1、每代細胞,每代細胞,滯留期 lag phase,概述 傳代:恢復(fù)期 適應(yīng)期 原代培養(yǎng):開始時細胞 必須經(jīng)歷的時期 2種情況 分散細胞接種:游離- - 吸附- -潛伏期 組織塊: 潛伏期,滯留期 原因:操作時，細胞表面上與其它細胞及支持物 黏附與連接的分子被破壞，細胞受到損傷 接種細胞: 適應(yīng)，恢復(fù)，積累(代謝中間產(chǎn)物)組織塊: 細胞遷移出一般經(jīng)數(shù)小時- -幾天,滯留期 過程: 游離:懸浮,胞質(zhì)回縮, 全部細胞變?yōu)閳A球形 吸附:貼附底物,一般24小時內(nèi) 貼壁 潛伏期:可有運動活動,基本無增殖, 少見分裂相,滯留期 影響因素滯留期的長短與細胞種類、按種的細胞密度、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)。1.細胞密度

2、接種分散細胞,接種的密度越大、數(shù)量越多， 細胞群體越容易適應(yīng)體外環(huán)境，潛伏期就短。 相反，即便是在很小的培養(yǎng)空間內(nèi)， 如接種的細胞數(shù)量不夠大，潛伏期仍會較長,滯留期-影響因素 2.細胞類型傳代培養(yǎng)的細胞之滯留期 比原代培養(yǎng)的細胞短。 單個細胞快,細胞大團慢,組織塊慢連續(xù)細胞系與發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的細胞 比有限細胞系與正常二倍體細胞的短來源 胚胎組織:短, 成體:長,滯留期-影響因素3.細胞機能狀態(tài) 不良者慢4.培養(yǎng)條件 培養(yǎng)液,pH,底物 不利:污染,有毒,指數(shù)生長期 exponential (log) phase,概述 潛伏期結(jié)束后 即開始指數(shù)生長期， 或稱對數(shù)生長期。 細胞生長所需 各種營養(yǎng)條件

3、具備后進入,特點 是細胞增生最活躍、活力最旺盛的階段 培養(yǎng)物中細胞數(shù)量呈指數(shù)增長, 細胞群體均一 實驗理想 判斷細胞生長的指標,判斷細胞生長的指標指數(shù)生長期內(nèi)細胞分裂活動的程度(增殖活性) 可作為判斷細胞生長是否旺盛的重要指標 1.有絲分裂指數(shù)(MI):培養(yǎng)物中分裂相數(shù)量占 全部細胞數(shù)量的百分比 統(tǒng)計時，每瓶至少需計數(shù)1000個細胞。 一般細胞的MI約為0.10.5% 原代培養(yǎng)物的MI比繼代培養(yǎng)物低。 連續(xù)細胞系和腫瘤細胞高，可達3%5%。 2.細胞群體倍增時間:培養(yǎng)物中細胞數(shù)量翻倍的平均時間,間接反映細胞活力和增殖活動強弱，有 3.MTT法：反映細胞內(nèi)一種酶活性程度 4.標記核苷酸(3H-T

4、dR)摻入量：反映DNA合成 細胞的增殖活性與細胞種類、供體年齡以及培養(yǎng)條件等多種因素密切相關(guān)。,細胞生長一定階段(指數(shù)生長期一般持續(xù)35 d）,即可長滿培養(yǎng)器皿，相互匯合成片 (鋪滿 confluence匯合) 鋪滿：細胞彼此連接成層長滿器皿底壁。(細胞相互之間緊密接 觸，所有可供生長的區(qū)域己被利用)。正常細胞(非轉(zhuǎn)化細胞)，當細胞相互接觸 連接成片，出現(xiàn)接觸抑制 接觸抑制以后，雖然運動受抑制， 但只要營養(yǎng)成分充足，仍可短期的分裂增殖 只有當細胞密度增大到一定程度， 細胞便不再分裂增殖。 為密度依賴性細胞生長抑制 當細胞分裂停止后，細胞數(shù)量即不再增加 進入平臺期,平臺期 Plateau (s

5、tationary) phase,概述 細胞鋪滿后再1-2倍增, 進入 細胞達飽和密度, 可存活 仍有代謝活動，但基本不分裂 細胞數(shù)量維持在某一水平上， 生長活動停滯. 飽和密度：在培養(yǎng)細胞的平臺期，可供細胞 生長的底物面枳己被生長的細胞所占滿，細 胞雖尚有活力但已不再分裂增殖。細胞數(shù)目 不再增加時，即達細胞生長的飽和密度,特點 (1)細胞數(shù)量 細胞達飽和密度 密度抑制 停止生長原因: 細胞數(shù)量多、生長地區(qū)占滿、 營養(yǎng)消耗、培養(yǎng)液中代謝廢物積聚漸多 細胞停止生長。即使經(jīng)常更換培養(yǎng)液， 細胞也會變性,從生長基質(zhì)表面脫落、死亡 唯有進行傳代方可緩解,特點 (2)細胞活動小, 細胞膜的活動小(3)生長組分下降: 010%(4)及時轉(zhuǎn)代 若細胞已中毒，即使傳代， 也會影響下一代細胞的功能狀況,培養(yǎng)細胞的生長曲線 培養(yǎng)細胞都可在接種以后的