相應(yīng)密度處形成區(qū)帶。原理：離心介質(zhì)以連續(xù)密度梯度分布，通過離心、每種物種懸浮到與自己密度相當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)區(qū)。當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時，在離心力場下，在密度梯度介質(zhì)中，顆?；蛳蛳鲁两?，或向上浮起，一直移動到與它們各自的密度恰好相等的位置，在這里顆粒沒有重量，不管離心多長時間，它們再也不移動了，形成一系列密度區(qū)。從而使不同浮力密度的物質(zhì)得到分離。應(yīng)用：此法常用CsCl、蔗糖、甘油等做介質(zhì),一般應(yīng)用于物質(zhì)的大小相近，而密度差異較大時。常用來分離提取核酸、富含AT和富含GC的DNA、亞細(xì)胞器和質(zhì)粒等。發(fā)展前景：超離心技術(shù)是研究細(xì)胞及其組分最常用的分析方法，隨著學(xué)科的交叉與融合，當(dāng)今幾乎沒有那些生物學(xué)問題與細(xì)胞生物學(xué)無關(guān)