1、2.2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),1.實(shí)例：,啟示：尋找目的菌種時(shí)要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的 要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。,原因：因?yàn)闊崛獪囟?0800C，淘汰了絕大多 數(shù)微生物只有Taq細(xì)菌被篩選出來(lái)。,DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。,篩選菌株,2.實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：,人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。,什么是選擇性培養(yǎng)基？,1.尿素的利用,尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。,2.細(xì)菌

2、利用尿素的原因,土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣?。,脲酶,一、從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌,制備以 為唯一氮源的 培養(yǎng)基。,尿素,選擇,3.制備培養(yǎng)基：,培養(yǎng)基的唯一氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。,碳源： 氮源：,葡萄糖、尿素 尿素,4.鑒定方法,在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加 入 指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將 ，說(shuō)明該細(xì)菌能夠分解尿素。,酚紅,變紅,測(cè)定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細(xì)菌過(guò)濾器過(guò)濾后，將

3、濾膜放到 伊紅美藍(lán) 培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，通過(guò)記述得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。,大腸桿菌呈 黑色中心 ,有或無(wú)金屬光澤,大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征,1.顯微鏡直接計(jì)數(shù)：,方法： 缺點(diǎn)： 例子：,二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：,不能區(qū)分死菌與活菌； 不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)； 需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度； 個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；,血球計(jì)數(shù)板,酵母菌種群數(shù)量變化,2.間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法） 原理：一個(gè)菌落來(lái)源于一個(gè)活菌。 常用方法：稀釋涂布平板法。,（3）計(jì)算公式： 每克樣品中的菌落數(shù)(CV)M,其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積

4、(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。,3.怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？,以尿素為 唯一氮源 的培養(yǎng)基,牛肉膏 蛋白胨 培養(yǎng)基,是,分離 尿素 細(xì)菌,判斷該 培養(yǎng)基 有無(wú)選 擇性,只生長(zhǎng)尿素細(xì)菌,生長(zhǎng)多種微生物,是,注意事項(xiàng) 為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。 設(shè)計(jì)重復(fù)組 目的增加實(shí)驗(yàn)說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。方法可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。 設(shè)置對(duì)照組 主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。,統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。 細(xì)菌：3037培養(yǎng)12d 放線菌：2528

5、培養(yǎng)57d 霉菌：2528的溫度下培養(yǎng)34d。,如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個(gè)重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)。,1.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（ ） A.培養(yǎng)細(xì)菌 B.培養(yǎng)真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素,實(shí)踐訓(xùn)練,C,D,3.下列說(shuō)法不正確的是（ ） A.科學(xué)家從7080度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶 B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值 C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度 D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量