1、微生物臨床送檢標(biāo)本的接種,張 瑞 君,微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量保證,臨床標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)，與臨床標(biāo)本的其它實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)是一樣的，質(zhì)量保證工作必須貫穿于實(shí)驗(yàn)室工作的整個(gè)過(guò)程,包括分析前（標(biāo)本的正確采集、運(yùn)送）、分析中（培養(yǎng)、分離、鑒定和藥敏試驗(yàn)等）和分析后（結(jié)果報(bào)告、解釋、臨床反饋）的質(zhì)量管理。 在這三個(gè)階段對(duì)我們實(shí)驗(yàn)起到至關(guān)重要作用的分析前質(zhì)量，它是由臨床醫(yī)護(hù)人員來(lái)進(jìn)行控制的，標(biāo)本留取的正確與否、時(shí)機(jī)是否恰當(dāng)都是由他們來(lái)監(jiān)控的。但是，我們完全可以在我們實(shí)驗(yàn)之前，標(biāo)本接收的時(shí)候?qū)λ邮盏臉?biāo)本進(jìn)行初步的質(zhì)量控制，如從留取標(biāo)本的容器、所留標(biāo)本的外觀質(zhì)量、等項(xiàng)目進(jìn)行檢查。再一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)就是我們工作人員對(duì)

2、標(biāo)本的接種，這將影響到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、及時(shí)性、合理性，今天我將主要介紹一下我們微生物實(shí)驗(yàn)室對(duì)臨床不同標(biāo)本的初次接種。,2,分析后,一、微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制,分析中,分析前,分析前階段按時(shí)間順序，該階段始于來(lái)自臨床醫(yī)師的申請(qǐng)，包括檢驗(yàn)要求、患者準(zhǔn)備、原始樣本采集、運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室并在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的傳遞，至檢驗(yàn)分析過(guò)程開(kāi)始時(shí)結(jié)束。,保證檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)的科學(xué)、合理性；根據(jù)臨床醫(yī)師的檢驗(yàn)要求，患者的病情正確準(zhǔn)備；原始樣本的正確采集及運(yùn)送。,1.檢驗(yàn)結(jié)果的正確發(fā)布；2.咨詢服務(wù)；3.檢驗(yàn)樣品的保存及處理。,包括授權(quán)者應(yīng)系統(tǒng)性的評(píng)審檢驗(yàn)結(jié)果，評(píng)價(jià)其與可利用的患者有關(guān)臨床信息的符合程度，并授權(quán)發(fā)布；結(jié)果、原始樣品

3、與其它實(shí)驗(yàn)室樣品的保存應(yīng)符合經(jīng)批準(zhǔn)的政策；不再用于檢驗(yàn)樣品的安全處置應(yīng)符合當(dāng)?shù)仃P(guān)于醫(yī)療廢物處置法規(guī)和有關(guān)廢物管理的建議。,主要是指實(shí)驗(yàn)室接到標(biāo)本后檢驗(yàn)分析開(kāi)始到出具結(jié)果前的整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程。,定 義：,主要內(nèi)容：,所有過(guò)程：,主要工作：,3,1. 取樣容器,二、微生物檢驗(yàn)的相關(guān)用品,4,2.接種工具,接種環(huán),接種針,無(wú)菌拭子,酒精燈,二、微生物檢驗(yàn)的相關(guān)用品,5,3.培養(yǎng)基,二、微生物檢驗(yàn)的相關(guān)用品,6,（1）,（2）,分析中的質(zhì)量控制,A、外 觀,C、容器的選擇,B、標(biāo) 示,D、留取的標(biāo)本量,A、正確的接種時(shí)間,B、選擇正確的培養(yǎng)基,C、選擇正確的接種方法,D、選擇正確的培養(yǎng)環(huán)境,E、正確的放置

4、培養(yǎng)基,三、微生物檢驗(yàn)的接種要求,7,科別 姓名 床號(hào) 采樣時(shí)間,8/4 16:20,8/4 16:20,N 5-18 王xx,8/4 16:20,N 5-18 王xx,標(biāo) 示,8,標(biāo) 示,標(biāo)本的標(biāo)示 培養(yǎng)皿：急診不需編號(hào)，但一定要在培養(yǎng)皿上做標(biāo)示，包括：科別、患者姓名、接種時(shí)間（日、時(shí)、分）； 化驗(yàn)單：完整填寫(xiě)樣本接收時(shí)間（日、時(shí)、分）,9,接 種 時(shí) 間,10,分離培養(yǎng)基,血瓊脂平板：,巧克力平板：,麥康凱平板：,SS瓊脂平板：,血液培養(yǎng)瓶：,適于給類細(xì)菌生長(zhǎng)，一般細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本的分離，都應(yīng)接種此平板。,其中含有和因子，適于接種疑有嗜血桿菌、奈瑟菌的標(biāo)本。,有較強(qiáng)的抑菌力，用于志賀菌和沙門(mén)菌

5、的分離。因選 擇性過(guò)強(qiáng)，可影響檢出率，所以，使用時(shí)最好加一種弱選擇平板以配對(duì)互補(bǔ)。,用于血液、骨髓中分離常見(jiàn)病原菌。,具中等強(qiáng)度選擇性，抑菌力略強(qiáng)，有少數(shù)革蘭陰性菌不生長(zhǎng)。在麥康凱平板上能否生長(zhǎng)，是非發(fā)酵菌鑒定的一個(gè)依據(jù)。,11,接種方法,本法主要用于雜菌量較多的標(biāo)本。 先將標(biāo)本均勻涂布于平板表面邊緣一小區(qū)（第一區(qū)）內(nèi)，約占平板1/5面積，再在二、三、.區(qū)依次連續(xù)劃線。每劃完一個(gè)區(qū)，均將接種環(huán)滅菌一次。每一小區(qū)的劃線均接觸上一區(qū)的接種線12次，使菌量逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落。,平板劃線分離法,斜面接種法,液體接種法,穿刺接種法,傾注平板法,涂布接種法,連續(xù)劃線分離法,分區(qū)劃線分離法,本法主要用

6、于雜菌不多多的標(biāo)本。 用接種環(huán)取標(biāo)本少許，于平板平板1/5處密集涂布，然后來(lái)回做曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。,常用于紙片法藥物敏感性測(cè)定,用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細(xì)菌的某些特性,多用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種,測(cè)定牛乳、飲水和尿液等標(biāo)本細(xì)菌數(shù),主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖管的接種,12,圖 示,13,正確的涂布結(jié)果,第一區(qū)： 各種細(xì)菌密集涂布，形成菌苔； 在后幾區(qū) 可見(jiàn)有所分離所有細(xì)菌的單個(gè)菌落。,14,錯(cuò)誤涂法,15,正確的放置培養(yǎng)基,1、加蓋、倒置（底朝上） 3、放置于合適的培養(yǎng)環(huán)境 2、不可疊加太高（不超過(guò)4個(gè)）,16,四、各種標(biāo)本的接種,1、痰、

7、咽拭子,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項(xiàng),血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板,培養(yǎng)環(huán)境,35，5%10%CO2，1824h,分區(qū)劃線接種法,不可用棉拭子直接分區(qū)劃線； 不可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,17,四、各種標(biāo)本的接種,2、尿液,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項(xiàng),血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板,培養(yǎng)環(huán)境,35，1824h,連續(xù)劃線一次完成 定量接種法。標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)法。10ul，結(jié)果乘以100,不可用棉拭子直接劃線； 可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,18,四、各種標(biāo)本的接種,3、分泌物,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項(xiàng),血瓊脂平

8、板、麥康凱瓊脂平板,培養(yǎng)環(huán)境,35，1824h,分區(qū)劃線接種法,不可用棉拭子直接分區(qū)劃線； 不可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,19,四、各種標(biāo)本的接種,4、糞便,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項(xiàng),血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、ss瓊脂平板 不同的檢查目的，可選用不同的培養(yǎng)基,培養(yǎng)環(huán)境,35，1824h,分區(qū)劃線接種法,一般不作涂片檢查。雜菌多 不可用棉拭子直接分區(qū)劃線； 不可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,20,四、各種標(biāo)本的接種,5、血液、骨髓,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項(xiàng),雙相血培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)環(huán)境,35，5%10%CO2，7天后方可

9、報(bào)告陰性,液體接種法,每日觀察血培養(yǎng)瓶的變化； 每日對(duì)血培養(yǎng)瓶進(jìn)行顛倒混勻。,盡快送檢 立即接種,21,四、各種標(biāo)本的接種,6、腦脊液,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項(xiàng),血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板,培養(yǎng)環(huán)境,35，5%10%CO2，1824h,分區(qū)劃線接種法,不可冷藏 不可用棉拭子直接分區(qū)劃線； 不可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,22,四、各種標(biāo)本的接種,7、胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔積液等,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項(xiàng),血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、可選擇血培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)環(huán)境,35，5%10%CO2，1824h,分區(qū)劃線接種法,不可冷藏 不可用棉拭子