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1、血清ALT活性測(cè)定,吳占波、陳旻賚、劉仲春、陳軍武,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?生理作用 單位意義 測(cè)定方法 臨床意義,卡門原理,ALT 丙氨酸+a-酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸 NADH+H 乳酸脫氫酶 NAD +乳酸 1ml血清 340nm波長(zhǎng) 1.0cm比色 25 C 1min 光密度下降0.001,實(shí)驗(yàn)原理,ALT 丙氨酸+a-酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸 OH 丙酮酸+2,4二硝基苯肼 丙酮酸2,4二硝基苯腙+H2O 反應(yīng)30min 在520nm,試劑,ALT底物液 PH=7.4磷酸緩沖液 丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液 2，4-二硝基苯肼溶液 0.4mol/LNaOH,實(shí)驗(yàn)操作,1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 2.酶活性測(cè)定,混勻，放置1
2、0分鐘，以蒸餾水調(diào)零，用520nm波長(zhǎng)比色，讀取各觀密度。各管的光密度An減去0管（A0），以光密度差值（An-A0）為縱坐標(biāo)，活性單位為橫坐標(biāo)。,酶活性測(cè)定：去兩只表明測(cè)定管T及對(duì)照管C,測(cè)定前將底物液在37 C水浴中預(yù)溫5min,混勻，放置10min，用520nm波長(zhǎng)比色，讀數(shù)，用AT-AC差標(biāo)準(zhǔn)曲線，及待測(cè)血清中ALT的酶活性 參考值 525卡,臨床意義,在肝臟疾病時(shí)，ALT的濃度會(huì)升高，機(jī)體各組織都有，肝臟中丙氨酸代謝最旺盛，含量最多發(fā)病時(shí)活性和含量均升高,注意事項(xiàng),賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線只到97卡門氏單位，啟活性與吸光度有良好的線性關(guān)系，超過(guò)時(shí)，應(yīng)將血清稀釋測(cè)定 A-酮戊二酸也能與2,4-二硝基苯肼產(chǎn)生苯腙，兩種吸光度在520nm出吸光度差異大，空白管的吸光度應(yīng)不超過(guò)0.015,思考題,1終止法 2賴氏與卡門的聯(lián)
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