1、1.為什么要培養(yǎng)動物細(xì)胞？ 2.要培養(yǎng)動物細(xì)胞，對取材有何要求？,實驗材料，藥性、毒性檢測，提取細(xì)胞分泌物等,選擇胚胎細(xì)胞或幼年動物組織，因為其分裂增殖能力強。,3.培養(yǎng)基是用液體的還是固體的？培養(yǎng)基中的成分有何特點？,培養(yǎng)基是液體的，成份與動物內(nèi)環(huán)境相似。 動物血清,4.動物細(xì)胞培養(yǎng)條件有何特點？,體溫和PH都應(yīng)與動物體內(nèi)環(huán)境相似。,動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。,5.培養(yǎng)動物細(xì)胞需要哪些條件？,液體、營養(yǎng)物質(zhì)（血清）、 PH、溫度、氣體、無菌等,動物組織塊,細(xì)胞懸液,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)

2、胞,幼齡動物的器官組織；動物胚胎,細(xì)胞貼壁 接觸抑制,原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng),加入培養(yǎng)液,用胰蛋白酶等處理貼壁細(xì)胞,適宜條件,不死性細(xì)胞,胚胎 移植,體細(xì)胞核移植過程（體細(xì)胞克隆動物）,體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題,（1）成功率非常低 （2）克隆動物以表現(xiàn)早衰、生理缺陷等健康問題,1970年，有兩位科學(xué)家 做了一個著名的實驗： 人鼠細(xì)胞融合的實驗， 以證明細(xì)胞膜上的蛋白 質(zhì)分子是運動的。,人鼠細(xì)胞是怎樣實現(xiàn)融合的？動物細(xì)胞融合有什么實踐意義呢？,三、動物細(xì)胞融合與單克隆抗體 1.細(xì)胞融合： 是指兩個或兩個以上的細(xì)胞融合為一個細(xì)胞的過程。 自然發(fā)生： 受精卵 人工誘導(dǎo)： 利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合 誘

3、導(dǎo)因素：聚乙二醇、滅活的病毒或電激等。,什么是病毒的滅活？,滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。,因為滅活的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合,正在融合的 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞,正在融合的雞血細(xì)胞,動物細(xì)胞融合的原理：,細(xì)胞膜的流動性,把兩個不同的動物細(xì)胞放在一起，用滅活的病毒處理細(xì)胞，它們先發(fā)生質(zhì)融合，再出現(xiàn)核融合，進而形成雜交細(xì)胞。 融合后的雜交細(xì)胞經(jīng)過有絲分裂后仍能形成兩個完整的雜交細(xì)胞,2.動物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用： 突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能； 為制造單克隆抗體開辟了新途徑,使用相應(yīng)的抗體檢測乙肝病

4、毒抗原,3.單克隆抗體的制備 醫(yī)院一般怎樣檢測人體內(nèi)是否存在乙肝病毒？,乙肝病毒模式圖,凡能夠引起機體產(chǎn)生特異性 免疫應(yīng)答的物質(zhì)叫做抗原。,什么是抗原？,例如花粉、病菌、病毒等。有時自身的組織或細(xì)胞也會成為抗原，如癌細(xì)胞等。,抗原決定簇： 抗原表面具有的某些特定的化學(xué)基團，能決定抗原特異性，是免疫細(xì)胞識別抗原的重要依據(jù)。 各種抗原的決定簇數(shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。,什么是抗體？由何種細(xì)胞產(chǎn)生？主要分布在哪里?起何作用？,當(dāng)機體受到抗原刺激后由效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）產(chǎn)生的，并且能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白抗體。 抗體主要分布于血清中，也分布于組織液及外分泌液中。,血清

5、抗體（也稱多克隆抗體） 由血清中提取的抗體是由不同漿細(xì)胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達(dá)百萬種以上，稱為多克隆抗體。 特點：產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈 敏。,抗原不純,抗體不純,每一個效應(yīng)B淋巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強的抗體。 如果利用單個效應(yīng)B淋巴細(xì)胞進行無性繁殖（克?。?，形成細(xì)胞群，這樣的細(xì)胞群就有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體單克隆抗體。,問題： 怎樣獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體呢？,在體外培養(yǎng)的條件下，一個效應(yīng)B淋巴細(xì)胞能無限增殖形成細(xì)胞群嗎？ 什么樣的細(xì)胞能夠在體外無限增殖呢？,腫瘤細(xì)胞！,科勒,米爾斯坦,榮獲1984年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎,如果把一種B

6、淋巴細(xì)胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細(xì)胞進行融合，所得到的融合細(xì)胞既能大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。,如何誘導(dǎo)融合？,加入聚乙二醇（PEG）、 滅火病毒 、 電激等,如何得到B淋巴細(xì)胞？,3.制備單克隆抗體的過程,細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類型？,B-B B-瘤(雜交瘤細(xì)胞) 瘤-瘤,如何篩選出雜交瘤細(xì)胞？,單克隆抗體制備過程中，總共有兩次篩選，第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，兩次篩選的原理和方法是不相同的。 首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞,細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。 人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖

7、。 鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。 你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么？,小資料：,在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖細(xì)胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞因為可以利用淋巴細(xì)胞中的 S 途徑合成DNA而增殖。,通常采用有限稀釋克隆細(xì)胞的方法，將雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋，接種在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng),再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞,陽性孔,方法抗原-抗體雜交法,在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。,如何得到大量的單克隆抗體？,體內(nèi)培養(yǎng) 體外培養(yǎng),單克隆

8、抗體 化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強 靈敏度高,單克隆抗體,雜交細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞,骨髓瘤 細(xì)胞,特異性雜交瘤細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞系,提取,經(jīng)過免疫的 B淋巴細(xì)胞,動物細(xì)胞融合技術(shù),動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),單克隆抗體的制備過程：,特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖,特點：特異性強靈敏度高可大量制備,4、單抗隆抗體的應(yīng)用,作為診斷試劑,定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病,用于體外診斷人類和動植物疾病及病原鑒定，純度高、特異性強，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。,用于治療疾病和運載藥物,利用同位素標(biāo)記單抗，在特定組織成像,制成生物導(dǎo)彈，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在的位置，在原位殺死癌細(xì)胞，療效高、副作用小。,單克隆抗體的優(yōu)

9、點： 特異性強，靈敏度高，并可以大量制備。,用于治療疾病和運載藥物 特異性強、靈敏度高 生物導(dǎo)彈單克隆抗體抗癌藥物 療效高、毒副作用小,結(jié)合同位素的單抗,-生物導(dǎo)彈,單抗,放射性同位素,圖中B為_過程， 常用_作為誘導(dǎo)劑 ，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_ 。,1.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實驗方案,該實驗方案的 目是 ；,A是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生 ；,制備單克隆抗體,B細(xì)胞,專一抗體,細(xì)胞融合,滅活病毒,雙親細(xì)胞,分泌專一抗體,無限增殖,寫出 、所指的細(xì)胞工程各稱： 。 實施細(xì)胞工程時，所需的受體細(xì)胞大多采用動物卵細(xì)胞的原因是 ： 。

10、多莉面部的毛色是 ，判斷依據(jù)是： 。 繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細(xì)胞也具有 。 請舉例說明克隆綿羊培育成功的實際意義： 。,2.世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細(xì)看圖后回答問題：,核移植,胚胎移植,卵細(xì)胞體積大，易于操作，卵細(xì)胞中有啟動核基因表達(dá)的物質(zhì),白色,多利的核基因全部來自白面綿羊,全能性,保存瀕危物種，繁殖優(yōu)良品種，醫(yī)學(xué)上克隆器官,3.科學(xué)家用小鼠骨髓癌細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓癌細(xì)胞融合的是 A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞 B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞,

11、A,4.科學(xué)家將雌黑鼠乳腺細(xì)胞的細(xì)胞核移入白鼠去核的卵細(xì)胞內(nèi)，待發(fā)育成早期胚胎后移植入褐鼠的子宮，該褐鼠產(chǎn)下小鼠的體色和性別分別是 A.黑、雌 B.褐、雌 C.白、雄 D.黑、雄,A,5.將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與一種B淋巴細(xì)胞融合，可使融合的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體，其依據(jù)是 A.B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無限增殖 B.B淋巴細(xì)胞只有與骨髓瘤細(xì)胞融合后才能產(chǎn)生抗體 C.骨髓瘤細(xì)胞可以無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體 D.骨髓瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能增殖 （多選）,AC,C,4單克隆抗體是指 A、單個骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體 B、單個B淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體 C、單個雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體 D、單個抗

12、體通過克隆化，產(chǎn)生大量抗體,5.下列哪一項屬于克??？ A.將雞的某個DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B.將抗藥菌的某基因引人草履蟲的細(xì)胞內(nèi) C.將鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過免疫的脾細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞 D.將某腫瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個細(xì)胞系,D,6.一只羊的卵細(xì)胞核被另一只羊的體細(xì)胞核置換后，這個卵細(xì)胞經(jīng)過多次分裂，再植入第三只羊的子宮內(nèi)發(fā)育，結(jié)果產(chǎn)下一只羊羔。這種克隆技術(shù)具有多種用途，但是不能 A有選擇地繁殖某一性別的家畜 B.繁殖家畜中的優(yōu)秀個體 C用于保存物種 D.改變動物的基因型,D,7.在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是 （ ） A.結(jié)果是相同的 B.雜種細(xì)胞的形成過程

13、基本相同 C.操作過程中酶的作用相同 D.誘導(dǎo)融合手段的手段相同,B,根據(jù)下面植物體細(xì)胞雜交技術(shù)流程圖回答相關(guān)問題： （1）若運用傳統(tǒng)有性雜交（即用番茄、馬鈴薯雜交）能否得到雜種植株？為什么？_ _.,不能，不同種的植物存在生殖隔離,（2）在利用雜種細(xì)胞培育雜種植株的過程中，運用的技術(shù)手段是_，依據(jù)的原理是_,其中過程稱為_，與過程密切相關(guān)的具有單層膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器為_，過程相當(dāng)于_，過程 涉及到的分裂方式為_。,脫分化,細(xì)胞的全能性,原生質(zhì)體融合,高爾基體,植物組織培養(yǎng),有絲分裂,（3）已知番茄、馬鈴薯分別是二倍體和四倍體，則“番茄-馬鈴薯”屬于_倍體。 （4）隨“神六”太空旅行的種苗中，最受關(guān)注的是采油樹的試管苗。柴