1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件,南華大學(xué)病原學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心 Etiology Experimental Teaching Center of University of South China,一、微生物的分布及理化因素對(duì)微生物的影響 1、空氣中微生物的檢查（示教） 2、手指皮膚消毒前后微生物的檢查（示教） 3、紫外線殺菌試驗(yàn)（自做，2人/組） 4、抗生素敏感試驗(yàn)（示教） 二、細(xì)菌的分解代謝產(chǎn)物和細(xì)菌的生化反應(yīng)（示教）,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：,實(shí)驗(yàn)名稱：細(xì)菌的新陳代謝和消毒滅菌,一、微生物的分布,微生物分布非常廣泛。 通過對(duì)外界微生物的檢查，了解微生物在自然界中的分布，從而樹立“有菌觀點(diǎn)”，認(rèn)識(shí)“無菌操作” 對(duì)于微

2、生物學(xué)及醫(yī)學(xué)實(shí)踐的重要性。,實(shí)驗(yàn)操作步驟：,1取瓊脂平板2個(gè)，一個(gè)啟開皿蓋，培養(yǎng)基面向上，放在實(shí)驗(yàn)桌上，30min后蓋好皿蓋。另1個(gè)平板，不啟開蓋作為對(duì)照。 22個(gè)平板均置37培養(yǎng)1824h，觀察結(jié)果。,空氣中微生物的檢查,1、消毒（disinfection）：殺滅物體上或環(huán)境中的病原微生物、并不一定殺死細(xì)菌芽胞或非病原微生物的方法。 消毒劑（disinfectant）：用以消毒的藥品,2、滅菌（sterilization） ：殺滅物體上所有微生物的方法，包括殺滅細(xì)菌芽胞、病毒和霉菌在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。,（一）消毒滅菌的常用術(shù)語:,二、理化因素對(duì)微生物的影響,3、防腐（anti

3、sepsis）,防止或抑制皮膚表面細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。 防腐劑（antiseptic）：用以防腐的藥物。,4、無菌（asepsis）： 不存在活菌的意思，多是滅菌的結(jié)果。,5、無菌操作(aseptic technique)： 防止細(xì)菌及其他微生物進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)。,（二） 消毒滅菌的方法,物理方法,化學(xué)方法,輻射殺菌法,濾過除菌法,干燥和低溫抑菌法等,熱力滅菌法,干熱滅菌法,濕熱滅菌法,紫外線,電離輻射,微波,常用的化學(xué)消毒劑：乙醇、含碘消毒劑、過氧乙酸、過氧化氫、高錳酸鉀、新潔爾滅等。,1、高壓蒸汽滅菌法,103.4kPa（1.05kg/cm2) （121.3 ，維持1520mi

4、n ）,滅菌效果最好，可殺滅包括細(xì)菌芽胞在內(nèi)的所用微生物。 常用于一般培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等耐高溫、耐濕物品的滅菌。,高壓蒸汽滅菌器,2、手指皮膚消毒前后微生物的檢查 絡(luò)合碘對(duì)細(xì)菌的作用（示教）,（1）取瓊脂平板1個(gè)，將底面分成兩等份，注明A/B。 （2）用無菌棉簽蘸生理鹽水，在左手食指頭上涂擦。用該指頭在平板A處瓊脂表面涂抹，作為消毒前的對(duì)照。 （3）用棉簽蘸絡(luò)合碘消毒左手食指。待絡(luò)合碘干后，依上法在平板B處瓊脂表面涂抹。 （4）置平板于37培養(yǎng)1824h。,平板A處瓊脂表面有細(xì)菌生長(zhǎng)，B處不長(zhǎng)細(xì)菌或出現(xiàn)極少的菌落。說明一定濃度的絡(luò)合碘能殺滅細(xì)菌。,【結(jié)果】,3、抗生素敏感試驗(yàn)（示教）

5、,一種抗生素只對(duì)一定種類的生物細(xì)胞有拮抗作用，這種作用范圍稱抗菌譜。 抗生素的抗菌機(jī)制 影響細(xì)胞壁的合成； 損傷或破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)； 干擾細(xì)胞碳水化合物的代謝； 抑制核酸或蛋白質(zhì)的合成，這些作用都有一定的選擇性。,觀察紙片周圍有無抑菌圈，并量出抑菌圈直徑大小，得出待測(cè)菌對(duì)所試抗生素的敏感性。,紙片瓊脂擴(kuò)散法試驗(yàn)程序,（a）挑取菌落 （b）轉(zhuǎn)種肉湯 （c）比濁 （d）涂布平板上 （e）放置藥敏紙片 （f）量取抑菌圈大小,4、紫外線殺菌實(shí)驗(yàn),（1）原理：,（2）特 點(diǎn), 穿透力較弱； 僅能殺死細(xì)菌的繁殖體，不能殺死細(xì)菌的芽胞。,（3）臨床應(yīng)用 僅用于實(shí)驗(yàn)室、傳染病房、手術(shù)室的空氣或不耐熱物品的表面

6、消毒。 注意事項(xiàng)： 紫外線可損傷皮膚、眼睛，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。,三、細(xì)菌的分解代謝產(chǎn)物和細(xì)菌的生化反應(yīng),細(xì)菌的新陳代謝,分解代謝,合成代謝,熱原質(zhì),毒素與侵襲性酶,色素,抗生素,細(xì)菌素,維生素,合成代謝產(chǎn)物,細(xì)菌的分解代謝產(chǎn)物和生化反應(yīng)（示教）,細(xì)菌對(duì)糖、蛋白質(zhì)的分解能力的不同，因而代謝產(chǎn)物各異，利用生物化學(xué)方法鑒別不同細(xì)菌稱為細(xì)菌的生化反應(yīng)。,糖發(fā)酵試驗(yàn)：,葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)：,吲哚試驗(yàn)（Indole test):,甲基紅試驗(yàn)(Methy red test):,VP試驗(yàn)：,枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（Citrate utilizatio)：,IMViC試驗(yàn) 大腸桿菌：+ - - 產(chǎn)氣桿菌：- + +,第1頁：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 一、微生物的分布及理化因素對(duì)微生物的影響 1、空氣中微生物的檢查（示教） 2、手指皮膚消毒前后微生物的檢查（示教） 3、