1、實驗課要求,1.進入實驗室須穿白大衣，實驗室要保持安靜，有秩序，手機要保持關(guān)閉或無聲狀態(tài)，以免影響他人。 2.必須嚴肅、認真地進行實驗操作，觀察實驗結(jié)果。 3.動物室需保持清潔，定期確認飼料和水瓶，注意觀察動物。 4.取及動物時，注意個人安全。,1,5.鼠籠及墊料需要每周更換次，用過的鼠籠必須及時清洗干凈。 6.如有死亡動物，應(yīng)及時報告并按規(guī)定處理。 7.愛護公共財物，節(jié)約各種試劑,每次實驗結(jié)束后都要輪流值日，將實驗室打掃干凈，關(guān)好門窗和水電后方可離開實驗室。,2,形態(tài)學(xué)實驗（一）,2020/8/3,3,實驗主要內(nèi)容,小白鼠的捉拿與固定、注射方法 動物麻醉及正確使用手術(shù)器械方法 肝硬化模型制備

2、方法 解剖小白鼠并觀察腹腔臟器及解剖位置 （重點觀察膽總管）,4,小白鼠的生物學(xué)特性,）體型小，體重20-40g，壽命一般為2-3年。 ）性情溫順，膽小怕驚，對外來刺激極為敏感。 ）屬雜食性，胃容量小，不耐饑餓。對溫、濕度變化敏感。 ）性成熟早，繁殖力強。,5,小白鼠的捉拿與固定方法,先用右手將鼠尾抓住并提起，將其旋轉(zhuǎn)數(shù)周后放在實驗臺面上，在小白鼠向前爬行時用力向后拉尾，此時用左手的拇指和食指捏住小白鼠兩耳和頭頸部皮膚，然后將鼠置于左手心中，拉直后肢并用左手無名指和小指壓緊尾巴和后肢，右手即可作注射、灌胃等實驗操作。,6,常用給藥途徑與方法,）注射給藥法：肌內(nèi)注射 皮下注射 皮內(nèi)注射 腹腔注射

3、 靜脈注射 ）口服給藥法：飼料給藥 胃管給藥,7,腹腔注射方法,小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左下腹部刺入皮下，使針頭向前推0.51.0cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。 可先回抽注射器，確認 無血管或臟器刺破。 切勿用力過猛，以免刺 傷內(nèi)臟器官。,8,動物術(shù)前準備,實驗前動物需： 禁食 12-24小時 禁水 4-6小時 以免手術(shù)時出現(xiàn)嘔吐及窒息死亡等現(xiàn)象,9,動物實驗常用麻醉劑,（）吸入性麻醉劑：乙醚、氯仿等 特點：a.麻醉量與致死量相差大；b.麻醉深度易于掌握；c.麻醉后恢復(fù)快 （）非吸入性

4、麻醉劑：巴比妥類、氨基甲酸乙酯、水合氯醛、氯胺酮等 特點：優(yōu)點是使用方法簡便、麻醉過程平穩(wěn)，且一次用藥便可維持較長時間等；缺點是動物的蘇醒較慢，麻醉深度和使用量較難控制。,5%水合氯醛，按0.2m1/20g腹腔注射,10,麻醉藥給藥途徑,）注射給藥法：肌內(nèi)注射 皮下注射 皮內(nèi)注射 腹腔注射 靜脈注射 ）口服給藥法：灌胃法 ）其他途徑：呼吸道給藥 脊髓內(nèi)給藥 直腸內(nèi)給藥,11,麻醉效果的觀察,呼吸：深慢而平穩(wěn) 反射活動：明顯遲鈍 肌張力：全身肌肉松弛 皮膚夾捏反應(yīng)：皮膚夾捏反射消失,12,正確持剪刀法,為拇指和第四指分別插入剪刀柄的兩環(huán)，中指放在第四指環(huán)的剪刀柄上，食指壓在軸節(jié)處起穩(wěn)定和向?qū)ё饔?/p>

5、，有利操作。,2020/8/3,13,2020/8/3,14,正確持鑷法,正確持鑷是用拇指對 食指與中指。,2020/8/3,15,縫 針,縫針是用于各種組織縫合的器械，它由三個基本部分組成，即針尖，針體和針眼。 圓針：弧度大者多用于深部組織及軟組織。 三角針：前半部為三棱形，較鋒利，用于縫合皮膚、軟骨、韌帶等堅韌組織，損傷性較大。 鏟頭針：臨床較少用。,圓針,三角針,鏟頭針,直針,2020/8/3,16,器械打結(jié)法,2020/8/3,17,肝硬化造模的主要方法,化學(xué)性肝硬化模型 結(jié)扎膽總管肝硬化模型 實驗性免疫肝硬化模型 血吸蟲蟲卵所致肝硬化模型 轉(zhuǎn)基因肝硬化模型 復(fù)合法,18,化學(xué)性肝硬化

6、模型,無色、易揮發(fā)、不易燃的液體。具氯仿的微甜氣味?；瘜W(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。 分子量153.84，微溶于水，可與乙醇、乙醚、氯仿及石油醚等混溶。 操作注意事項：有毒，加強通風(fēng)。,四氯化碳（ CCl4 ）：carbon tetrachloride,19,CCl4對肝臟損傷機理,CCl4通過肝微粒體細胞色素P450氧化酶激活后, 產(chǎn)生自由基CCl3-及Cl,CCl3-與肝細胞內(nèi)大分子發(fā)生共價結(jié)合,破壞肝細胞功能,肝纖維化、肝硬化,20,CCl4模型制備過程,給藥時間：腹腔注射次/周，共4周，最后一次給藥24h之后處死并取材。 藥物劑量：20% CCl4 0.1ml/20g 特點：成功率高、方法成熟，但動物個

7、體差異較大。,CCl4 : 橄欖油: 即20的CCl4注射,21,CCl4注射后肝臟變化,注射CCl4一個月后,正常小白鼠肝臟,22,正常組,2020/8/3,23,CCL4 組,2020/8/3,24,CCL4 組,2020/8/3,25,結(jié)扎膽總管肝硬化模型,固定,備皮,切開 皮膚,切開 腹膜,消毒,2020/8/3,26,正常人體膽總管解剖,2020/8/3,27,小白鼠膽總管位置,2020/8/3,28,結(jié)扎膽總管,進腹后提出十二指腸，近十二指腸處游離膽總管，兩端絲線結(jié)扎,2020/8/3,29,切斷膽總管、縫合,2020/8/3,30,結(jié)扎膽總管手術(shù)過程,Curr Protoc Toxicol. 2012 May;Chapter 23:Unit 23.1,2020/8/3,31,術(shù)后周后膽管明顯擴張,膽囊,膽囊管,肝總管,術(shù)后周后可見膽囊、膽 囊管及肝總管明顯擴張； 皮膚、肝臟明顯變黃,32,正常組,2020/8/3,33,BDL組,2020/8/3,34,BDL組,2020/8/3,35,2020/8/3,36,每個組 4只,正常組 1只,加藥組 3只,37,考核方式: 1.平時成績（平時