培養(yǎng)細胞染色體制備_第1頁
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文檔簡介

遺傳病的分析3 培養(yǎng)細胞的染色體制備,定 義,在細胞的生長周期中，中期染色體的長短、大小、恒定性正適合我們對其進行分析、研究。 因此利用人工的方法，使大部分分裂細胞處于中期而不向后期轉化，并獲得之，經處理，制片后觀察分析。,器 材,細胞株 普通光學顯微鏡 冰載玻片 酒精燈,試 劑,0.25%胰旦白酶液 0.075M KCL 秋水仙素 固定液（冰醋酸/甲醇 1:3） Giemsa染液,操 作,1. 收集細胞前6h，培養(yǎng)細胞中加5ug/ml秋水仙素2滴，混勻后繼續(xù)培養(yǎng) 2. 0.25%胰旦白酶液消化細胞，并收集細胞于離心管中 3. 離心1800轉/min10min，棄上清，取沉淀 4. 加0.075M KCL低滲液4ml，充分打勻細胞，室溫靜置20min 5. 再加入固定液1ml，并與原有的低滲液充分混勻，室溫靜置5min 6. 離心，棄上清，取沉淀,操 作,7. 加固定液5ml，輕輕打勻，室溫靜置30min 8. 離心，棄上清，取沉淀 9. 加少量固定液，制成染色體懸液 10. 取1-2滴染色體懸液，滴加在冰玻片上，迅速吹片，酒精燈下烤干玻片 11. Giemsa染色5min，自來水沖洗，待干 后，顯微鏡下觀察,光鏡100倍下人染色體G帶照片,注 意,濃度與時間 秋水仙素、低滲

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