1、同步熒光光譜分析法的應(yīng)用,2013級(jí)分析化學(xué) 路以洋,1 簡(jiǎn)介 2 實(shí)際應(yīng)用 3 目前工作,同步熒光分析法,常用的熒光測(cè)定方法是確定激發(fā)（或發(fā)射）波長(zhǎng)在一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描發(fā)射（或激發(fā)）光譜。同步熒光掃描技術(shù)與常用的熒光測(cè)定方法最大的區(qū)別是同時(shí)掃描激發(fā)和發(fā)射兩個(gè)單色器波長(zhǎng)由此測(cè)得的熒光強(qiáng)度信號(hào)與對(duì)應(yīng)的激發(fā)波長(zhǎng)(或發(fā)射波長(zhǎng))構(gòu)成光譜圖， 稱為同步熒光光譜。 習(xí)慣上所說的同步熒光是恒波長(zhǎng)同步熒光,恒波長(zhǎng)同步熒光法是在掃描過程中使激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)彼此間保持固定的波長(zhǎng)間隔（）。 一般值選擇stocks位移值。 具有簡(jiǎn)化譜圖、提高選擇性、靈敏度高、減少光散射干擾少等特點(diǎn)。 較多用于多組分物質(zhì)的測(cè)定或者一

2、種組分在常規(guī)測(cè)試條件下受到較大干擾時(shí)的測(cè)定。,應(yīng)用 環(huán)境分析,酚是環(huán)保檢測(cè)項(xiàng)目之一，通過同步熒光光譜篩選最佳波長(zhǎng)差，消除干擾，對(duì)酚經(jīng)行定量測(cè)定，并用于大氣中酚的測(cè)定。 用同步熒光分析法測(cè)定工業(yè)及生活廢水中微量十二烷基苯磺酸鈉2。,二 食品檢測(cè),如測(cè)定奶粉中VB1 和VB6的含量3，VB1為非熒光物質(zhì)，通常測(cè)硫胺素氧化物的熒光強(qiáng)度， 在VB1、VB6共存時(shí)，光譜部分重疊，因此選擇合適的波長(zhǎng)差同步掃描，方法簡(jiǎn)單快速，效果良好。,三 臨床醫(yī)學(xué),選擇波長(zhǎng)差為60nm 測(cè)量了人體子宮、子宮頸、卵巢正常組織、良性腫瘤和惡性腫瘤的同步熒光光譜， 為癌癥的早期診斷提供了更有效、快速、準(zhǔn)確的新手段。,四 蛋白質(zhì)

3、,蛋白質(zhì)的內(nèi)源熒光 蛋白質(zhì)中含有的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸是所有天然氨基酸中僅有的發(fā)熒光基團(tuán)的氨基酸，這是蛋白質(zhì)內(nèi)源熒光的來源。 用同步熒光光譜法可以分別獲得了色氨酸和酪氨酸的特征光譜。 =15nm 酪氨酸殘基光譜特征 =60nm 色氨酸殘基光譜特征,同步熒光光譜用于蛋白質(zhì)構(gòu)象的變化。色氨酸殘基的最大發(fā)射波長(zhǎng)與其所處環(huán)境的極性有關(guān)。 對(duì)于色氨酸殘基：紅移環(huán)境的疏水性降低肽鏈的伸展程度增加。 藍(lán)移環(huán)境的疏水性增強(qiáng)大分子趨向于折疊態(tài)。,同步熒光分析法在研究蛋白質(zhì)與物質(zhì)相互作用主要在兩個(gè)方面： 1.蛋白質(zhì)分子的內(nèi)源熒光被猝滅或敏化程度； 2.主要利用色氨酸最大發(fā)射波長(zhǎng)的位移來判斷蛋白質(zhì)的構(gòu)象變化。,

4、Cu()對(duì)BSA同步熒光的影響5,現(xiàn)象：隨著Cu()濃度的增大，酪氨酸殘基特征特征熒光光譜峰和色氨酸光譜峰均略有紅移。 結(jié)論：Cu()的引入使得BSA的構(gòu)象發(fā)生了改變，使得色氨酸和酪氨酸的殘基所處的微環(huán)境疏水性略有減小，表明整個(gè)BSA大分子肽鏈伸展。使-螺旋的含量減少。,PM-19對(duì)BSA同步熒光光譜的影響,現(xiàn)象：酪氨酸和色氨酸殘基熒光同時(shí)被猝滅，相比之下，色氨酸殘基的熒光降低比酪氨酸殘基更顯著。最大發(fā)射波長(zhǎng)幾乎沒有改變。 結(jié)論：PM-19與BSA發(fā)生作用的結(jié)合位點(diǎn)更接近色氨酸殘基，但是沒有改變BSA的疏水腔的疏水環(huán)境，沒有改變蛋白質(zhì)的構(gòu)象。,目前研究工作進(jìn)展,鑰孔戚血藍(lán)蛋白的同步熒光光譜研,

5、熒光光譜,固定1.0*10-6mol/L KLH為樣品，做熒光激發(fā)和發(fā)射光譜。,=60nm,=15nm,初步實(shí)驗(yàn)汞對(duì)KLH同步熒光猝滅,固定KLH濃度在1.0*10-6mol/L，加入不同濃度的Hg2+與KLH反應(yīng)。 設(shè)定=60nm值，在200450nm范圍掃描同步熒光光譜。,現(xiàn)象：隨著Hg2+ 濃度的增加，色氨酸和酪氨酸的同步熒光強(qiáng)度是下降的。其中色氨酸的下降更顯著。二者的最大發(fā)射峰位沒有太大的變化。 結(jié)論： Hg2+ 對(duì)KLH的熒光有猝滅作用，說明兩者有相互作用。并且Hg2+ 與KLH的結(jié)合位點(diǎn)更接近色氨酸殘基，但沒有改變KLH的構(gòu)象。,=60nm,=15nm,進(jìn)一步工作,1.繼續(xù)前一步工作，驗(yàn)證所得的初步結(jié)果是否正確，找到合適的KLH濃度和Hg