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1、磁珠分選技術(shù),磁珠分選技術(shù),免疫學(xué)+細(xì)胞生物學(xué)+磁力學(xué) 基于抗體對抗原的特異性識別：免疫磁珠 磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細(xì)胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、Oligo dT磁珠 在高強度、梯度磁場中達到磁性分離的目的：分離細(xì)胞、蛋白、核酸、細(xì)菌等,磁珠 磁力架 分離柱或分離試管 MACS，Dynal，BD，StemCell，R Dynal d=4.5um2.8um1um，多聚材料包被的氧化鐵超順磁微球；均一性好；也適用于細(xì)胞活化； BD d200nm，超順磁化微粒；包被了高質(zhì)量的BD抗體； StemCell 管式；柱式; R 再加入鏈酶親和素標(biāo)記的磁珠,應(yīng)用去除法分選人

2、外周血中的B細(xì)胞,先去除非目的細(xì)胞，再進行陽性分選。 非目的細(xì)胞也表達用來陽性選擇目的細(xì)胞的抗原；要分選非常稀有細(xì)胞，先去除非目的細(xì)胞再行陽性分選，可獲得高純度的目的細(xì)胞。,標(biāo)記去除非目的細(xì)胞,標(biāo)記目的細(xì)胞,洗脫目的細(xì)胞,應(yīng)用：分選人外周血中的CD4+CD25+ T細(xì)胞,分選前,去除分選后,陽性分選后的陰性組分,陽性分選后的陽性組分,洗脫目標(biāo)細(xì)胞,用標(biāo)記1標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞,用標(biāo)記2標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞,去除磁珠標(biāo)記,洗脫目標(biāo)細(xì)胞,進行多次連續(xù)陽性分選，進行新標(biāo)記前先去除原來的磁珠標(biāo)記。 可進行多參數(shù)分選。,應(yīng)用：分選人外周血中的CD3+CD56+ T細(xì)胞,分選前,第一次陽選,第二次陽選,優(yōu)點：操作簡單，高效快捷，無菌和細(xì)胞狀態(tài)更有保證，回收率、純度高。 缺點：不能在分選的同時進行分析，分選過程中很難去除死細(xì)胞團塊的干擾，難于同時進行多種標(biāo)記物的分選。,分選前標(biāo)本處理 密度梯度離心(Ficoll, Percoll) （根據(jù)情況）溶血(溶解紅細(xì)胞) 過濾(單個細(xì)胞) 分選標(biāo)本：不含有死細(xì)胞或者碎片的單細(xì)胞懸液 骨髓、外周血、臍帶血提取的單個核細(xì)胞 處理的組織細(xì)

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