1、凝集反應(yīng)安陽(yáng)工學(xué)院10生物技術(shù),凝集反應(yīng)（agglutination）,是指顆粒性抗原，例如細(xì)菌、紅細(xì)胞、螺旋體、細(xì)胞性抗原，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，與相應(yīng)的抗體（或抗原）在適量的電解質(zhì)存在的條件下，經(jīng)一定時(shí)間后凝聚成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,凝集反應(yīng)的類型,根據(jù)凝集反應(yīng)中抗原的性質(zhì)，反應(yīng)的方式分為： 直接凝集反應(yīng) 間接凝集反應(yīng) 間接凝集抑制反應(yīng) 協(xié)同凝集反應(yīng),直接凝集試驗(yàn)： 玻片凝集試驗(yàn)：ABO血型 試管凝集試驗(yàn)：外斐試驗(yàn)，肥達(dá)試驗(yàn) 間接凝集試驗(yàn)： 正向間接凝集試驗(yàn) 反向間接凝集試驗(yàn) 間接凝集抑制試驗(yàn) 協(xié)同凝集試驗(yàn) 簡(jiǎn)介血凝試驗(yàn) 膠乳凝集試驗(yàn) 明膠凝集試驗(yàn),凝集反應(yīng)的特

2、點(diǎn),顆粒性抗原 致敏顆粒 （可溶性抗原或抗體與載體顆粒結(jié)合） 電解質(zhì)的存在 肉眼可見的凝集現(xiàn)象,凝集反應(yīng)的發(fā)生分兩階段：,抗原抗體的特異結(jié)合 出現(xiàn)可見的顆粒凝集,直接凝集反應(yīng),細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆?？乖谶m當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應(yīng)。參加反應(yīng)的顆粒性抗原稱為凝集原（agglutinogen），抗體稱為凝集素（agglutinin） 。 常見的方法有玻片法和試管法,玻片凝集試驗(yàn)ABO血型鑒定,玻片凝集試驗(yàn)為定性試驗(yàn)，一般用已知抗體作為診斷血清，與受檢顆?？乖缇夯蚣t細(xì)胞抗原各加一滴在玻片上，混勻，數(shù)分鐘后即可用肉眼觀察凝集結(jié)果，出現(xiàn)凝集顆粒的為陽(yáng)性。此

3、法簡(jiǎn)便，快速，適用于從病人標(biāo)本中分離得到的菌種的診斷或分型，也可用于紅細(xì)胞ABO血型的鑒定。,【實(shí)驗(yàn)原理】 人類ABO血型抗原主要有A和B兩種，根據(jù)紅細(xì)胞表面這兩種抗原的有無(wú)可把血型分為四種。據(jù)此，將抗A和抗B抗體分別與待測(cè)紅細(xì)胞混合，抗A或（和）抗B抗體與紅細(xì)胞表面上的相應(yīng)抗原結(jié)合而引起紅細(xì)胞凝集，據(jù)其凝集情況便可判定出受試者的血型。,【實(shí)驗(yàn)材料】 1ABO標(biāo)準(zhǔn)血清：抗A分型試劑和抗B分型試劑各1支。 21ml生理鹽水的試管1支 3. 一次性采血針1枚、白瓷板1塊、一次性毛細(xì)吸管1支、75酒精棉球和滅菌干棉球,【實(shí)驗(yàn)方法】 1.用酒精棉簽消毒被檢者手指尖端，以采血針刺破皮膚，稍加擠壓，使血液

4、流出。滴1至2滴血液于含有生理鹽水的試管內(nèi)，搖勻，制成血球懸液。用干棉球止血。 2取潔凈載玻片1塊，將抗A、B分型試劑分別加1滴于白瓷板的兩個(gè)圓孔內(nèi)。 3. 用毛細(xì)吸管吸取血球懸液，在白瓷板的兩個(gè)圓孔內(nèi)各加一滴,并充分混勻，放置510分鐘。 4.觀察紅細(xì)胞有無(wú)凝集發(fā)生。如有凝集，可見紅細(xì)胞凝集成塊；無(wú)凝集，紅細(xì)胞呈均勻分散。 5.記錄凝集情況，判定受檢者的血型。,試管凝集試驗(yàn),多用于半定量試驗(yàn)，原則上是用定量抗原懸液與一系列倍比稀釋的受檢血清混合，在保溫靜置后觀察結(jié)果，以判定受檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)。 常有肥達(dá)試驗(yàn)，外-斐試驗(yàn)，交叉配血試驗(yàn)等。,間接凝集反應(yīng) 將可溶性抗原或抗體先吸附于適

5、當(dāng)大小的顆粒性載體表面（這種載體與免疫無(wú)關(guān)），然后與相應(yīng)抗體或抗原結(jié)合，在適量的電解質(zhì)存在下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應(yīng)。 根據(jù)載體的不同可將間接凝集反應(yīng)分為：間接血細(xì)胞凝集試驗(yàn)、間接乳膠凝集試驗(yàn)（及間接乳膠凝集抑制試驗(yàn)）和金黃色葡萄球菌協(xié)同凝集試驗(yàn)等。,載體的種類及處理方法,常用載體有：紅細(xì)胞（O型人紅細(xì)胞，綿羊紅細(xì)胞）、聚苯乙烯膠乳顆粒、明膠顆粒、離子交換樹脂、活性炭、火棉膠等。 處理方法：顆粒表面的處理（醛化、鞣化、化學(xué)處理）,間接凝集反應(yīng)的類型,1. 正向間接凝集反應(yīng) 2. 反向間接凝集反應(yīng) 3. 間接凝集抑制反應(yīng) 4. 協(xié)同凝集反應(yīng),血凝試驗(yàn),可在微量滴定板或試管中進(jìn)行，將

6、標(biāo)本倍比稀釋，一般為1:64，同時(shí)設(shè)不含標(biāo)本的稀釋液對(duì)照孔。在含稀釋標(biāo)本1滴的板孔（或試管）中，加入0.5致敏紅細(xì)胞懸液1滴，充分混勻，置室溫12小時(shí)，即可觀察結(jié)果。凡紅細(xì)胞沉積于孔底，集中呈一圓點(diǎn)的為不凝集（）。如紅細(xì)胞凝集，則分布于孔底周圍。根據(jù)紅細(xì)胞凝集的程度判斷陽(yáng)性反應(yīng)的強(qiáng)弱，以凝集的孔為滴度終點(diǎn)。,血凝反應(yīng)強(qiáng)度示意圖,1（正向）間接凝集反應(yīng),用抗原致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗體,2反向間接凝集反應(yīng),用特異性抗體致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原。,3間接凝集抑制反應(yīng),診斷試劑為抗原致敏的顆粒載體和相應(yīng)的抗體，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗原相同的抗原。檢測(cè)方法為將標(biāo)本先與抗體試劑作用，然

7、后再加入致敏的載體，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，說(shuō)明標(biāo)本中不存在相同抗原，抗體試劑未被結(jié)合，因此仍與載體上的抗原起作用。如標(biāo)本中存在相同抗原，則凝集反應(yīng)被抑制。,間接凝集抑制反應(yīng)原理示意圖,4協(xié)同凝集反應(yīng),協(xié)同凝集反應(yīng)與間接凝集反應(yīng)的原理相類似，但所用載體既非天然的紅細(xì)胞，也非人工合成的聚合物顆粒，而是一種金黃色葡萄球菌。它的菌體細(xì)胞壁中含有A蛋白SPA具有與IgG的Fc段結(jié)合的特性，因此當(dāng)這種葡萄球菌與IgG抗體連接時(shí)，就成為抗體致敏的顆粒載體。如與相應(yīng)抗原接觸，即出現(xiàn)反向間接凝集反應(yīng)。協(xié)同凝集反應(yīng)也適用于細(xì)菌的直接檢測(cè)。,間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用,間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備等特點(diǎn)，而且能用于抗原或抗體的測(cè)定，因此在臨床檢驗(yàn)中廣為應(yīng)用。,（一）抗原的檢測(cè),反向間接凝集試驗(yàn)可用于檢測(cè)病原體的可溶性抗原，也可用于檢測(cè)各種蛋白質(zhì)成分。 間接凝集反應(yīng)的敏感度雖較沉淀反應(yīng)高，但低于新發(fā)展的各種標(biāo)記免疫測(cè)定。 例如檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的間接血凝試驗(yàn)敏感度一般在25ng/ml，對(duì)獻(xiàn)血員的篩檢已不符合要求。,（二）抗體的檢測(cè),可用于檢測(cè)細(xì)菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗