1、動物細胞培養(yǎng),問題討論,燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學們想一想如何來治療該病人？,取該患者的皮膚進行細胞培養(yǎng),獲得足量的細胞后再移植。,動物細胞培養(yǎng),請同學們閱讀課本后，簡述動物細胞培養(yǎng)的基本過程？,動物細胞培養(yǎng),動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,胰蛋白酶,單個細胞,加培養(yǎng)液,制成,細胞懸浮液,原代培養(yǎng),細胞增殖,部分細胞無限傳代,去掉組織間蛋白,動物細胞培養(yǎng)不能 最終培養(yǎng)成生物體,傳代培養(yǎng),動物細胞培養(yǎng),請總結出動物細胞培養(yǎng)的定義,動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓

2、這些細胞生長和增殖。,思考題,1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？ 2、動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？ 3、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？ 4、如何將動物組織分散成單個的細胞呢？ 5、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？,沒有,是,成塊的組織細胞靠在一起,彼此限制了細胞的生長和增殖,先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理,胰蛋白酶水解蛋白質,細胞間的成份是蛋白質,思考題,6、細胞膜的主要成份是什么？ 7、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？ 8、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？ 9、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為

3、什么？ 10、動物細胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因？,蛋白質和磷脂,能,注意時間的控制,不能，因為酶的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近,胚胎組織或幼齡動物的組織或器官分裂、增殖旺盛,思考題,11、動物細胞培養(yǎng)瓶內表面為何要光滑、無毒？ 12、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？ 13、如此時細胞數(shù)量并未達到人們的需求，應該怎樣辦？,易于培養(yǎng)細胞貼壁，進行生長增殖,當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞分裂就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。,將貼壁的細胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。,這樣的過程叫做傳代培養(yǎng),思考題

4、,14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？ 15、傳代培養(yǎng)的細胞能一直傳代下去嗎？ 16、有些為何能一直傳下去嗎？ 17、動物細胞培養(yǎng)就是為了得到這些細胞嗎？ 18、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？,上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng),不都能,發(fā)生突變，朝著癌細胞方向發(fā)展,不是,保存10代以內的細胞，因為1050部分細胞的細胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細胞方向發(fā)展,多細胞動物和人體的細胞都生活在內環(huán)境中，根據你所學的知識，認為體培養(yǎng)細胞應該模擬內環(huán)境的哪些內容呢？,思考題,無菌、無毒,全部的營養(yǎng)物質,適宜的溫度和PH值,必要的氣體條件

5、,動物細胞培養(yǎng)條件：,1、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液） 2、營養(yǎng) （葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等） 3、溫度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,保證細胞順利的生長增殖,獲得細胞,細胞的全能性,植物體,培養(yǎng)結果,或細胞產物,快速繁殖、培育無病毒植株等,培養(yǎng)目的,葡萄糖、動物血清,蔗糖、植物激素,培養(yǎng)基特有成分,液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基性質,細胞增殖,原理,動物細胞培養(yǎng),植物組織培養(yǎng),比較項目,植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較,細胞群體,請舉出動物細胞培養(yǎng)應用的實例,動物細胞培養(yǎng)

6、應用,大規(guī)模培養(yǎng)生產生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體） 作為基因工程中的受體細胞 培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性 為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依據,原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng),從機體上獲取的組織，通過酶或機械方法分散成單個細胞進行培養(yǎng)，在首次傳代前的培養(yǎng)一般稱為原代培養(yǎng)（初代培養(yǎng)）。 原代培養(yǎng)的最大優(yōu)點是：組織細胞剛脫離機體，生物性狀尚未發(fā)生較大變化，在一定程度上能夠反映體內的狀態(tài)。 原代培養(yǎng)的細胞在生長、繁殖一定時間后，由于空間不足或細胞密度過大導致營養(yǎng)枯竭，會影響細胞的生長，因此需要進行擴大培養(yǎng)，即傳代或稱為傳代培養(yǎng)（繼帶培養(yǎng)），也就是將細胞按1:21:4的比例

7、傳代 但嚴格說來，不論在進行傳代時稀釋與否，將細胞從一個培養(yǎng)瓶轉移到另一個培養(yǎng)瓶即稱為傳代培養(yǎng)。,關于傳代培養(yǎng),在進行傳代時，如果是懸浮細胞，只需簡單稀釋即可，若需完全更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀，再懸浮于合適的培養(yǎng)液中即可。一般細胞每毫升接種數(shù)量為51048105個，傳代密度太低，細胞容易死亡，表現(xiàn)出細胞在達到增長前有較長的滯留期。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液會由于pH下降而呈現(xiàn)黃色，表明細胞已經達到最大密度需要換液或進行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細胞，等長滿培養(yǎng)瓶表面，即可進行傳代，多數(shù)細胞需用胰蛋白酶處理將細胞從生長物表面分離下來，以促進傳代培養(yǎng)。,細胞系和細胞株,細胞系和細胞株，兩者曾一度混用，

8、導致有些文獻中概念不清。下面所指的概念是現(xiàn)在國內外比較通用的，也是絕大多數(shù)研究者接受的觀點。 原代培養(yǎng)物經首次傳代成功即稱為細胞系（Cell Line），因此細胞系可泛指一般可能傳代的細胞。其中能夠連續(xù)傳代的細胞叫做連續(xù)細胞系或無限細胞系，不能連續(xù)培養(yǎng)的稱為有限細胞系。大多數(shù)二倍體細胞為有限細胞系。 通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養(yǎng)物稱為細胞株（Cell Strain），也就是說，細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。,CO2培養(yǎng)箱,細胞培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)箱一般稱為CO2培養(yǎng)箱，它的氣體環(huán)境是95%的空氣和5%的CO2。 CO2的作用：CO2既是細胞代謝產物，也是細胞所需成分，它主要與維持培養(yǎng)液的pH有直接關系。動物細胞多數(shù)需要微堿性環(huán)境，pH為7.27.4，以不超出6.87.6為宜。在細胞培養(yǎng)過程中，隨著CO2釋放量的增多，培養(yǎng)基會變酸，因此常加入NaHCO3（與CO2溶于水后所形成的H2CO3構成一個緩沖對）來調節(jié)pH。NaHCO3具有釋放CO2的傾向，加入CO2可以抑制這個反應的進行。培養(yǎng)箱中CO2濃度應與培養(yǎng)液中NaHCO3濃度相平衡，如果培養(yǎng)箱中CO2濃度設定在5%，培養(yǎng)液中Na