1、 分子生物學(xué) 復(fù)習(xí)提綱一名詞解釋（1）ori ：原核生物基因質(zhì)粒的復(fù)制起始位點，是四個高度保守的19bp組成的正向重復(fù)序列，只有ori能被宿主細胞復(fù)制蛋白質(zhì)識別的質(zhì)粒才能在該種細胞中復(fù)制。 ars：自主復(fù)制序列，是真核生物dna復(fù)制的起點，包括數(shù)個復(fù)制起始必須的保守區(qū)。不同的ars序列的共同特征是一個被稱為a區(qū)的11bp的保守序列。（2）promoter：啟動子，與基因表達啟動有關(guān)的順式作用元件，是結(jié)構(gòu)基因的重要成分，它是位于轉(zhuǎn)錄起始位點5端上游區(qū)大約100200bp以內(nèi)的具有獨立功能的dna序列，能活化rna 聚合酶，使之與模板準(zhǔn)確地相結(jié)合并具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性。（3）r-independe

2、nt termination不依賴r因子的終止，指在不依賴r因子的終止反應(yīng)中，沒有任何其他因子的參與，核心酶也能在某些位點終止轉(zhuǎn)錄。（強終止子）（4）sd sequence：序列（核糖體小亞基識別位點），存在于原核生物起始密碼上游個核苷酸處的一種個核苷酸的保守片段，它與端反向互補，所以可以將mrna的aug起始密碼子置于核糖體的適當(dāng)位置以便起始翻譯作用。 kozak sequence：存在于真核生物mrna的一段序列，核糖體能夠識別mrna上的這段序列，并把它作為翻譯起始位點。（5）operator：操縱基因，與一個或者一組結(jié)構(gòu)基因相鄰近，并且能夠與一些特異的阻遏蛋白相互作用，從而控制鄰近的結(jié)

3、構(gòu)基因表達的基因。operon：操縱子，是指原核生物中由一個或多個相關(guān)基因以及轉(zhuǎn)錄翻譯調(diào)控元件組成的基因表達單元。包括操縱基因、結(jié)構(gòu)基因、啟動基因。（6）enhancer：增強子，能強化轉(zhuǎn)錄起始的序列的為增強子或強化子silencer：沉默子，可降低基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性的一段dna順式元件。與增強子作用相反。（7）cis-acting element ：順式作用元件，存在于基因旁側(cè)序列中能影響基因表達的序列，包括啟動子、增強子、調(diào)控序列和可誘導(dǎo)元件，本身不編碼任何蛋白質(zhì)，僅僅提供一個作用位點，與反式作用因子相互作用參與基因表達調(diào)控。trans-acting factor：反式作用因子，是指直接或

4、間接地識別或結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。具有三個功能結(jié)構(gòu)域，即dna結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄結(jié)合域、結(jié)合其他結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)域。（8）open reading frame (orf)：開放式閱讀框架，是指一組連續(xù)的含有三聯(lián)密碼子的能夠被翻譯成為多肽鏈的dna序列。它由起始密碼子開始，到終止密碼子結(jié)束。（9）gene：基因，產(chǎn)生一條多肽鏈或功能rna所需的全部核苷酸序列。（能轉(zhuǎn)錄且具有生物學(xué)功能的dna/rna的序列。）（10）dna denaturation：dna變性，dna雙鏈的氫鍵斷裂，最后完全變成單鏈的過程。 hyperchromatic effect：增色效應(yīng)，

5、在變性過程中，260nm紫外線吸收值先緩慢上升，當(dāng)達到某一溫度時驟然上升，稱為增色效應(yīng)。 復(fù)性（renaturation)：熱變性的dna緩慢冷卻，單鏈恢復(fù)成雙鏈。dna melting temperature (tm)：溶解溫度，變性過程紫外線吸收值增加的中點稱為融解溫度。生理條件下為8595。 (11) rna splicing：的剪接，snrna形成剪接體，剪接信號為gu（供體）ag（受體）從mrna前體分子中切除內(nèi)含子，而使外顯子拼接形成成熟的過程。intron ：內(nèi)含子，存在于原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物或基因組dna中，但不包括在成熟mrna、rrna或trna中的那部分核苷酸序列。exon：外顯

6、子，基因組dna中出現(xiàn)在成熟rna分子上的序列。(12) rnai：rna干涉，是利用雙鏈小rna的高效、特異性降解細胞內(nèi)同源mran，從而阻斷體內(nèi)靶基因表達，使細胞出現(xiàn)靶基因缺失表型的方法。(13) polymerase chain reaction (pcr)：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是體外酶促合成特異dna片段的一種方法,由高溫變性(9297)、低溫退火（4555復(fù)性）及適溫延伸(72、taq酶)等幾步反應(yīng)組成一個周期,循環(huán)進行,使目的dna得以迅速擴增。(14) southern blot：dna印跡雜交，指利用具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程

7、是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內(nèi)切限制酶分析的結(jié)果，便可繪制出dna分子的限制圖譜，此即dna印跡雜交。northern blot：rna印跡雜交，首先通過電泳的方法將不同的rna分子依據(jù)其分子量大小加以區(qū)分，然后通過與特定基因互補配對的探針雜交來檢測目的片段。western blot：蛋白質(zhì)印跡。通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。二簡答和問答題1rna的種類和功能答：mrna、trna、rrna、反義rna、snrna，等等。mrna，信使

8、rna，功能就是把dna上的遺傳信息精確無誤地轉(zhuǎn)錄下來，決定蛋白質(zhì)的氨基酸順序，完成遺傳信息傳遞過程。trna，轉(zhuǎn)運， 根據(jù)mrna的遺傳密碼依次準(zhǔn)確地將它攜帶的氨基酸連結(jié)起來形成多肽鏈。rrna，核糖體，一般與核糖體蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成核糖體。反義rna，與mrna互補的rna分子，從而抑制mrna的翻譯，參與基因表達的調(diào)控。snrna，小核rna，是真核生物轉(zhuǎn)錄后加工過程中rna剪接體的主要成分。上述各種rna分子均為轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物，mrna最后翻譯為蛋白質(zhì)，而rrna、trna及snrna等并不攜帶翻譯為蛋白質(zhì)的信息，其終產(chǎn)物就是rna。grna，引導(dǎo)rna，真核生物中參與rna編輯的具有

9、與mrna互補序列的rna。2dna半保留和半不連續(xù)復(fù)制答：dna 半保留復(fù)制是：dna 在進行復(fù)制的時候鏈間氫鍵斷裂，雙鏈解旋分開，每條鏈作為模板在其上合成互補鏈，經(jīng)過一系列酶的作用生成兩個新的dna分子。 子代dna分子 其中的一條鏈來自親代dna ，另一條鏈?zhǔn)切潞铣傻?，這種方式稱半保留復(fù)制。半不連續(xù)復(fù)制是由于dna雙螺旋的兩股單鏈?zhǔn)欠聪蚱叫?，一條鏈的走向為53,另一條鏈為35,dna的兩條鏈都能作為模板以邊解鏈邊復(fù)制方式，同時合成兩條新的互補鏈。但是，所有已知dna聚合酶的合成方向都是53，所以在復(fù)制是，一條鏈的合成方向和復(fù)制叉前進方向相同，可以連續(xù)復(fù)制，稱為前導(dǎo)鏈；另一條鏈的合成方向與

10、復(fù)制叉前進方向相反，不能順著解鏈方向連續(xù)復(fù)制，必須待模板鏈解開至足夠長度，然后從53生成引物并復(fù)制子鏈。延長過程中，形成岡崎片段，要等待下一段有足夠長度的模板，再次生成引物而延長，然后連接起來，這條鏈稱滯后鏈。因此就把前導(dǎo)鏈連續(xù)復(fù)制，隨從鏈不連續(xù)復(fù)制的復(fù)制方式稱為半不連續(xù)復(fù)制。3端粒酶的工作原理答：原核生物的染色體是環(huán)狀的，其5最末端崗崎片段的rna引物被降解后可借助另半圈dna鏈向前延伸來填補。但真核生物線性dna在復(fù)制后，不能填補5末端的空缺，從而會使5末端序列因此而縮短。真核生物通過形成端粒結(jié)構(gòu)來解決此問題，復(fù)制使端粒5末端縮短，而端粒酶可外加重復(fù)單位到5末端上，結(jié)果便是維持端粒一定的長

11、度。端粒酶是一種含有rna鏈的逆轉(zhuǎn)錄酶，它以所含的rna引物為模板來合成dna端粒結(jié)構(gòu)。端粒酶可結(jié)合到端粒的3末端上，rna引物的5末端識別dna的3末端堿基并相互配對，以rna鏈為模板使dna鏈延伸，合成一個重復(fù)單位（tttaggg）后 ，酶再向前移動一個單位。合成結(jié)束后，端粒的3單鏈末端折回作為引物，合成其互補鏈。4原核dna復(fù)制過程中遺傳信息的保真機制答：dna聚合酶iii亞基具有3到5核酸外切酶的活性，在聚合過程中其有校對作用。（dna聚合酶iii的復(fù)雜亞基結(jié)構(gòu)（由10種亞基組成）使其具有更高的忠實性、協(xié)同性和持續(xù)性，如無校對功能，復(fù)制出錯率僅為710-6，具有校對功能后降低至510-

12、9。）dna聚合酶i在dna復(fù)制中起著，識別甲基化母鏈，切除、修復(fù)錯誤復(fù)制的核苷對的作用。dna聚合酶ii也在復(fù)制中起修復(fù)復(fù)制錯誤的能力。綜上所述，所以dna的復(fù)制有著高度的保真性。5*原核和真核復(fù)制，mrna轉(zhuǎn)錄，蛋白翻譯，基因表達調(diào)控的異同答：復(fù)制：原核生物與真核生物dna復(fù)制共同的特點：分為起始、延伸、終止三個過程；必須有提供3羥基末端的引物；親代dna分子為模板，四種脫氧三磷酸核苷(dntp)為底物，多種酶及蛋白質(zhì) ：dna拓撲異構(gòu)酶、dna解鏈酶、單鏈結(jié)合蛋白、引物酶、 dna聚合酶、rna酶以及dna連接酶等;一般都為半保留復(fù)制、半不連續(xù)復(fù)制。原核生物與真核生物dna復(fù)制不同的特點

13、：真核生物為線性dna,具有多個復(fù)制起始位點，形成多個復(fù)制叉，dna聚合酶的移動速度較原核生物慢。原核生物一般為環(huán)形dna，具有單一復(fù)制起始位點。真核生物dna復(fù)制只發(fā)生在細胞周期的s期，一次復(fù)制開始后在完成前不再進行復(fù)制，原核生物多重復(fù)制同時進行。真核生物有多個復(fù)制子大小不一且并不同步。原核生物只有一個復(fù)制子。真核生物有五種dna聚合酶，需要mg+。主要復(fù)制酶為dna聚合酶（），引物由dna聚合酶合成。原核生物只有三種，主要復(fù)制酶為dna聚合酶iii。真核生物末端靠端粒酶（部分細胞）補齊，而原核生物以多聯(lián)體的形式補齊。真核生物岡崎片段間的rna引物由核酸外切酶mf1去除，而原核生物引物由dn

14、a聚合酶i去除。轉(zhuǎn)錄：原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄共同的特點：都分為分為起始、延伸、終止三個過程；都有啟動子、終止子或終止信號、調(diào)控序列；所需原料都有聚合酶、等。原核生物與真核生物mrna轉(zhuǎn)錄不同的特點： 真核生物轉(zhuǎn)錄起始,延伸, 終止都需要因子的幫助 原核的啟動子為-10box和-35box，真核為tatabox。 真核生物要進行5加帽 (轉(zhuǎn)錄早期進行30 nt) 、 3加尾 (前體mrna加polya) 、切除內(nèi)含子 、 編輯和修飾。 原核生物mrna, trna, rrna 都 由同一種rna聚合酶轉(zhuǎn)錄而真核是三種不同的酶。 原核生物轉(zhuǎn)錄終止是依靠終止子（發(fā)夾結(jié)構(gòu)），真核生物是依賴轉(zhuǎn)錄信號（a

15、au、aag）蛋白質(zhì)翻譯：原核生物與真核生物蛋白質(zhì)翻譯的共同特點： 都分三步進行，即翻譯的起始、肽鏈的延伸、肽鏈的終止及釋放 遺傳密碼相同原核生物與真核生物蛋白質(zhì)翻譯不同的特點： 翻譯起始核糖體識別序列原核是序列且有多個，真核是先通過5cap序列上的帽結(jié)合蛋白，找到mrna，再通過kozak序列找到翻譯起始aug進入p位。 原核是轉(zhuǎn)錄與翻譯相耦聯(lián)，故翻譯也在細胞核內(nèi)，而真核翻譯在細胞核外。 原核翻譯起始trna為fmet-trnafmet ，真核為met-trnamet。 真核翻譯有復(fù)雜的后加工系統(tǒng)，如糖基化、磷酸化-去磷酸化等，原核無?；虮磉_調(diào)控：原核生物與真核生物基因表達調(diào)控相同的特點：

16、表達為多層次原核生物與真核生物基因表達調(diào)控不同的特點： 原核是以操縱子進行轉(zhuǎn)錄的調(diào)控，真核是受單基因控制。 原核生物調(diào)控在2個水平（轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控、翻譯水平的調(diào)控），真核在五個水平（dna水平的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控、翻譯水平的調(diào)控、翻譯后水平的調(diào)控）進行基因表達調(diào)控。 真核生物中有選擇性剪接，原核沒有。 原核的基因表達主要受環(huán)境等調(diào)控，真核是受激素等調(diào)控。6pcr與細胞內(nèi)dna復(fù)制的異同相同點：原料都是四種脫氧核苷酸、模板、都需要引物、都是單鏈dna，都遵循堿基互補配對原則。不同點：pcr技術(shù) dna生物復(fù)制環(huán)境 體外復(fù)制， 加熱，90攝氏度左右 體內(nèi)，溫和的環(huán)境酶 主要是d

17、na聚合酶、 dna解旋酶，dna聚合酶， 引物酶 dna連接酶等各種酶 引物 需要人工合成的引物 自己合成引物成分步驟 變性-退火-延伸 解旋-起始-延伸-結(jié)束大小 一般只復(fù)制引物及以內(nèi)的片段 整個基因組起點 由引物決定 原核ori、真核ars7southern blot, northern blot, western blot三種分子生物學(xué)技術(shù)差異答：名稱檢測對象探針檢測原理處理過程用途southern blotdna標(biāo)記單鏈核酸核酸復(fù)性中堿基配對專一性瓊脂糖電泳后轉(zhuǎn)膜基因檢測（拷貝數(shù)）northern blotrna標(biāo)記單鏈核酸核酸復(fù)性中堿基配對專一性變性瓊脂糖電泳后轉(zhuǎn)膜基因表達的檢測（

18、表達量）western blot蛋白抗體抗原抗體特異性結(jié)合sds-page后轉(zhuǎn)膜基因表達產(chǎn)物蛋白的檢測8復(fù)制，轉(zhuǎn)錄，翻譯，調(diào)控中的各種保守序列及其功能復(fù)制 ori:原核生物復(fù)制起點 ars: 真核生物復(fù)制起點轉(zhuǎn)錄啟動子：決定轉(zhuǎn)錄方向及模板鏈 、轉(zhuǎn)錄效率操縱子（原核）：將轉(zhuǎn)錄與翻譯相耦聯(lián)終止子：終止轉(zhuǎn)錄翻譯sd序列：原核生物翻譯起始，sd序列的順序及位置對翻譯都有影響。kozak序列：真核生物翻譯起始調(diào)控轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控：增強子：作用于啟動子，提高轉(zhuǎn)錄活性沉默子：作用于啟動子，降低轉(zhuǎn)錄活性9乳糖操縱子和色氨酸操縱子(包括的衰減子)的工作原理答：乳糖操縱子乳糖操縱子是個弱啟動子，包括個結(jié)構(gòu)基因：、和，

19、以及啟動子、控制子和阻遏子等。乳糖操縱子負控誘導(dǎo)模式：無誘導(dǎo)物時，lac基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生阻遏物單體，結(jié)合形成同源四體，lac同源四體與操縱區(qū)（o區(qū)）dna相結(jié)合，阻遏基因轉(zhuǎn)錄?；虿槐磉_。當(dāng)有誘導(dǎo)物時，誘導(dǎo)物使lac變成不能與o區(qū)相結(jié)合的非活化形式，rna聚合酶就可以與lac啟動子區(qū)相結(jié)合，起始轉(zhuǎn)錄基因。mrna被轉(zhuǎn)錄成三個蛋白質(zhì)，即貝塔-半乳糖苷酶、貝塔-半乳糖苷透過酶、貝塔-半乳糖苷乙?；D(zhuǎn)移酶。（圖解）乳糖操縱子是個弱啟動子，在葡萄糖和乳糖都存在的情況下，大腸桿菌利用葡萄糖，是因為葡萄糖可降低camp濃度，阻礙其與cap結(jié)合，而camp-cap是激活lac的重要組成部分，lac啟動子表達受阻

20、，就沒有貝塔-半乳糖苷酶活性。不能利用乳糖。所以說lac操縱子強的誘導(dǎo)作用既需要乳糖又需缺乏葡萄糖）色氨酸操縱子色氨酸操縱子調(diào)控作用主要有三種方式:阻遏作用、弱化作用以及終產(chǎn)物trp 對合成酶的反饋抑制作用。阻遏作用:trp操縱子轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控是通過阻遏蛋白實現(xiàn)的。在有高濃度trp存在時,阻遏蛋白- 色氨酸復(fù)合物形成一個同源二聚體,并且與色氨酸操縱子緊密結(jié)合,因此可以阻止轉(zhuǎn)錄。當(dāng)trp 水平低時,阻遏蛋白以一種非活性形式存在,不能結(jié)合dna。在這樣的條件下, trp操縱子被rna聚合酶轉(zhuǎn)錄,同時trp 生物合成途徑被激活。弱化作用: trp操縱子轉(zhuǎn)錄終止的調(diào)控。在trp operon,前導(dǎo)區(qū)的

21、衰減子有4段特殊的序列，可形成不依賴因子的轉(zhuǎn)錄終止信號（衰減子的工作機理：堿基序列(即衰減子)包括4個分別以1、2、3和4表示的片段,能以兩種不同的方式進行堿基配對, 1 - 2和3 -4配對,或2 - 3配對, 3 - 4配對區(qū)正好位于終止密碼子的識別區(qū)。前導(dǎo)序列有相鄰的兩個色氨酸密碼子,當(dāng)培養(yǎng)基中trp 濃度很低時,負載有trp 的tr2natrp也就少,這樣翻譯通過兩個相鄰色氨酸密碼子的速度就會很慢,當(dāng)4區(qū)被轉(zhuǎn)錄完成時,核糖體滯留1區(qū),這時的前導(dǎo)區(qū)結(jié)構(gòu)是2 - 3配對,不形成3 - 4配對的終止結(jié)構(gòu),所以轉(zhuǎn)錄可繼續(xù)進行。反之,核糖體可順利通過兩個相鄰的 色氨酸 密碼子,在4區(qū)被轉(zhuǎn)錄之前,

22、核糖體就到達2區(qū),這樣使2 - 3不能配對, 3 - 4 區(qū)可以配對形成終止子結(jié)構(gòu), 轉(zhuǎn)錄停止。）終產(chǎn)物trp 對合成酶的反饋抑制作用 由于基因表達必然消耗一定的能源和前體物,相對于阻遏和弱化作用,反饋抑制作用更為經(jīng)濟和高效。三分析題1sds-page和雙向電泳的原理sds-page是利用sds(帶負電)和還原劑破壞蛋白的高級結(jié)構(gòu), 同時sds與蛋白定量結(jié)合, 消除蛋白之間的電荷差異,使得蛋白的遷移率主要依賴分子量 (分子小跑得快) .加上不連續(xù)電泳，即 上層為濃縮膠,可將樣品壓縮到同一起跑線, 下層為分離膠; 可獲得更高的分辨率.再用考馬斯亮藍進行染色.即可進行蛋白分子量的測定、蛋白濃度的測

23、定、蛋白的鑒定。雙向電泳是蛋白質(zhì)組學(xué)中對蛋白質(zhì)組進行研究的主要分離方法，同時能分離成百上千種蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)在第一向根據(jù)電荷的不同（等電聚焦），第二向根據(jù)分子量的不同進行分離（sds-page）。分離后對蛋白質(zhì)進行染色，根據(jù)實際分析情況，分別進行考馬斯亮蘭染色、銀染或熒光染色。2順式作用元件工作的原理答：順式作用元件，包括啟動子、增強子、調(diào)控序列和可誘導(dǎo)元件。 要與反式作用因子作用，才能促進基因表達，而反式作用因子在dna水平和轉(zhuǎn)錄水平上作用，且具有組織特異性。3dna序列與蛋白功能（表型）非線形關(guān)系答：基因具有強大的容錯機制 密碼子的簡并性，即使dna錯配發(fā)生在編碼區(qū)也不會影響蛋白的表達。 真核生物存在不表達蛋白的內(nèi)含子 基因間隔區(qū)、非編碼區(qū)等變異，不引起蛋白的變化。 變異發(fā)生在蛋白質(zhì)的非功能區(qū)，不影響蛋白質(zhì)的功能。4