1、實(shí)驗(yàn)八 化學(xué)因素對微生物的影響,一、目的要求,1了解常用化學(xué)藥品對微生物的作用。 2學(xué)習(xí)測定石炭酸系數(shù)的方法。,二、基本原理,重金屬離子可與菌體蛋白質(zhì)結(jié)合使之變性或與某些蛋白的巰基結(jié)合而使酶失活，重金屬鹽則是蛋白質(zhì)沉淀劑，或與代謝產(chǎn)物發(fā)生螯合作用而使其變?yōu)闊o效化合物； 有機(jī)溶劑可使蛋白質(zhì)及核酸變性，也可以破壞細(xì)胞膜透性使內(nèi)含物外溢； 碘可與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活，氯氣與水發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生的強(qiáng)氧化劑也有殺菌作用；,為了比較各種化學(xué)消毒劑的殺菌能力，常以石炭酸為標(biāo)準(zhǔn)，即將某一消毒劑作不同稀釋后，在一定條件下，一定時間內(nèi)致死全部供試微生物的最高稀釋濃度，與達(dá)到同樣效果的石炭酸的最高稀釋

2、度的比值，稱為這種消毒劑對該種微生物的石炭酸系數(shù)（酚系數(shù)）。石炭酸系數(shù)越大，說明該消毒劑殺菌能力越強(qiáng)。,三、器材,1、菌種：大腸桿菌,金黃色葡萄球菌； 2、培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基. 3、溶液或試劑：2.5%碘酒、0.1%升汞、5%石炭酸、75%乙醇,100%乙醇,1%來蘇爾,0.25%新潔爾滅,0.005%龍膽紫，0.05%龍膽紫，無菌水生理鹽水。 4、儀器或其他用具：無菌培養(yǎng)皿，無菌濾紙片、試管、吸管、三角涂棒、涂布器、鑷子、移液槍等。,四、操作步驟,1濾紙片法測定化學(xué)消毒劑的殺菌作用 (1)將已滅菌并冷卻至50左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌平皿中，水平

3、放置待凝固。 (2)用無菌吸管吸取0.2ml培養(yǎng)18小時的金黃色葡萄球菌菌液加入到上述平板中，用無菌三角涂棒涂布均勻。 (3)將已涂布好的平板底皿劃分成46等份，每一等份內(nèi)標(biāo)明一種消毒劑的名稱。,(4)用無菌鑷子將已滅菌的小圓形濾紙片（D5mm）分別浸入裝有各種消毒溶液的試管中浸濕。注意取出濾紙片時保證過濾紙片所含消毒劑溶液量基本一致，并在試管內(nèi)壁瀝去多余藥液。無菌操作將濾紙片貼在平板相應(yīng)區(qū)域，平板中間貼上浸有無菌生理鹽水的濾紙片作為對照。 (5)將上述貼好濾紙片的含菌平皿，倒置于37溫室中培養(yǎng)24小時后，取出測定抑菌圈大小，并說明其殺菌強(qiáng)弱。,2石炭酸系數(shù)的測定 （1）將5（1：20）的石炭

4、酸液按表-1配成不同濃度，每管5ml。 （2）將待測藥物（來蘇爾）先配成1：20的原液，再按表-2配成不同濃度，每管 5ml。,（3）取肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基30管，115管標(biāo)明石炭酸的5種濃度，每種濃度3管，每3管分5、10、15分鐘處理，1630管標(biāo)明來蘇爾的5種濃度，同樣每種濃度3管，每3管分5、10、15分鐘處理。 （4）在上述不同濃度的石炭酸和來蘇爾溶液中，各接入05ml大腸桿菌液，搖勻。注意每管自接種時起在5、10、15分鐘，用同一接種環(huán)從各管內(nèi)取一環(huán)接入上述已標(biāo)記的液體培養(yǎng)基試管中。,（5）置37溫室中培養(yǎng) 48小時，觀察并記錄生長情況。生長者溶液混濁，以“+”表示；不生長者溶液澄清，以“-”表示。 （6）計算系數(shù)值 找出在5分鐘生長，而在10分鐘和15分鐘均不生長的石炭酸及來蘇爾的最大稀釋度，計算二者的比值。例如石炭酸在10分鐘內(nèi)殺死大腸桿菌的最大稀釋度是1：70，來蘇爾是1：250，則來蘇爾的石炭酸系數(shù)為250/70=36。,五、實(shí)驗(yàn)報告,1、結(jié)果 （1）各種化學(xué)藥品對金黃色葡萄球菌的致死能力,(2)石