1、,生物分析化學(xué),2020/7/30,2,主要內(nèi)容,免疫分析基本知識 文獻(xiàn),2020/7/30,3,免疫分析 -抗原抗體,抗原：antigen Ag 刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)使之產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答,并能與相應(yīng)免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體內(nèi)外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。 抗體：antibody Ab 能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(Ig)。,甲胎蛋白AFP/癌胚抗原CEA,2020/7/30,4,免疫分析 -抗原抗體,反應(yīng)原理： 兩者存在著結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性和親和性. 抗原抗體結(jié)合依靠非共價鍵的相互作用. 靜電引力 范德華力 氫鍵結(jié)合力等,2020/7/30,5,免疫分析 -抗原抗體,反應(yīng)特點 -可逆性：抗原抗體形成復(fù)合物的過

2、程是一種動態(tài)平衡。 -最適比例:二者濃度比例適當(dāng)時才出現(xiàn)可見反應(yīng)。 -高度特異性：化學(xué)結(jié)構(gòu)/空間構(gòu)型的互補(bǔ)。,2020/7/30,6,免疫分析,免疫分析： 利用抗原與抗體的特異性結(jié)合作用來選擇性識別和測定可以作為抗體或抗原的待測物. 免疫分析方法,2020/7/30,7,常見的腫瘤標(biāo)志物免疫分析方法,2020/7/30,8,化學(xué)發(fā)光免疫分析 Chemoluminescence immunoassay,CLIA是化學(xué)發(fā)光法與免疫分析法結(jié)合的產(chǎn)物. 高靈敏度、高選擇性 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析 -以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng)，免疫復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物，根據(jù)測定的發(fā)光信號進(jìn)行定量分析.,202

3、0/7/30,9,競爭反應(yīng),夾心反應(yīng),發(fā)光底物,化學(xué)發(fā)光免疫分析反應(yīng),2020/7/30,10,主要內(nèi)容,免疫分析基本知識 文獻(xiàn),2020/7/30,11,文獻(xiàn) -題目,自動化單通道化學(xué)發(fā)光多元免疫分析,2020/7/30,12,文獻(xiàn) -創(chuàng)新點,為同時定量檢測多種腫瘤標(biāo)記物-多元免疫分析,2020/7/30,13,文獻(xiàn) -創(chuàng)新點,兩種抗體分別固定在玻璃管和磁性微球上，兩者在外加磁場可實現(xiàn)自動分離。 使用一種標(biāo)記物，單一通道即可實現(xiàn)多元免疫分析,2020/7/30,14,文獻(xiàn) -實驗步驟,4,結(jié)合免疫聚合物的磁性微球， 從混合組分中分離,2020/7/30,15,文獻(xiàn) -實驗裝置,2020/7/

4、30,16,文獻(xiàn) -結(jié)果與討論,孵化時間,2020/7/30,17,文獻(xiàn) -結(jié)果與討論,交互反應(yīng),2020/7/30,18,文獻(xiàn) -結(jié)果與討論,本實驗選用氨基乙酸-鹽酸緩沖液,A : 再生后的CL信號 A0：再生前的CL信號,RE: CEA -97.6% AFP- 98.2%,免疫反應(yīng)器重復(fù)使用10次后，抗體活性并無明顯下降,免疫反應(yīng)器再生后，抗體活性保持得很好,免疫反應(yīng)器再生,充分快速,2020/7/30,19,線性范圍：1.0-60 ng/mL,線性范圍：1.0-80 ng/mL,臨床診斷: 5.0-25 ng/mL,文獻(xiàn) -結(jié)果與討論,2020/7/30,20,檢測裝置簡單，成本低 重現(xiàn)

5、性好 線性范圍寬 靈敏度高,優(yōu)點：,文獻(xiàn) -結(jié)論,有望成為臨床診斷腫瘤的有效手段。,使用一種標(biāo)記物，單一通道實現(xiàn)了對兩種 腫瘤標(biāo)志物的分析。,2020/7/30,22,磁性微球,制備：將磁流體用有機(jī)聚合物包裹。 改性：表面經(jīng)修飾后引進(jìn)特定功能團(tuán)，可以和各種 抗體、抗原有效而穩(wěn)定地鍵合連接。 特點：-磁性微粒小，易于穩(wěn)定懸浮在溶液中，提高 分子間反應(yīng)效率 -具有順磁性，在外加磁場作用下，可迅速從 溶液中分離,2020/7/30,23,CEA抗體的固定,玻璃管用溶液(H2SO4/30% H2O2, 7:3 in volume) 浸泡12小時,硅烷化 1%(GPTMS甲苯溶液),通入CEA抗體，室溫保存2h，4oC overnight,抗體結(jié)合后，用含0.1% NaN3的PBS溶液浸泡，4C保存.,2020/7/30,24,AFP抗體的固定,羧基修飾的磁性氧化鐵懸浮液,用緩沖溶液活化 -室溫下，持續(xù)振蕩1h。,(30 mg of EDC/