1、微生物與免疫學實驗,主要內(nèi)容：實驗室規(guī)則 免疫細胞 油鏡的使用 示教片 操作 作業(yè),實驗室規(guī)則,一般規(guī)則 “無菌”安全：穿白大衣 不能吃東西 禁止追跑打鬧 物品按指定地點存放 肥皂洗手，消毒液泡手,實驗室規(guī)則 1、只帶書籍、文具等實驗相關(guān)物品進入實驗室。 2、必須穿工作衣，離室時脫下并反折。 3、嚴禁在實驗室吃東西，不得隨地吐痰。 4、實驗中不得隨便走動，應保持安靜、有序。 5、實驗器材使用后按要求擺放，有菌的器材按要求浸泡于消毒液中。實驗器材如有損壞，及時報告并登記。 6、實驗完畢應打掃實驗室衛(wèi)生，關(guān)閉門窗水電，洗手清潔后方可離室。,無菌觀念 嚴格貫徹“無菌概念”的培養(yǎng)和訓練，嚴格實施“無菌

2、操作”。 實驗中如發(fā)生意外，如菌液灑在桌面或含活菌的實驗器材損壞使細菌溢出，污染衣物手指等，應立即報告老師，及時進行消毒處理。 吸過菌液的吸管等要放在0.1%新潔爾滅溶液中，不得放在桌上，更不可沖洗于水槽內(nèi)。用過的帶菌玻片也應放于含消毒液的容器內(nèi)。,吞噬細胞 大吞噬細胞 小吞噬細胞,免疫細胞,（單核巨噬細胞吞噬大顆粒異物）,（中性粒細胞對小顆粒物質(zhì)的吞噬）,大、小吞噬細胞 大吞噬細胞巨噬細胞 小吞噬細胞中性粒細胞,中性粒細胞（小吞噬細胞）,存在部位：血液、炎癥部位（全身），是白細胞中數(shù)量最多的一種。 功能基礎：溶酶體，過氧化物酶及殺菌物質(zhì)。 作用：趨化作用 吞噬功能 功能：主要吞噬化膿菌 反應

3、時間及壽命：反應時間快， 數(shù)分鐘到幾小時，壽命短， 平均數(shù)小時。,單核巨噬細胞,包括骨髓內(nèi)的前單核細胞，外周血中的單核細胞和組織內(nèi)的巨噬細胞。 骨髓內(nèi)中的髓樣干細胞受某些細胞因子的作用發(fā)育成前單核細胞。前單核細胞進一步發(fā)育成為單核細胞進入血流。然后移行至全身各組織器官內(nèi)，發(fā)育成熟為巨噬細胞。,重要功能： 吞噬殺傷作用 參與和促進炎癥反應 殺傷靶細胞 加工、遞呈抗原 免疫調(diào)節(jié) 在機體防御和來源于細菌等感染性微生物的免疫應答中發(fā)揮重要的作用,吞噬過程,示教片,大吞噬:單核巨噬細胞吞噬大顆粒異物,大吞噬現(xiàn)象 1、淀粉溶液注入豚鼠腹腔內(nèi) 2、次日再注入淀粉溶液，1小時后腹腔注入雞血球懸液 3、血球注入

4、后1小時吸取豚鼠腹腔液，瑞氏染色 4、油鏡觀察，可見巨噬細胞內(nèi)吞噬有雞血球,示教片,大吞噬實驗,小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞現(xiàn)象,瑞式染色,吞噬了雞紅細胞 的吞噬細胞,雞紅細胞,操作：小吞噬（中性粒細胞對小顆粒物質(zhì)的吞噬）,原理：血液中的中性粒細胞即小吞噬細胞，通過趨化、調(diào)理、吞入和殺菌等幾個步驟，能吞噬和消化衰老、死亡細胞及病原微生物等異物，是機體非特異性免疫的重要組成部分。 材料：1.葡萄球菌菌液 2. 抗凝人血（3.8%枸櫞酸鈉）、瑞氏染液、雙蒸水 3. 酒精棉球、香柏油 器材：采血針1根/人，棉簽3根/人， 載玻片1張/人，雙凹片2張/2人， 抗凝劑1支/桌，細菌1支/桌， 酒精燈1個

5、/2人，接種環(huán)1個/2人。,瑞氏染色法,1.瑞氏染料 由酸性染料伊紅（E-）和堿性染料亞甲藍（M+）組成。伊紅通常為鈉鹽，有色部分為陰離子。亞甲藍（又名美藍）為四甲基硫堇染料，有對醌型和鄰醌型兩種結(jié)構(gòu)。通常為氯鹽，即氯化美藍，有色部分為陽離子。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料（即天青）。將適量伊紅、美藍溶解在甲醇中，即為瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美藍和伊紅；二是固定細胞形態(tài)。 2.染色原理 既有物理的吸附作用，又有化學的親和作用。各種細胞成分化學性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細胞核蛋白、淋巴

6、細胞、嗜堿性粒細胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍或天青結(jié)合，染紫藍色或藍色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合，染淡紫紅色，稱為嗜中性物質(zhì)。 原始紅細胞、早幼紅細胞胞質(zhì)、核仁含較多酸性物質(zhì)，染成較濃厚的藍色；中幼紅細胞既含酸性物質(zhì)，又含堿性物質(zhì)，染成紅藍色或灰紅色；完全成熟紅細胞，酸性物質(zhì)徹底消失后，染成粉紅色。 3.pH的影響 （pH6.4pH6.8） 細胞各種成分均屬蛋白質(zhì)，因蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液pH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多，易與伊紅結(jié)合，紅細胞和嗜酸性粒細胞染色偏紅，細胞核呈淡藍色或不染色；在偏堿性環(huán)境中負電荷增多，易與美藍結(jié)合，所有細胞呈灰藍色，顆粒

7、呈深暗，嗜酸性顆粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性顆粒偏粗，呈紫黑色。稀釋染液必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致細胞染色呈色異常，形態(tài)難以識別，甚至錯誤。 4.染色方法和注意事項 （1）血涂片干透后固定，否則細胞在染色過程中容易脫落。 （2）沖洗時應以流水沖洗，不能先倒掉染液，以防染料沉著在血涂片上。沖洗時間不能過久，以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積，可滴加甲醇，然后立即用流水沖洗。,步驟,洗手 消毒 扎手指（一針見血） 一滴抗凝劑 雙凹片 2滴血，用針混勻 點酒精燈 取菌環(huán)燒3次 取34環(huán)菌液 加入血中用取菌環(huán)混勻 溫育（37度）30分鐘 推片（慢、厚） 自然干燥 加瑞氏染液2滴1分鐘 加緩沖液4滴（染液與緩沖液比為1：2） 混勻 染10分鐘 沖洗 吸干 油鏡觀察 *紙 入盆，雙凹片、針 入瓷缸（前面），油片 入玻璃缸（后面） 泡手,油鏡的使用,保護：拿取手式 對光：升聚光器 打開光柵 反光鏡采光 觀察：標本固定載物臺上 低倍鏡找到標本 低倍鏡移開 滴香柏油 換油鏡 目鏡觀察，細調(diào)至清晰 使用完畢立即用擦鏡紙擦干鏡頭上的油 原理,結(jié)果觀察 油鏡檢查：尋找中性粒細胞，如果染色結(jié)果正確，可見細胞核及被吞噬的細菌染成紫色，而