1、第8章高效液相色譜法HPLC高性能液相色譜Y的特點是高壓、高效、高速高沸點、熱不穩(wěn)定有機和生化樣品的高效分離分析方法。8.1高效液相色譜的四個茄子組件：溶劑輸送系統(tǒng)(貯罐、高壓泵)樣品系統(tǒng)(樣品閥等)分離系統(tǒng)(顏色頻譜柱等)檢驗記錄系統(tǒng)(探測器、記錄器等)，1。高壓注入泵的主要組成部分之一，壓力：15033高壓力發(fā)生，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點之一，必須具有壓力穩(wěn)定、脈沖減少、流量穩(wěn)定調(diào)節(jié)、防腐等特點。2.樣品裝置，歐元對高壓工作狀態(tài)的耐壓6缸閥門樣品裝置，3。分離系統(tǒng)包括頻譜柱、溫度調(diào)節(jié)器、連接管等。色譜柱通常由內(nèi)部拋光的不銹鋼材料制成。內(nèi)徑為2 6mm，柱長10 50cm，圓柱形大

2、部分為直線形，內(nèi)部充滿了310 mm高效率微粒固定床。柱溫度一般用室溫或接近室溫的菌長法充填柱。使填充物成為懸浮液，在高壓泵的作用下，將其推進含有洗脫液的色譜熱。理論塔板數(shù)可達8萬/米，4。探測器要求使用：靈敏度高、噪音低、線范圍寬、反應(yīng)快、對溫度和流速的變化不敏感的兩種茄子類型的溶質(zhì)型探測器。僅對分離成分的物理或物理特性反應(yīng)紫外線、熒光、二極管陣列、電化學探測器整體型探測器3360對。UV探測器最常用，70池卷： 110L光程： 210毫米波長3360 254納米窗口3360石英，折射計由測量池和比較池(視差折射計)組成，由于nf(T)，需要精密恒溫(0.001)牙齒。例如，糖類、寶巖系、安

3、定計、庫倫系、傳導(dǎo)系等，首先安定計容易在工作電極的工作電壓范圍內(nèi)還原或氧化的物質(zhì)電極表面中毒。5為了通過更改離子強度或pH-測量組的相對保持值來提高分離效果和縮短分析時間，梯度洗脫裝置分為兩類茄子。外部梯度裝置(低壓梯度)，流動相在常溫常壓下混合，用高壓泵對支柱系統(tǒng)施加壓力，只需要一臺泵。內(nèi)部漸變裝置(也稱為高壓梯度)將兩種溶劑分別用泵增壓，然后按照傳記部件設(shè)定的程序注入漸變混合室，混合并運到柱系統(tǒng)。漸變洗脫的本質(zhì)：不斷改變流中的強度，調(diào)整混合采樣中每個組的K值，以使所有光譜以最佳平均K值通過顏色光譜。LC的作用與GC的節(jié)目溫度上升相同。換句話說，通過更改溶質(zhì)的極性、pH值和離子強度來調(diào)整溶質(zhì)

4、的K值，在GC中程序性地調(diào)整溫度來更改K值。8.2幾種茄子常見液相色譜形態(tài)，1 .液相色譜(分配色譜)1941年，馬丁發(fā)明了硅膠上吸收的水為固定相，氯仿在流動中的應(yīng)用范圍：最常用的方法。低于相對分子量3000，沒有電的極性化合物，分離原理固定液通過分子間親和力或化學鍵合力附著在微小的惰性載體表面。分離的組溶解在流動上，根據(jù)分配系數(shù)K在兩相之間分配K，由于移動速度不同，可以分離不同的成分？-嗯？防止固定液流失的方法1，在分析柱之前添加與分析柱具有相同固定液的字典處理柱。試樣處理前，使流化床提前通過字典處理柱，使流化床在固定液中提前飽和。保護分析柱的固定液免受損失。問題是不能使用漸變洗脫技術(shù)。方法

5、2 :化學鍵固定相用Si-O-R鍵將固定液結(jié)合到SiO2載體表面，反色頻譜固定液極性為非極性洗脫液。例如水(常用方法，75%) C18列(18烷基化的SiO2填充柱)牙齒標準頻譜柱。酒精、芳香族正常及逆液分配顏色頻譜正色頻譜：固定液為極性，洗滌劑經(jīng)常用于悲劇地分離極性化合物，極性較大的成分保存時間長，此后最高峰固定液：水、甘油、氧化二丙烯腈(極性)流動相：己烷、苯、氯仿(極性)否則不容易剝落。溶出液的極性是溶劑強度參數(shù)E表征，E越大，極性越強，分離極性越不同的化學物質(zhì)應(yīng)用。異構(gòu)體不適用于銅系物的分離。3.離子交換色譜1975年H. Small發(fā)明，目前增長最快的分枝分離原理3360離子交換樹脂

6、是固定相。樣品中的離子引起離子交換樹脂的離子和離子交換反應(yīng)。平衡常數(shù)K=-NR4 X-Cl-/-NR4 Cl-X-，K越大，溶質(zhì)離子和離子交換劑的相互作用越大，保留值越大，磺酸陽離子更換樹脂就越大。陽離子的保存值大小： 1價陽離子：Cs Rb K NH4 Na H Li 2價陽離子：Ba2 Pb2 Sr2 Ca2 Cd2 Cu2 Zn2 Mg2強堿性負離子更換裴秀智，保存值大小順序： po43-so42-c2o 42-I-HSO 4-。氨基酸，核酸，蛋白質(zhì)等4。尺寸排斥色譜法原位凝膠過濾色譜：水是流動凝膠過濾色譜GFC凝膠滲透色譜3360非水流動相凝膠滲透色譜y GPC 195，9年1.流動相

7、種類和極性、液相色譜的流動相也稱為“乳液”，極性可以分為極性、弱極性、非極性。可以根據(jù)使用方法劃分：固定成分浸出和梯度浸出共同溶劑：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水以二元或多元組合溶劑為流動相，靈活調(diào)節(jié)流動上的極性，或增加選擇性，改善分離或峰值時間調(diào)整，選擇流動時應(yīng)注意的幾個茄子問題：(1)固定液溶解丟失的情況；酸性溶劑破壞二氧化硅固定是相同的。(3)樣品在流動中必須具有適當?shù)娜芙舛?，防止沉淀發(fā)生，在柱上沉積。(4)流量相同時，檢測器的要求也必須滿足。使用紫外線探測器時，流動相有紫外線吸收的情況下會渡邊杏。8.4應(yīng)用實例，說明：為了解決分析問題，首先反轉(zhuǎn)色譜法C18標準柱，使其流

8、動相調(diào)節(jié)K(保留行為)和(可選)，逆色譜優(yōu)勢：a .顏色頻譜柱平衡快，梯度適合清洗B。流動相主體是水，甲醇是有機改性劑，添加鹽緩沖劑、金屬螯合物和物質(zhì)、手性試劑等，使鄭智薰電離，弱電離，金屬離子，手性異構(gòu)體，多環(huán)芳香烴分析：反向分配色譜法，固定相：十八烷基SiO2，殼體流動相：20% CH3OH8.4進展柱小型化高柱效率高分辨率可選高速分離，高效率pcec分離(500，000 plates/m)of 14 explosives in 7min，see ref.c. bar 1998，70，溫度：1030；相對濕度：80；恒溫，恒濕，高功率磁干擾，高振動設(shè)備，良好的通風設(shè)施，8.5 HPLC的日

9、常維護和維護，HPLC的日常運行條件：沖洗工作原理泵輸送的流動相顯影定量環(huán)，進入彩視圖柱分析樣品，1 .6缸閥門注入機的使用和維護，手柄旋轉(zhuǎn)要快。在手柄桿(Load)和Inject之間，由于暫時堵塞了歐元，歐元的壓力劇增，再次轉(zhuǎn)移到樣品上，過高的壓力對柱頭造成損害，必須盡快轉(zhuǎn)動。部分裝載法：樣品楊怡最大定量環(huán)體積75要求每個樣品體積正確、相同的完全裝載法。達到樣品楊怡最小定量環(huán)體積的3 5倍后，定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液可以完全替換樣品，獲得所需的精度和再現(xiàn)性。兩種茄子輸液方法3360，樣品必須過濾。用0.45(0.22)m的濾膜防止微粒截止閥減少樣品閥的磨損。注入器：用不含鹽的稀釋劑、不含水或鹽的流動沖洗，在樣品閥的桿和入(Inject)位置反復(fù)沖洗，用不含纖維的紙擦拭注射器外部。2.我想用泵管理流相清潔液中的砂芯過濾頭。你必須經(jīng)常清理流量。更換，防止泵內(nèi)堵塞或有泡沫，以防止沉淀。每次分析結(jié)束后，為了防止樣品交叉污染，無論如何都要防止碰撞、彎曲或強震動柱，閥門或線路必須清潔流動相脫氣。不要使用高粘度