1、高效液相色譜在生物制藥中的應用高效液相色譜法是近35年發(fā)展起來的一項高效、快速的分離分析技術，是現(xiàn)代分離測試的重要手段1。高效液相色譜法已經(jīng)被廣泛用在各種領域，它是以經(jīng)典的液相色譜為基礎，引入氣相色譜的理論與實驗方法，將流動相改為高壓輸送，并采用高效固定相及在線檢測等手段，發(fā)展而成的分析、分離方法。以其靈敏度高、選擇性好，可分析微量組成甚至痕量樣品等特點，成為醫(yī)藥分析領域發(fā)展最快、應用最廣的現(xiàn)代分析技術之一。于此同時，高效液相色譜法成為環(huán)境污染物檢測技術及化工產(chǎn)品質(zhì)量檢驗中的標準方法。鑒于其簡便、快速、靈敏、準確的特點，目前，在醫(yī)藥、衛(wèi)生、食品、環(huán)保等各個領域已得到廣泛應用。隨著色譜技術的不斷

2、發(fā)展，在世界許多科學領域中，色譜法已成為世界許多科學領域中普及的一種分離分析手段，色譜儀也呈多樣化、高精化、自動化、聯(lián)用技術化等方向發(fā)展。高效液相色譜儀具有柱效高、分析速度快、流動相和被測組分的體積流量小等特點，廣泛應用于臨床工作2。1.高效液相色譜的介紹高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置（用雙泵）、進樣器、色譜柱、檢測器、恒溫器、記錄儀等主要部件。高效液相色譜法有以下五個特點：高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱受到的阻力比較大，為了能夠快速的通過柱子，必須對流動相加很高的高壓。高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

3、高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在uL數(shù)量級。應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是強極性、熱穩(wěn)定性差、高沸點、大分子化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。分析速度快、載液流速快：分析所需時間一般小于1小時，和傳統(tǒng)經(jīng)典液體色譜法相比速度快得多。高效液相色譜有5種類型：1、吸附色譜（Adsorption Chromatography）2、分配色譜（Partition Chromatography）3、離子色譜（Ion Chromatography）4、體積排阻色譜（Size Exclusion Chromatography）5、親和色譜（Affinity Chro

4、matography）此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有缺點。高效液相色譜的缺點就是有柱外效應，在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛應用于核酸、肽類、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產(chǎn)物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除莠劑的分析等物質(zhì)的分析。2.高效液相色譜在生物制藥中的應用2.

5、1高效液相色譜在檢測藥物含量方面的應用藥物與人類的健康，生活質(zhì)量的提高關系極大，許多藥品由于受到純度的影響，藥效不能充分發(fā)揮，甚至產(chǎn)生毒副作用；有時服用前需作各種試驗，帶來很多麻煩，高效液相色譜的測定就比較簡單。高效液相色譜是分離與純化藥物的最佳選擇。在藥物分析中，由于有靈敏度高，快速簡便，專一性的特點，廣泛的應用于藥物分析中，主要是定量分析，特別在干擾較多的時候表現(xiàn)得比其他方法好。高效液相色譜法可以用來測定毗蟲琳原藥的含量：選擇ODS-C18色譜柱，以甲醇和水為流動相，采用反相高效液相色譜法測定毗蟲琳原藥的含量。該方法快速簡便，準確度高3。高效液相色譜法測定氨咖黃敏膠囊的含量：色譜柱為Agl

6、ient c s柱(250 mm46 mm，5 m)，流動相為l 醋酸溶液(用乙二胺調(diào)pH 至37)一甲醇(60：40)，流速為10 mLmin-1，檢測波長272 nm，柱溫30 。結(jié)果對乙酰氨基酚、咖啡因進樣量分別在0122230555 g和0007 48201871 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，r分別為10000和10000(n=6)，平均加樣回收率分別為9954 (RSD=066 )和10043 (RSD=092 )4。高效液相色譜法測定復方乳酸左氧氟沙星緩釋滴鼻液中兩組分含量：采用Dionex C18柱(46 mm250 mm，5m)，以乙腈-0.02molL -1磷酸二氫鉀溶液

7、(17：83，含02三乙胺，磷酸調(diào)pH 35)為流動相，流速為1 mLmin-1，檢測波長為217 nm5。高效液相色譜法測定復方痛風定顆粒中秋水仙堿含量：色譜柱：AgilentHC-C18柱(46 mm250 mm，5m)，流動相：甲醇一水(45：55)；檢測波長：245 nm；柱溫：25 ，流速10 mLmin-1；進樣量l0 L；分離度不低于20，理論塔板數(shù)以秋水仙堿峰面積計算不低于3 0006。高效液相色譜法測定狼瘡靈顆粒中芍藥苷的含量：采用高效液相色譜法，色譜柱：Hypersil ODS-2(150 mm X 4.6 mm，5.0m)；流動相： 乙腈一04的磷酸水溶液(10：90)；

8、檢測波長：230 nm；流速：10 mLmin，柱溫：257。除了以上這些例子意外，高效液相色譜還可應用于其他各種藥品中有機物或無機物濃度的檢測，如：高效液相色譜法測定排石利膽片中芍藥苷的含量，高效液相色譜法測定小兒清解沖劑中連翹苷含量，高效液相色譜法檢查骨筋丸膠囊中非法添加的松香酸等8-10。高效液相色譜檢測的方法重復性好、快速可行、操作簡單、簡捷準確、結(jié)果準確并且可靠，可用于控制各種藥品中有效成分的質(zhì)量。并且可以廣泛應用。2.2高效液相色譜在檢測制藥廢水中的應用制藥廢水中的殘留藥物成分對環(huán)境造成的污染越來越嚴重, 制藥廢水的治理已成為環(huán)境保護工作中相當重要的方面。所以檢測制藥廢水也是生物制

9、藥工業(yè)下游技術中很重要的一個組成部分。高效液相色譜也可應用于測定制藥廢水中相關物質(zhì)的含量，如：高效液相色譜法同時測定制藥廢水中的交沙霉素、茶堿及撲熱息痛。同時測定制藥廢水中殘留的茶堿、撲熱息痛、交沙霉素3種藥物的高效液相色譜方法。樣品經(jīng)固相萃取處理后進行色譜分析。采用的色譜條件： 色譜柱為Hypersil ODS 柱( 4.6 mm i d X 200 mm) ；流動相A 液為0.025 mol/ L KH2PO4-H3PO4 緩沖液( pH 2.75)，流動相B液為甲醇；梯度洗脫；紫外檢測波長為230 nm(交沙霉素)、272 nm(茶堿)、243 nm(撲熱息痛) 。制藥廢水中3 種藥物的

10、加標回收率均高于93%, 相對標準偏差(n = 6) 小于2.1% , 檢測下限( S / N = 3) 不高于1.0g/ L?？梢酝ㄟ^檢測制藥廢水，尋找合適的方法去除在制藥廢水中對環(huán)境有害的物質(zhì)，對環(huán)境保護，清潔生產(chǎn)具有比較重要的意義。3.結(jié)論高效液相色譜簡便、快速、靈敏、準確，在醫(yī)藥、衛(wèi)生、食品、環(huán)保等各個領域已得到廣泛應用。今后會在更多領域有著更多的應用，高效液相色譜分析法在生物制藥方面有著廣泛的應用前景。參考文獻：1 王淑靜, 畢建杰, 柳洪潔等. 高效液相色譜使用中常見問題及對策J. 實驗室研究與探索, 2010, 29(11): 10- 12.2 張潤香. LC10AD高效液相色譜

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