1、常用細菌生化反應試驗,糖發(fā)酵試驗結果判斷,甲基紅試驗,原理：細菌分解糖，產(chǎn)生丙酮酸，進一步生成大量混合酸，使培養(yǎng)基pH維持在4.4以下，加入甲基紅后，使甲基紅呈現(xiàn)紅色反應。此為甲基紅試驗陽性。 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水 試劑：甲基紅試劑 結果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色： 應用：是腸道桿菌常用的生化反應試驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌,伏普試驗（V-P試驗）,原理：細菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中乙酰甲基甲醇被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基結合，生成紅色化合物。 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水 結果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色

2、：+ 培養(yǎng)基不變色： 應用：是腸道桿菌常用的生化反應試驗，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌,葡萄糖,丙酮酸,大量混合酸,pH降至4.4以下,甲基紅試劑,培養(yǎng)基變紅,甲基紅試驗,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P試劑,培養(yǎng)基變紅,VP試驗,脫酸,葡萄糖發(fā)酵形成丙酮酸后的不同代謝途徑,葡萄糖,丙酮酸,大量混合酸,pH降至4.4以下,甲基紅試劑,培養(yǎng)基變紅,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P試劑,培養(yǎng)基變紅,脫酸,蛋白質(zhì)類代謝試驗,靛基質(zhì)試驗 硫化氫試驗 苯丙氨酸脫氨試驗 尿素酶試驗,靛基質(zhì)試驗,原理：細菌產(chǎn)生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)與試劑對二甲基氨基苯甲醛作

3、用，生成玫瑰靛基質(zhì)。 培養(yǎng)基：蛋白胨水 試劑：靛基質(zhì)試劑（含對二甲基氨基苯甲醛） 結果：加入試劑后，培養(yǎng)基出現(xiàn)紅色液面：+ 培養(yǎng)基液面為黃色： 應用：用于腸道桿菌的鑒定,靛基質(zhì)試驗原理,色氨酸酶,色氨酸,靛基質(zhì) （吲哚）,玫瑰靛基質(zhì) （玫瑰吲哚）,對二甲基氨基苯甲醛,硫化氫試驗,原理：細菌分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽或鉛鹽結合生成黑色絡合物。 培養(yǎng)基：含硫酸亞鐵或醋酸鉛的培養(yǎng)基 結果：培養(yǎng)基 變黑 為陽性，不變黑為陰性 應用：常用于腸道桿菌的鑒定,苯丙氨酸脫氨實驗,原理：細菌的具有的苯丙氨酸脫氨酶，可使培養(yǎng)基中的苯丙氨酸脫氨，形成苯丙酮酸，后者與三氯化鐵作用，形

4、成綠色化合物。 培養(yǎng)基：苯丙氨酸瓊脂 試劑：10三氯化鐵 結果：加入試劑后培養(yǎng)基呈現(xiàn)綠色為陽性 應用：多用于腸道桿菌的鑒定,苯丙氨酸脫氨試驗原理,苯丙氨酸,苯丙氨酸脫氨酶,苯丙酮酸,10三氯化鐵,綠色化合物,尿素酶試驗,原理：產(chǎn)生脲酶的細菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色。 培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基 試劑：酚紅指示劑 結果：培養(yǎng)基變紅：+ 培養(yǎng)基不變色 應用：腸桿菌科屬間鑒定,尿素酶試驗原理,尿素,尿素酶,氨+CO2,培養(yǎng)基pH升高,酚紅呈堿性變色,枸櫞酸鹽利用試驗,原理：某些細菌能力利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的銨鹽 作為唯一碳源，細菌生長過程中分解枸櫞酸鹽產(chǎn)

5、生碳酸鹽和分解銨鹽生成的氨，使培養(yǎng)基變堿，是指示劑呈堿性反應。 培養(yǎng)基：枸鹽酸鹽培養(yǎng)基 試劑：溴麝香草酚藍（pH6.0以下呈黃色，pH7.6以上呈藍色） 結果：培養(yǎng)基變藍：+ 培養(yǎng)基不變色： 應用：腸桿菌科屬間鑒別,枸櫞酸鹽利用試驗原理,枸櫞酸鹽,銨鹽,碳酸鹽,氨,培養(yǎng)基pH下降,溴麝香草酚藍 呈堿性變色,培養(yǎng)基變藍,培養(yǎng)基,糖發(fā)酵試驗,甲基紅試驗,靛基質(zhì)試驗,血清學試驗,血清學鑒定： 用已知抗體鑒定未知的細菌或標本中的抗原 血清學診斷： 用已知抗原檢測血清中的特異性抗體,血清學鑒定,試劑（診斷血清） ：含抗體 檢測對象：特異性抗原 方法：直接凝集試驗（玻片法）、莢膜腫脹試驗,傷寒桿菌診斷血清

6、 （含抗傷寒桿菌抗體）,+ 待檢測細菌,細菌凝集,玻片凝集試驗：陽性,報告：檢出傷寒桿菌,血清學診斷,試劑：含已知抗原 應用：檢測待檢者血清中有無相應的抗體以及抗體的效價,球 菌,種類: 革蘭陽性 葡萄球菌屬、鏈球菌屬（鏈球菌、肺炎鏈球菌）、腸球菌屬、微球菌屬等 革蘭陰性 奈瑟菌屬、布蘭漢菌屬,四種革蘭陽性菌的比較,葡萄球菌屬,最常見的化膿性球菌 醫(yī)務人員的葡萄球菌帶菌率高 革蘭陽性、葡萄串狀排列 產(chǎn)生不同的脂溶性色素 觸酶試驗陽性 發(fā)酵葡萄糖 金黃色葡萄球菌是主要致病菌,形態(tài)染色,革蘭陽性球菌、葡萄串狀排列 無鞭毛、無芽孢、一般不形成莢膜,葡萄球菌革蘭染色鏡下圖,染色性： 形態(tài)： 排列：,培

7、養(yǎng)特性,生長條件 需氧、兼性厭氧 營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好 耐鹽，1015NaCl上能生長,培養(yǎng)特性,生長現(xiàn)象 液體培養(yǎng)基：均勻混濁、少許沉淀 固體培養(yǎng)基：中等大小菌落、圓形、凸起、邊緣整齊、光滑、濕潤的S型菌落,常用培養(yǎng)基及菌落特征,血平板（營養(yǎng)培養(yǎng)基）： 中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素、透明溶血環(huán)（致病葡萄球菌） 高鹽甘露醇平板（選擇鑒別培養(yǎng)基）： 淡橙黃色菌落（致病葡萄球菌） 卵黃高鹽瓊脂平板（選擇鑒別培養(yǎng)基）： 菌落周圍形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌）,生化反應,觸酶試驗：+ 葡萄糖氧化發(fā)酵試驗：發(fā)酵+ 甘露醇分解試驗：+（致病菌株）,抗原構造,葡萄球菌A蛋白（SPA）

8、存在于金黃色葡萄球菌細胞壁 可與人和其它哺乳動物IgGFc段非特異性結合，應用于協(xié)同凝集試驗 抵抗吞噬細胞的吞噬 多糖抗原 具有型的特異性,有助于金葡菌感染的診斷,分類和分型,葡萄球菌包括32種及亞種 根據(jù)產(chǎn)生色素的不同分類 根據(jù)產(chǎn)生凝固酶與否進行分類 按噬菌體分型法分類,葡萄球菌傳統(tǒng)分類,金葡菌噬菌體分型,分型：分五個群，共22型 意義：追蹤傳染源,抵抗力,是抵抗力最強的無芽孢細菌 耐干燥 對龍膽紫敏感 易形成耐藥性：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）已成為醫(yī)院感染最常見的致病菌,致病物質(zhì),凝固酶 葡萄球菌溶素 殺白細胞素 腸毒素 剝脫毒素 毒性休克綜合征毒素1,凝固酶,游離凝固酶：采用試

9、管法檢測 結合凝固酶：采用玻片法檢測 金葡菌凝固酶試驗均為陽性 凝固酶試驗是鑒定金葡菌的重要標志,游離凝固酶,協(xié)同因子,凝血酶,纖維蛋白原,纖維蛋白,血漿凝固,結合凝固酶（位于菌體表面）,纖維蛋白原,纖維蛋白,細菌凝集,所致疾病,侵襲性疾病 化膿性感染：癤、癰、甲溝炎、中耳炎、腦膜炎、敗血癥等 毒素性疾?。?食物中毒、假膜性腸炎等,免疫性,有一定天然免疫力 病后獲得的免疫力作用不強、不持久,微生物學檢驗,細菌鑒定的基本程序,標本采集,根據(jù)病種不同，采集不同標本 膿液、創(chuàng)傷分泌液、穿刺液、血液、尿液、痰液、腦脊液、糞便,檢驗程序,膿、穿刺液、尿液、痰,腦脊液,血液,糞便、嘔吐物,增菌培養(yǎng),分離培

10、養(yǎng),分離培養(yǎng),分離培養(yǎng),直接涂片染色,鑒定試驗和藥敏試驗,菌落涂片染色,血漿凝固酶,耐熱核酸酶,藥敏試驗,其它試驗,報告,金葡菌膿標本檢驗程序,膿標本,分離培養(yǎng)(血平板),直接涂片染色,鑒定試驗和藥敏試驗,報告,涂片染色,檢驗方法直接鏡檢,方法:取標本直接涂片,革蘭染色后鏡檢 初步報告: “查見革蘭陽性葡萄串狀排列球菌，疑似葡萄球菌” “查見革蘭陽性球菌”,檢驗方法分離培養(yǎng),膿、痰、腦脊液標本接種血平板 菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性色素、透明溶血環(huán)（-溶血環(huán)）,檢驗方法分離培養(yǎng),糞便標本高鹽甘露醇平板 菌落特征：光滑型、中等大小、淡黃色菌落,檢驗方法分離培養(yǎng),血標本增菌（葡萄糖肉湯）分離

11、培養(yǎng)（血平板） 生長現(xiàn)象：混濁、膠胨狀凝固、溶血,金葡菌的鑒定依據(jù),血平板上金黃色色素、-溶血環(huán) 血漿凝固酶 + 發(fā)酵甘露醇 + 耐熱核酸酶 +,凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）,條件致病菌 醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌 對多種抗生素耐藥,耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（MRCNS）是院內(nèi)感染的重要病原菌之一，MRSA、MRCNS對多種抗生素耐藥，MRSA不僅對青霉素類、頭孢菌素類等內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥，同時也對四環(huán)素、紅霉素、氯霉素、克林霉素及慶大霉素等常用抗菌藥物耐藥，對利褔平和磺胺的耐藥率也達30，但通常對萬古霉素敏感。MRSA、MRCNS常常引起院內(nèi)感染與播散，且難于治療和控制，病死率高。,有資料表明兩者的耐藥譜及機理都有許多相似的地方，其傳播方式是患者