1、質(zhì)譜及液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用,1,主要內(nèi)容,發(fā)展概述 質(zhì)譜法分析原理及過(guò)程 質(zhì)譜儀的組成 LC-MS聯(lián)用技術(shù) LC-MS分析條件的選擇和優(yōu)化 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用,2,發(fā)展概述,Thomson J.J 于1906年發(fā)明質(zhì)譜，到 20世紀(jì) 20年代質(zhì)譜才逐漸被化學(xué)家以一種分析手段采用。早期的質(zhì)譜儀主要用來(lái)進(jìn)行同位素測(cè)定和無(wú)機(jī)元素分析，40年代以后質(zhì)譜開(kāi)始廣泛應(yīng)用于有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)鑒定 ，直到 80年代 ，有機(jī)質(zhì)譜及質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)得到了飛速的發(fā)展 。相繼發(fā)明了快原子轟擊、電噴霧電離、大氣壓化學(xué)電離和基質(zhì)輔助激光解吸電離 等軟電離技術(shù)，能用于分析高極性、難揮發(fā)和熱不穩(wěn)定樣品，使質(zhì)譜的應(yīng)用擴(kuò)大到生物大分子

2、的領(lǐng)域。,3,質(zhì)譜分析的原理,質(zhì)譜儀是一種測(cè)量帶電粒子質(zhì)合比的裝置，利用帶電粒子在電場(chǎng)和磁場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)（偏轉(zhuǎn)、漂移、震蕩）行為進(jìn)行分離與測(cè)量。在離子源中樣品分子被電離和解離，得到分子離子和碎片離子，將分子離子和碎片離子引入到一個(gè)強(qiáng)的電場(chǎng)中，使之加速，加速電位通常用到6-8kV,此時(shí)所有帶單位正電荷的離子獲得的動(dòng)能都一樣，即 eV = mv2 / 2 但是，不同質(zhì)荷比的離子具有不同的速度，利用離子的不同質(zhì)荷比及其速度差異，質(zhì)量分析器可將其分離，然后由檢測(cè)器測(cè)量其強(qiáng)度。記錄后獲得一張以質(zhì)荷比（m/z）為橫坐標(biāo)，以相對(duì)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)的質(zhì)譜圖。,4,5,質(zhì)譜分析過(guò)程,質(zhì)譜分析過(guò)程可以分為四個(gè)基本環(huán)節(jié)： 通過(guò)

3、合適的進(jìn)樣裝置將樣品引入并進(jìn)行氣化 氣化后的樣品引入到離子源進(jìn)行電離，即離子化過(guò)程 電離后的離子經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)募铀俸筮M(jìn)入質(zhì)量分析器，按不同的質(zhì)荷比進(jìn)行分離 經(jīng)檢測(cè)、記錄，獲得一張譜圖 上述過(guò)程可歸納在圖1中。,6,質(zhì)譜儀的組成,典型的質(zhì)譜儀一般由進(jìn)樣系統(tǒng)、離子源、分析器、檢測(cè)器和記錄系統(tǒng)等不分組成，此外，還包括真空系統(tǒng)和自動(dòng)控制數(shù)據(jù)處理等輔助設(shè)備。下圖為單聚焦質(zhì)譜儀的示意圖,7,真空系統(tǒng),質(zhì)譜儀的離子源、質(zhì)量分析器和檢測(cè)器必須在高真空狀態(tài)下工作，以減少本底的干擾，避免發(fā)生不必要的離子-分子反應(yīng)。所以質(zhì)譜反應(yīng)屬于單分子分解反應(yīng)。利用這個(gè)特點(diǎn)，我們用液質(zhì)聯(lián)用的軟電離方式可以得到化合物的準(zhǔn)分子離子，從而

4、得到分子量。 由機(jī)械真空泵(前極低真空泵)，擴(kuò)散泵或分子泵(高真空泵)組成真空機(jī)組，抽取離子源和分析器部分的真空。 只有在足夠高的真空下，離子才能從離子源到達(dá)接收器，真空度不夠則靈敏度低。 進(jìn)樣系統(tǒng) 把分析樣品導(dǎo)入離子源的裝置，包括：直接進(jìn)樣，GC，LC及接口，加熱進(jìn)樣，參考物進(jìn)樣等。,8,離子源,使被分析樣品的原子或分子離化為帶電粒子(離子)的裝置，并對(duì)離子進(jìn)行加速使其進(jìn)入分析器，根據(jù)離子化方式的不同，有機(jī)質(zhì)譜中常用的有如下幾種，其中EI，ESI最常用。 EI(Electron Impact Ionization):電子轟擊電離硬電離。 CI(Chemical Ionization):化學(xué)電

5、離核心是質(zhì)子轉(zhuǎn)移。 FD(Field Desorption):場(chǎng)解吸目前基本被FAB取代。 FAB(Fast Atom Bombardment):快原子轟擊或者銫離子 (LSIMS,液體二次離子質(zhì)譜 ) 。 ESI(Electrospray Ionization):電噴霧電離屬最軟的電離方式。適宜極性分子的分析，能分析小分子及大分子(如蛋白質(zhì)分子多肽等) APCI(Atmospheric Pressure Chemical Ionization):大氣壓化學(xué)電離同上，更適宜做弱極性小分子。 APPI(Atmospheric Pressure PhotoSpray Ionization):大氣壓

6、光噴霧電離同上，更適宜做非極性分子。 MALDI(Matrix Assisted Laser Desorption):基體輔助激光解吸電離。通常用于飛行時(shí)間質(zhì)譜和FT-MS，特別適合蛋白質(zhì)，多肽等大分子 其中ESI，APCI，APPI統(tǒng)稱大氣壓電離(API),9,軟電離技術(shù),20世紀(jì) 80年代中期出現(xiàn)的兩種新的電離技術(shù):電噴霧電離 (ESI)和基質(zhì)輔助激光解吸電離 (MALD I ) ，這兩種技術(shù)具有高靈敏和高質(zhì)量檢測(cè)范圍,能在飛摩 ( 10-15)乃至阿摩(10-18)水平檢測(cè)相對(duì)分子量高達(dá)幾十萬(wàn)的生物大分子。目前，這兩種技術(shù)廣泛用于生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)等科學(xué)領(lǐng)域的研究。 電噴霧離子化

7、質(zhì)譜技術(shù) ( ES I ) ESI的工作原理：利用位于一根毛細(xì)管和質(zhì)譜進(jìn)口間的電勢(shì)差生成離子，在電場(chǎng)的作用下產(chǎn)生一噴霧形式存在的帶電液滴。在迎面吹來(lái)的熱氣流的作用下，液滴表面溶劑蒸發(fā),液滴變小，液滴的電荷密度驟增。當(dāng)靜電排斥力等于液滴的表面張力時(shí)，液滴便發(fā)生崩解，形成更小的液滴。如此形成的小液滴以類似的方式繼續(xù)崩解，于是液滴中的溶劑迅速蒸干，產(chǎn)生多電荷正離子，在質(zhì)譜儀內(nèi)被分析紀(jì)錄。電噴霧電離的特征之一是可生成高度帶電的離子而不發(fā)生破裂，這樣可將質(zhì)荷比降低到各種不同類型的質(zhì)量分析儀都能檢測(cè)的程度。,10,電噴霧通常應(yīng)用于 FT2 MS。Little等利用FT2 MS對(duì)一個(gè) 50鏈寡聚糖核苷酸得到

8、了優(yōu)于10 g/g的質(zhì)量測(cè)定準(zhǔn)確度;對(duì)一個(gè) 100鏈寡聚核苷酸 ,質(zhì)量準(zhǔn)確度優(yōu)于 30 g/g。測(cè)定的寡聚物的分子量可用于順序確證 ,也可與氣相裂解結(jié)合來(lái)進(jìn)行序列測(cè)定。Chen R等用 FT2I CR2 MS來(lái)捕獲和檢測(cè)質(zhì)量超過(guò)108D的單個(gè) DNA離子。 ESI的優(yōu)點(diǎn)是:解決了極性大、熱不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)與多肽分子的離子化和大分子質(zhì)量、一級(jí)結(jié)構(gòu)和共價(jià)修飾位點(diǎn)的測(cè)定問(wèn)題 ,并可用于研究DNA與藥物、金屬離子、蛋白質(zhì)和抗原與抗體的相互作用。但是樣品中的鹽類對(duì)樣品結(jié)果影響很大 ,而且單個(gè)分子帶電荷不同可形成多種離子分子峰 (重疊峰 ) ,所以對(duì)混合物的圖譜解析比較困難。,11,基質(zhì)輔助激光解吸電離技術(shù)

9、 (MALD I)是用小分子有機(jī)物作為基質(zhì) ,樣品與基質(zhì)的分子數(shù)比例為 1: (100 50000) ,均勻混合后 ,在空氣中自然干燥后送入離子源內(nèi)?；旌衔镌谡婵障率芗す廨椪?,基質(zhì)吸收激光能量 ,并轉(zhuǎn)變?yōu)榛|(zhì)的電子激發(fā)能 ,瞬間使基質(zhì)由固態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài) ,形成基質(zhì)離子。而中性樣品與基質(zhì)離子、 質(zhì)子及金屬陽(yáng)離子之間的碰撞過(guò)程中,發(fā)生了樣品的離子化 ,從而產(chǎn)生質(zhì)子化分子、 陽(yáng)離子化分子或多電荷離子或多聚體離子。 常用的是基質(zhì)輔助激光解吸離子 -飛行時(shí)間-質(zhì)譜。目前還有更新的串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù) 。Cri mmins等用 MALD I - T OF MS分析通過(guò)二硫鍵鍵合的異二肽 ,得到了二肽及每個(gè)

10、單體肽組分的質(zhì)量。結(jié)論是 MALD I - T OF MS中的碎裂過(guò)程與氨基酸胱氨酸水溶液的光引發(fā)均裂有相似之處。提供了一種指認(rèn)蛋白中二硫鍵的簡(jiǎn)便方法。此方法還適用于對(duì)單核細(xì)胞進(jìn)行直接的化學(xué)分析。 MALD I的特點(diǎn)是準(zhǔn)分子離子峰很強(qiáng) ,幾乎無(wú)碎片離子 ,因此可直接分析蛋白質(zhì)酶解后產(chǎn)生的多肽混合物。另一個(gè)特點(diǎn)是對(duì)樣品中雜質(zhì)的耐受量較大 ,當(dāng)用液體色譜分離蛋白質(zhì)是 ,往往把鹽留在樣品中 ,若這些鹽的量在基質(zhì)的 5%以下 ,可不影響蛋白質(zhì)離子的發(fā)射 ,因而往往可省去脫鹽的步驟,大大縮短分析時(shí)間。,2. 基質(zhì)輔助激光解吸電離技術(shù) (MALD I ),12,質(zhì)量分析器,是質(zhì)譜儀中將離子按質(zhì)荷比分開(kāi)的部

11、分,離子通過(guò)分析器后,按不同質(zhì)荷比(M/Z)分開(kāi),將相同的M/Z離子聚焦在一起,組成質(zhì)譜。 質(zhì)量分析器的分類： 雙聚焦扇形磁場(chǎng)-電場(chǎng)串聯(lián)儀器(sector). 四極桿質(zhì)譜儀(Q). 飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(TOF). 離子阱質(zhì)譜儀（TRAP） 傅里葉變換-離子回旋共振質(zhì)譜儀(FT-ICRMS). 四極+TOF（Q-TOF） 串列式多級(jí)質(zhì)譜儀 三重四極（QqQ） (MS/MS) TOF+TOF,13,檢測(cè)接收器,接收離子束流的裝置有：電子倍增器、光電倍增器、微通道板,將接收來(lái)的電信號(hào)放大、處理并給出分析結(jié)果及控制質(zhì)譜儀個(gè)部分工作。 從幾伏低壓到幾千伏高壓。,數(shù)據(jù)及供電系統(tǒng),14,色譜質(zhì)譜聯(lián)用簡(jiǎn)介,色譜質(zhì)

12、譜的在線聯(lián)用將色譜的分離能力與質(zhì)譜的定性功能結(jié)合起來(lái)，實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜混合物更準(zhǔn)確的定量和定性分析。而且也簡(jiǎn)化了樣品的前處理過(guò)程，使樣品分析更簡(jiǎn)便。 色譜質(zhì)譜聯(lián)用包括氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)，液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用互為補(bǔ)充，分析不同性質(zhì)的化合物。,15,液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用的區(qū)別,氣質(zhì)聯(lián)用儀(GC-MS)是最早商品化的聯(lián)用儀器，適宜分析小分子、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定、能氣化的化合物；用電子轟擊方式（EI）得到的譜圖，可與標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)對(duì)比。 液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)主要可解決如下幾方面的問(wèn)題：不揮發(fā)性化合物分析測(cè)定；極性化合物的分析測(cè)定；熱不穩(wěn)定化合物的分析測(cè)定；大分子量化合物（包括

13、蛋白、多肽、多聚物等）的分析測(cè)定；沒(méi)有商品化的譜庫(kù)可對(duì)比查詢，只能自己建庫(kù)或自己解析譜圖。,16,LC-MS聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展,質(zhì)譜法可以有效地定性分析化合物 ,但對(duì)于有機(jī)混合物的分析就無(wú)能為力了。而色譜法對(duì)有機(jī)化合物是一種有效的分離和分析方法 ,特別適合進(jìn)行有機(jī)化合物的定量分析 ,但定性分析比較困難。因此兩者的有效結(jié)合必將為化學(xué)家及生物化學(xué)家提供一個(gè)進(jìn)行復(fù)雜化合物高效的定性定量工具。色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用技術(shù)主要有氣相色譜-質(zhì)譜法 、液相色譜-質(zhì)譜法 。 GC-MS技術(shù)已經(jīng)成為一種成熟的分析方法應(yīng)用于很多領(lǐng)域。但是在 1000多萬(wàn)種已經(jīng)登錄的有機(jī)化合物中大概只有不到20%可以直接采用GC-MS進(jìn)行分析

14、。事實(shí)上在理化物證分析領(lǐng)域內(nèi)對(duì)炸藥 、染料 、塑料等的分析也遇到類似的情況。即使采用高的氣化溫度、短的停留時(shí)間有時(shí)還不能奏效。,17,液相色譜-質(zhì)譜儀,高效液相液質(zhì)聯(lián)用(HPLC/MS)是指高效液相液相色譜與質(zhì)譜串聯(lián)的技術(shù)。HPLC-MS主要由HPLC儀、接口離子源(HPLC與MS之間的連接裝置)、質(zhì)量分析器、真空系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成?；旌蠘悠吠ㄟ^(guò)液相色譜系統(tǒng)進(jìn)樣，由色譜柱分離，從色譜儀流出的被分離組分依次通過(guò)接口進(jìn)入MS儀的離子源處并被離子化,然后離子被聚焦于質(zhì)量分析器中，根據(jù)質(zhì)荷比而分離，分離后的離子信號(hào)被轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，根據(jù)MS峰的強(qiáng)度和位置對(duì)樣品的成分和

15、結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。 目前常用的HPLC-MS聯(lián)用儀具有兩大分類系統(tǒng)，一種是從MS的離子源角度來(lái)劃分,包括電噴霧離子(ESI)、 大氣壓化學(xué)電離(APCI)和基質(zhì)輔助激光解吸離子化(MALDI)等；另一種是從MS的質(zhì)量分析器角度來(lái)劃分，包括四級(jí)桿質(zhì)譜儀(Q-MS)、離子阱質(zhì)譜儀(IT-MS)、飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(TOF-MS)、傅立葉變換質(zhì)譜儀(FT-MS)。,18,自1968年發(fā)表第一篇HPLC和MS在線聯(lián)用的實(shí)驗(yàn)報(bào)告至90年代初形成的5種接口類型的商品儀器 ,經(jīng)歷了30年。LC-MS經(jīng)歷了一個(gè)漫長(zhǎng)的研究過(guò)程 ,主要是為了解決真空技術(shù)和性能優(yōu)越的接口技術(shù)。為解決質(zhì)譜分析所必須的真空度 ,LC-MS一般

16、都采用分段、多級(jí)抽真空的方法。與GC-MS聯(lián)用相比 ,接口問(wèn)題的解決過(guò)程是艱巨的。主要原因來(lái)自兩方面:一是真空;二是樣品性質(zhì)。也就是說(shuō)質(zhì)譜儀的高真空系統(tǒng)不適應(yīng) HPLC的流出液體；強(qiáng)極性、難汽化和熱不穩(wěn)定的樣品不適應(yīng)質(zhì)譜的常規(guī)進(jìn)樣和離子化方式。 LC-MS在發(fā)展的過(guò)程中曾出現(xiàn)了很多接口技術(shù) ,現(xiàn)在在線聯(lián)用接口匯集成商品化的5種接口為傳送帶(MB)、流動(dòng)快原子轟擊(CFFAB)、粒子束(PB)、熱噴霧(TSP)以及大氣壓電離(API) 。其中API技術(shù)盡管不能全部代替其他4種接口 ,但它的出現(xiàn)使HPLC方法可以對(duì)強(qiáng)極性、高熔點(diǎn)、低揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定性樣品進(jìn)行分析 ,因此逐漸受到法庭科學(xué)工作者的青睞

17、。API技術(shù)分為電噴霧電離(ESI) 、大氣壓化學(xué)電離 (APCI),目前商業(yè)化的LC-MS絕大多數(shù)使用這兩種接口,下面簡(jiǎn)單介紹這兩種接口的特點(diǎn)。,19,1. 電噴霧電離(ESI) ESI是高電壓加在毛細(xì)管噴口上 ,通過(guò)電動(dòng)噴霧 ,霧化的液滴經(jīng)去溶劑化最終成為樣品的準(zhǔn)分子離子 ,電噴霧由此而得名。ESI有正離子化和負(fù)離子化兩種模式可供選擇 ,堿性樣品一般選擇正離子化模式 ,酸性樣品一般選擇負(fù)離子化模式。具有離子化效率高、靈敏度高、分析范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。它可以形成多電荷離子分析大分子如多肽、蛋白質(zhì)等,也可形成單電荷離子分析較小分子量(1000amu)的極性化合物,如小分子藥物及其代謝物 ,用于農(nóng)藥及

18、化工產(chǎn)品的中間體和雜質(zhì)的鑒定。,20,2. 大氣壓化學(xué)電離(APCI) APCI是樣品進(jìn)入氣相后依賴電暈放電發(fā)生離子化。被分析物隨溶液一起通過(guò)不銹鋼探針 ,同時(shí)被加熱氣化 ,其溶膠進(jìn)入離子源,借助電暈放電而帶電 ,隨后分子、離子之間進(jìn)行電荷轉(zhuǎn)移(化學(xué)反應(yīng))使被反應(yīng)物帶電與GC-MS不同的是并不需要反應(yīng)氣。與ESI相比,所要求的液相色譜流動(dòng)相流速可在0.2ml/min-2ml/min,這樣對(duì)于選擇色譜柱和優(yōu)化色譜條件十分方便,而要求流動(dòng)相流速控制在1.0ml/min以下 。但是APCI不能形成多電子離子,這使得它的質(zhì)量分析范圍沒(méi)有ESI廣,有些化合物使用兩種接口技術(shù)均可進(jìn)行分析 ,一般極性低的化

19、合物多使用接口APCI,APCI的靈敏度較ESI好。,21,1.接口的選擇： ESI適合于中等極性到強(qiáng)極性的化合物分子，特別是那些在溶液中能預(yù)先形成離子的化合物和可以獲得多個(gè)質(zhì)子的大分子（如蛋白質(zhì)） APCI不適合可帶多個(gè)電荷的大分子，其優(yōu)勢(shì)在于弱極性或中等極性的小分子的分析。,LC-MS分析條件的選擇和優(yōu)化,22,各種接口的應(yīng)用范圍,23,幾種API接口示意圖,24,2. 正、負(fù)離子模式的選擇：,選擇的一般原則為： 正離子模式：適合于堿性樣品，可用乙酸或甲酸對(duì)樣品加以酸化。樣品中含有仲氨或叔氨時(shí)可優(yōu)先考慮使用正離子模式。 負(fù)離子模式：適合于酸性樣品，可用氨水或三乙胺對(duì)樣品進(jìn)行堿化。樣品中含有

20、較多的強(qiáng)伏電性基團(tuán)，如含氯、含溴和多個(gè)羥基時(shí)可嘗試使用負(fù)離子模式。,25,3. 流動(dòng)相的選擇,常用的流動(dòng)相為甲醇、乙腈、水和它們不同比例的混合物以及一些易揮發(fā)鹽的緩沖液，如甲酸銨、乙酸銨等，還可以加入易揮發(fā)酸堿如甲酸、乙酸和氨水等調(diào)節(jié)pH值。 LCMS接口避免進(jìn)入不揮發(fā)的緩沖液，避免含磷和氯的緩沖液，含鈉和鉀的成分必須lmmol/l。（鹽分太高會(huì)抑制離子源的信號(hào)和堵塞噴霧針及污染儀器）含甲酸（或乙酸）2。含三氟乙酸0.5。含三乙胺l。含醋酸銨10一5 mmol/l。 送樣前一定要摸好LC條件，能夠基本分離，緩沖體系符合MS要求。,26,4. 流量和色譜柱的選擇,不加熱ESI的最佳流速是150u

21、lmin，應(yīng)用4.6 mm內(nèi)徑LC柱時(shí)要求柱后分流，目前大多采用 l2.1 mm內(nèi)徑的微柱，TIS源最高允許lmlmin，建議使用200400ulmin APCI的最佳流速lmlmin，常規(guī)的直徑4.6mm柱最合適。 為了提高分析效率，常采用 100 mm的短柱（此時(shí)UV圖上并不能獲得完全分離，由于質(zhì)譜定量分析時(shí)使用MRM的功能，所以不要求各組分沒(méi)有完全分離）。這對(duì)于大批量定量分析可以節(jié)省大量的時(shí)間。,27,5. 輔助氣體流量和溫度的選擇,霧化氣對(duì)流出液形成噴霧有影響，干燥氣影響噴霧去溶劑效果，碰撞氣影響二級(jí)質(zhì)譜的產(chǎn)生。 操作中溫度的選擇和優(yōu)化主要是指接口的干燥氣體而言，一般情況下選擇干燥氣溫

22、度高于分析物的沸點(diǎn)20 左右即可。對(duì)熱不穩(wěn)定性化合物，要選用更低的溫度以避免顯著的分解。 選用干燥氣溫度和流量大小時(shí)還要考慮流動(dòng)相的組成，有機(jī)溶劑比例高時(shí)可采用適當(dāng)?shù)偷臏囟群土髁啃∫稽c(diǎn)的。,28,LC-MS技術(shù)的應(yīng)用,目前飛速發(fā)展的質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已成為一種常規(guī)的應(yīng)用技術(shù)。世界各國(guó)的科學(xué)技術(shù)以日新月異的速度飛速發(fā)展,新技術(shù)的產(chǎn)生、儀器設(shè)備的更新非?？?。在國(guó)內(nèi),質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)主要用于藥動(dòng)學(xué)和代謝研究等藥學(xué)領(lǐng)域。而國(guó)外在過(guò)去幾十年里,由于接口技術(shù)的發(fā)展使質(zhì)譜的應(yīng)用逐漸擴(kuò)展到生物大分子 、環(huán)境衛(wèi)生等生命科學(xué)領(lǐng)域 ,促進(jìn)了相關(guān)學(xué)科的發(fā)展。 以大氣壓電離為接口的LC-MS技術(shù)已經(jīng)在藥物、化工、臨床醫(yī)學(xué)、分子生

23、物學(xué)等許多領(lǐng)域中獲得廣泛的應(yīng)用。,29,具體應(yīng)用領(lǐng)域,醫(yī)藥學(xué)：藥物代謝、藥物動(dòng)力學(xué)、雜質(zhì)分析、天然產(chǎn)物分析 生物化學(xué)：肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、糖 環(huán)境化學(xué)：農(nóng)藥和農(nóng)殘分析、有機(jī)污染物、土壤/食品/水分析 臨床醫(yī)學(xué)：新生兒檢查、糖化血紅蛋白（糖尿?。?、血紅蛋白變異、膽酸 食品科學(xué)：香料、添加物、包裝物、蛋白質(zhì)、致癌物 法醫(yī)學(xué)：濫用藥物、爆炸物、興奮劑檢測(cè) 獸醫(yī)學(xué)：興奮劑、磺胺類藥物、抗體 合成化學(xué)：有機(jī)金屬化合物、有機(jī)合成物 有機(jī)化學(xué)：表面活性劑、染料,30,藥物代謝研究,藥物代謝與藥物動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)上的最新重大進(jìn)展是LC-MS-MS的使用，電噴霧（ESI）和大氣壓化學(xué)電離（APCI）以及大氣壓光

24、電離（APPI）是其主要的離子源，由于具有高靈敏度（ng/mlpg/ml），高選擇性（檢測(cè)特定的碎片離子）、高效率（每天可檢測(cè)幾百個(gè)生物樣品和對(duì)藥物結(jié)構(gòu)的廣泛適用性，對(duì)液態(tài)樣品和混合樣品的分離能力高，可通過(guò)二級(jí)離子碎片尋找原型藥物并推導(dǎo)其結(jié)構(gòu)，LC-ESI-MS-MS已廣泛地應(yīng)用于藥物代謝研究中一期生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)和二期結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)物的鑒定、復(fù)雜生物樣品的自動(dòng)化分析以及代謝物結(jié)構(gòu)闡述等，已在世界上大型制藥企業(yè)中取代HPLC而占據(jù)了主導(dǎo)地位，其測(cè)試的樣品量占總量的70%以上。,31,天然產(chǎn)物天然藥物的研究,目前中藥開(kāi)發(fā)研究有兩條途徑。一條途徑是從單一植物中提取一種有效成分(單體化合物)或提取物開(kāi)發(fā)成新藥。另一途徑則是中藥復(fù)方制劑的開(kāi)發(fā)研究。 采用現(xiàn)代多種儀器聯(lián)用新技術(shù)，特別是高效液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS/MS)，可對(duì)其十幾種乃至幾十種化學(xué)成分進(jìn)行