1、1,第四節(jié) 生物材料檢驗(yàn) 質(zhì)量控制,2,實(shí)際上就是對(duì)實(shí)驗(yàn)誤差進(jìn)行控制,生物材料檢驗(yàn)的特點(diǎn)：樣品基體較復(fù)雜，大多數(shù)被測(cè)物質(zhì)是痕量組分，以g/g、g/ml或ng/g、ng/ml級(jí)水平存在； 痕量分析的突出問(wèn)題之一：易受玷污，造成被測(cè)組分的損失或引入被測(cè)組分或其它干擾組分，從而使測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生誤差。,3,檢驗(yàn)人員應(yīng)了解,整個(gè)分析過(guò)程中可能出現(xiàn)哪些誤差？ 誤差產(chǎn)生原因及其對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響； 采取有效措施，使誤差控制在允許限度內(nèi)； 同時(shí)對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并加以糾正。,4,一、生物材料檢驗(yàn)質(zhì)量控制一般方法,分析誤差產(chǎn)生于分析全過(guò)程： 樣品采集 樣品處理 分析方法 儀器和器皿,化學(xué)試劑和實(shí)驗(yàn)

2、用水 數(shù)據(jù)記錄與處理 檢驗(yàn)人員的技術(shù)水平 實(shí)驗(yàn)環(huán)境,5,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制包括,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制intralaboratorial quality control 實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制interlaboratorial quality control,6,（一）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制的基本條件,1實(shí)驗(yàn)室管理 應(yīng)建立、健全各項(xiàng)規(guī)章制度和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，要有經(jīng)驗(yàn)豐富的專(zhuān)業(yè)管理人員，從制度上杜絕質(zhì)量事故的發(fā)生，保證各項(xiàng)質(zhì)量控制措施的實(shí)施。,7,2檢驗(yàn)人員培訓(xùn),檢驗(yàn)人員的責(zé)任感和技術(shù)水平直接影響分析質(zhì)量，必須對(duì)檢驗(yàn)人員進(jìn)行專(zhuān)業(yè)技術(shù)培訓(xùn)，不斷更新知識(shí)，進(jìn)行操作訓(xùn)練和技術(shù)等級(jí)考核，強(qiáng)化對(duì)分析質(zhì)量保證工作重要性的認(rèn)識(shí)。,

3、8,3實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度 實(shí)驗(yàn)室空氣中懸浮塵埃的污染 如實(shí)驗(yàn)室空氣中塵埃達(dá)200 g/m3時(shí)，對(duì)金屬元素測(cè)定將帶來(lái)嚴(yán)重影響。,9,4儀器設(shè)備及容器,應(yīng)進(jìn)行定期檢定，以確保實(shí)驗(yàn)測(cè)量可追溯到已有的國(guó)家計(jì)量基準(zhǔn)，并進(jìn)行經(jīng)常性維護(hù)，保持其處于良好運(yùn)行狀態(tài)。 實(shí)驗(yàn)用容器表面的玷污和容器材料中雜質(zhì)成分的溶出及表面吸附是樣品污染的重要來(lái)源，不同材料的容器各具特性，適于不同的分析項(xiàng)目。,10,例如：,微量元素分析所用容器：聚四氟乙烯為最佳，其次為聚乙烯或聚丙烯制品；玻璃容器：硅硼玻璃； 容器使用前要選用合適方法進(jìn)行清洗，如3% HNO3(CP)浸泡至少一天，自來(lái)水水沖洗 ，再用純水沖洗干凈，于無(wú)煙塵

4、處晾干保存待用。 有機(jī)成分的分析則多使用玻璃器皿。,11,5化學(xué)試劑和實(shí)驗(yàn)用水,化學(xué)試劑和實(shí)驗(yàn)用水的純度是空白值的主要來(lái)源，直接影響分析結(jié)果的可靠性，特別是生物樣品前處理過(guò)程中要使用較大量的各種酸對(duì)樣品進(jìn)行消解， 必須使用純度符合要求的化學(xué)試劑， 純水的電導(dǎo)率應(yīng) 1s/cm。,12,（二）測(cè)試過(guò)程中的質(zhì)量控制,1分析方法選擇 優(yōu)先選擇國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法或有關(guān)學(xué)術(shù)團(tuán)體推薦的方法， 若無(wú)國(guó)標(biāo)方法，應(yīng)選擇靈敏度高、選擇性好、準(zhǔn)確度高、精密度好和相對(duì)快速的分析方法。,13,2樣品的采集和外理,采樣和樣品制備時(shí)，采樣器具、器皿及所用試劑是污染的又一重要來(lái)源，如微量元素測(cè)定，采樣時(shí)若使用不銹鋼刀、剪、針頭等

5、，其中Mn、Cr、Ni等的含量與生物樣品中這些元素的含量存在巨大的濃度差，使這些元素?cái)U(kuò)散至生物樣本中而產(chǎn)生玷污；,14,2樣品的采集和外理,整個(gè)分析過(guò)程往往需要較多的操作，分析人員使用化妝品、染發(fā)劑、抽煙、手觸摸樣品等都可能玷污樣品，也應(yīng)引起重視。,15,3分析誤差預(yù)評(píng)價(jià),檢驗(yàn)人員用選定的方法反復(fù)多次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，以正確掌握分析方法的原理、實(shí)驗(yàn)過(guò)程、條件及特性，并繪制出校正曲線(xiàn)。,16,3分析誤差預(yù)評(píng)價(jià),對(duì)空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液（取測(cè)定上限濃度的0.2倍和0.8倍兩個(gè)濃度）、樣品、加標(biāo)樣品四類(lèi)溶液進(jìn)行平行雙樣測(cè)定，每天測(cè)定一批，共測(cè)定6批。,17,由測(cè)定結(jié)果對(duì)分析誤差、精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行預(yù)評(píng)價(jià)：,

6、由空白實(shí)驗(yàn)的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算分析方法的檢出限； 比較各溶液的批內(nèi)變異和批間變異，檢驗(yàn)變異差異的顯著性，以判斷分析方法的精密度；,18,由測(cè)定結(jié)果對(duì)分析誤差、精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行預(yù)評(píng)價(jià)：,比較樣品、加標(biāo)樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差，判斷樣品中是否存在有影響測(cè)定精密度的干擾物質(zhì)，并確定有無(wú)消除干擾物質(zhì)的必要； 計(jì)算樣品的加標(biāo)回收率，判斷樣品中是否存在改變分析準(zhǔn)確度而不影響方法精密度的組分。,19,分析誤差預(yù)評(píng)價(jià),用標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)與試樣在完全相同的條件下進(jìn)行測(cè)定，將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果與給出的保證值相比較，若其誤差符合方法規(guī)定的不確定度，說(shuō)明方法和測(cè)定過(guò)程無(wú)系統(tǒng)誤差，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)分

7、析方法的精密度、準(zhǔn)確度合格后，即可運(yùn)用于常規(guī)樣品的檢驗(yàn)工作。,20,（三）繪制質(zhì)量控制圖,簡(jiǎn)稱(chēng)質(zhì)控圖 目的：對(duì)日常分析系統(tǒng)進(jìn)行經(jīng)常性核對(duì)，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題、分析原因、采取措施。,21,均值控制圖,最簡(jiǎn)單和常用的質(zhì)控圖 以逐步累積的20次以上“質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)樣”的測(cè)定結(jié)果計(jì)算出平均值X和標(biāo)準(zhǔn)差S，以平均值X為中心線(xiàn)，以X2S作為上、下警告限， X3S作為上、下控制限作圖，再將各測(cè)定值點(diǎn)在圖上，并用直線(xiàn)將其連接。如圖1-1所示,22,均值控制圖,23,常規(guī)樣品分析過(guò)程中，每分析一批樣品(或每測(cè)定10個(gè)樣品)插入一個(gè)“質(zhì)控樣”，與樣品平行進(jìn)行測(cè)定。 將每次測(cè)定未知樣時(shí)，所分析 的“質(zhì)控樣”所得的結(jié)果，點(diǎn)在

8、質(zhì)控圖上。 “質(zhì)控樣”測(cè)量值落在警告限內(nèi)分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠；,24,落在警告限外、控制限內(nèi)測(cè)定結(jié)果可以接受，質(zhì)量仍在控制中，但同時(shí)提示分析結(jié)果開(kāi)始變劣，可能存在失控傾向，應(yīng)進(jìn)行初步檢查，并采取相應(yīng)的校正措施，但結(jié)果仍可保留； 超出控制限測(cè)定過(guò)程失控，應(yīng)停止測(cè)定，找出原因加以糾正，并重新測(cè)定該批全部樣品。,25,質(zhì)控圖類(lèi)型,多種類(lèi)型： 均值控制圖 空白實(shí)驗(yàn)值控制圖 回收率控制圖 均值-極差控制圖等。,26,（四）實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制,定義：為保證各實(shí)驗(yàn)室間分析結(jié)果有可比性，常由上級(jí)主管部門(mén)及中心實(shí)驗(yàn)室對(duì)其所屬各實(shí)驗(yàn)室及其分析人員的分析質(zhì)量進(jìn)行定期或不定期的考核，稱(chēng)為實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制。 常用的方法有：,

9、雙樣圖法,27,1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢驗(yàn)法,將考核樣品（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）分發(fā)給各參加考核的實(shí)驗(yàn)室，要求按選定的統(tǒng)一方法對(duì)其進(jìn)行測(cè)試，并上報(bào)測(cè)定結(jié)果。,28,將上報(bào)的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，分別計(jì)算各實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與考核樣品保證值（真值）的相對(duì)誤差，或?qū)⒖己藰悠返谋ＷC值（中心值及不確定度）中的不確定度適當(dāng)展寬后，用以評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果。 最后將結(jié)果返回各實(shí)驗(yàn)室，以檢查是否存在系統(tǒng)誤差，并查找原因，加以糾正。,29,2雙樣圖法（尤登試驗(yàn)法）,將組分相同但濃度相差不大的兩個(gè)樣品A、B分發(fā)給各實(shí)驗(yàn)室，用統(tǒng)一的方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，然后在坐標(biāo)紙上以樣品A的濃度為X橫軸、樣品B的濃度為Y縱軸繪圖。,30,將樣品A、B的

10、真值（或均值）標(biāo)在圖上作為中心點(diǎn)，通過(guò)該點(diǎn)繪一條垂線(xiàn)為A(X)值線(xiàn)，繪一條水平線(xiàn)為B(Y)值線(xiàn)。 測(cè)定結(jié)果落在中心點(diǎn)附近時(shí)，表示結(jié)果的準(zhǔn)確度高，距離遠(yuǎn)時(shí)表示準(zhǔn)確度低。,31,圖中，X （平均值）垂直線(xiàn)和Y （平均值）水平線(xiàn)將坐標(biāo)系分成四個(gè)象限，即+，+，和 + 象限。 若各實(shí)驗(yàn)室間不存在系統(tǒng)誤差，代表各實(shí)驗(yàn)室測(cè)定值的點(diǎn)應(yīng)隨機(jī)分布在四象限中，且大致落在以代表兩均值直線(xiàn)交點(diǎn)為中心的圓形范圍內(nèi)，見(jiàn)A圖；,32,若各實(shí)室間存在系統(tǒng)誤差，則兩樣品測(cè)定值會(huì)出現(xiàn)偏高，或者偏低，各實(shí)驗(yàn)室測(cè)定值將主要分布在+或- -象限內(nèi)，大致落在與縱軸約成45度傾斜的橢圓形范圍內(nèi)，根據(jù)此橢圓形的長(zhǎng)軸和短軸之差及其位置，可估計(jì)

11、實(shí)驗(yàn)室間系統(tǒng)誤差的大小程度和正負(fù)方向。(B圖),33,還可根據(jù)雙樣品圖中各點(diǎn)的分散程度估計(jì)實(shí)驗(yàn)室間的精密度和準(zhǔn)確度。,34,二、標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)及其在生物材料檢驗(yàn)中的應(yīng)用,（一）標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì) （Reference Material，RM） 有證參考物質(zhì)（certified reference material，CRM） 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),35,國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）的定義是：,已很好地確定了其一種或多種特性的材料或物質(zhì)，用于校準(zhǔn)測(cè)量?jī)x器、評(píng)價(jià)測(cè)量方法或確定材料特性值。,36,我國(guó)生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),分為兩個(gè)等級(jí) 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW） 二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E) 一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由國(guó)務(wù)院計(jì)量行政部門(mén)

12、批準(zhǔn)、頒布并授權(quán)生產(chǎn)。,37,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特征：,（1）其一種或幾種特性值用建立了溯源性的程序確定，使之可溯源到準(zhǔn)確復(fù)現(xiàn)的表示該特性值的測(cè)量單位，即它的特性值是用絕對(duì)量值法、或兩種以上不同原理的準(zhǔn)確可靠的方法、或多個(gè)實(shí)驗(yàn)室（8個(gè)以上）用準(zhǔn)確可靠方法協(xié)同確定。,38,（2）定值的準(zhǔn)確度具有國(guó)內(nèi)最高水平，每一種出證的特性值都附有給定置信水平的不確定度。 （3）具有國(guó)家統(tǒng)一編號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)。 （4）均勻性保證在定值的精度以?xún)?nèi)，且穩(wěn)定性在一年以上，具有規(guī)定的合格的包裝形式。,39,二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)：,其特性量值通過(guò)與一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)直接比對(duì)或用其他準(zhǔn)確可靠的分析方法測(cè)試而獲得 準(zhǔn)確度和均勻性能滿(mǎn)足一

13、般測(cè)量的需要，穩(wěn)定性在半年以上； 或能滿(mǎn)足實(shí)際測(cè)量需要； 經(jīng)有關(guān)主管部門(mén)審查批準(zhǔn)，報(bào)國(guó)家計(jì)量局直接備案。,40,實(shí)驗(yàn)室還經(jīng)常使用質(zhì)量控制樣品（質(zhì)控樣），其作用是在一定范圍內(nèi)用于分析過(guò)程的質(zhì)量控制，保證分析結(jié)果的精密度及準(zhǔn)確度。,41,生物材料（尿或血）的質(zhì)控樣通常可以用不含被測(cè)物的尿樣或血樣加入一定量被測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)品配制。此外，也可用被測(cè)物的主要基體成分和一定量被測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)品配制模擬樣品。 常用生物材料標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)見(jiàn)表1-1,42,（二）標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的作用及選用原則,1標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的作用 評(píng)價(jià)分析方法和測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度； 作校準(zhǔn)物校準(zhǔn)各種測(cè)試儀器； 作為檢驗(yàn)工作的標(biāo)準(zhǔn)和用于分析質(zhì)量保證工作。,43,2選用標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的原則,（1）基體組成： 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基體組成與被測(cè)樣品的組成越接近越好，可消除基體效應(yīng)引入的系統(tǒng)誤差。 （2）濃度水平： 分析方法精密度與被測(cè)樣品的濃度有關(guān)，所以要選擇濃度水平合適的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。,44,2