1、實(shí)驗(yàn)8:酵母核糖核酸的分離和核酸成分的鑒定。首先，目的：了解核酸的成分，掌握鑒定核酸成分的方法。第二，原理上，酵母核酸含有更多的核糖核酸。核糖核酸可溶于堿性溶液中，解聚的核糖核酸可通過向堿性提取物中加入酸性乙醇溶液而沉淀，從而獲得粗核糖核酸產(chǎn)物。核糖核酸包含核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸。它可以通過用硫酸煮沸來水解，并且可以從水解產(chǎn)物中檢測到上述組分的存在。3.行動1。提取：將2 g酵母懸浮在10毫升10%氯化鈉溶液(50毫升錐形瓶)中，膨脹并搖勻，然后在100沸水浴中加熱30分鐘，然后冷卻。離心(3500轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，將預(yù)冷的酸性乙醇溶液倒入等體積的上清液中。攪拌時小心倒入。核糖核酸沉淀完

2、成后，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)5分鐘。將所得沉淀物用適量0.5毫升/升碳酸氫鈉溶液溶解，然后用超臨界溶液將體積調(diào)節(jié)至10毫升。2.脫氧核糖核酸和核糖核酸組分的鑒定：1)取兩個裝有嘌呤堿的小試管，分別加入0.5毫升脫氧核糖核酸和核糖核酸樣品溶液，然后向每個試管中加入0.5毫升10%氨水和0.5毫升0.1摩爾/升硝酸鑭，然后觀察沉淀物及其顏色變化；2)取兩個裝有核糖的試管，分別加入0.5毫升的脫氧核糖核酸和核糖核酸樣品溶液和0.5毫升的二苯胺溶液。將其放入沸水浴中10分鐘。注意溶液是否變藍(lán)，這顯示了該方法的特異性。3)磷酸：取兩根試管，加入0.5毫升脫氧核糖核酸和核糖核酸樣品溶液和0.5毫升磷酸鹽

3、固定劑。在水浴中加熱，觀察溶液是否變藍(lán)，指示磷酸是否存在，以及為什么兩個試管的顏色深度不同。第四，思考問題，p43第3、6、7頁，實(shí)驗(yàn)9，DNA Tm值的測定，第一，目的，正確理解DNA Tm值的定義和測定Tm值的意義；掌握DNA Tm值的測定方法；了解脫氧核糖核酸變性和復(fù)性的機(jī)制和條件。原理：當(dāng)脫氧核糖核酸在稀鹽溶液中加熱到80-100時，雙螺旋結(jié)構(gòu)將會分裂，兩條鏈將會分開形成不規(guī)則的線圈。同時，一系列物理和化學(xué)性質(zhì)發(fā)生了變化，其中260納米處的消光值增加(顏色增強(qiáng)效應(yīng))；粘度降低；浮力密度降低等。脫氧核糖核酸的這些變化是爆炸性的，變性發(fā)生在非常窄的溫度范圍內(nèi)。通常，脫氧核糖核酸雙螺旋結(jié)構(gòu)失

4、去一半的溫度被稱為脫氧核糖核酸的熔點(diǎn)或熔化溫度，脫氧核糖核酸的Tm值通常在70和85之間。變性后的脫氧核糖核酸在降溫過程中被復(fù)性，A260nm納米值再次降至接近自然狀態(tài)的消光值。影響脫氧核糖核酸Tm值的因素：脫氧核糖核酸的均勻性越高，熔化溫度范圍越窄；總碳含量的Tm值隨總碳含量的增加而增加。G-C含量可從Tm值計算。經(jīng)驗(yàn)公式為(g-c)%=(TM-69.3)2.44；一般來說，在離子強(qiáng)度較低的介質(zhì)中，脫氧核糖核酸的熔化溫度較低且較寬。3.操作步驟：1 .將8個恒溫水浴箱的溫度調(diào)節(jié)到50、60、70、75、80、85、90、95和1002，取12個帶蓋的大試管，向每個試管中加入3毫升的脫氧核糖核酸溶液，蓋上蓋子，每個水浴箱放一個，100個水浴罐放三個。使用10.15毫升/升-0.015毫升/升檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0)作為對照溶液。3.在100下保存15分鐘后，取出另外兩個含有DNA溶液的試管，在50和室溫下放置0.5小時以上，然后在260納米波長下測量消光值。1.計算每個溫度下的a260納米(t)/a260納米(25)，繪制溫度比(見圖十三)，將每個點(diǎn)連接成平滑曲線，并測量消光值增加的中點(diǎn)，稱為Tm。已計算出總碳含量。公式為：(G-C)%=(Tm-69.3)2.44 2