1、實(shí)驗(yàn)九 明膠液化、淀粉水解等生化試驗(yàn),一、目的與要求,掌握微生物的生化反應(yīng)原理在微生物分類(lèi)鑒定中的重要作用，及淀粉試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、糖發(fā)酵（酒精發(fā)酵）等的原理、操作方法。,二、實(shí)驗(yàn)原理,1. 糖發(fā)酵試驗(yàn) 是最常用的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌的鑒定上及釀造工業(yè)中鑒別培養(yǎng)酵母和野生酵母的一種重要方法。絕大多數(shù)微生物能利用糖類(lèi)作為碳源和能源，但是它們?cè)诜纸馓堑哪芰ι嫌泻艽蟮牟町?，有些?xì)菌能分解某種糖并產(chǎn)酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和氣體(如氫、甲烷、二氧化碳等)；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，傷寒桿菌能分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖；普通變形桿菌分解葡萄

2、糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。酵母菌能分解葡萄糖、蔗糖生成乙醇和CO2，不能分解乳糖。 酸的產(chǎn)生可利用指示劑來(lái)判斷，在配制培養(yǎng)基時(shí)，預(yù)先加入溴酚藍(lán)(pH3.04.6, 黃藍(lán))，當(dāng)發(fā)酵變酸時(shí)可使培養(yǎng)基由藍(lán)色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的德漢氏小管中有無(wú)氣泡來(lái)證明。,2,1,2.過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 某些微生物能產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶，將過(guò)氧化氫分解而放出氧氣，多數(shù)需氧或兼性厭氧微生物皆能產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶，而一般厭氧微生物不產(chǎn)生此酶。 3. 淀粉水解試驗(yàn) 有些微生物能產(chǎn)生淀粉酶(胞外酶)使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖。淀粉水解后遇碘不再變蘭色。 4.明膠液化試驗(yàn) 明膠是一種動(dòng)物蛋自質(zhì)，高于24時(shí)可液化成液體，低于20時(shí)凝固成固體。某些細(xì)菌能產(chǎn)生明膠液化酶(一種蛋白酶)，分解明膠后使明膠分子變小，雖低于20亦不再凝固。利用此特點(diǎn)，用來(lái)鑒定某些微生物，即能產(chǎn)生明膠液化酶的微生物，能使明膠液化，無(wú)此酶的微生物則不能液化明膠。,三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作,1. 糖發(fā)酵試驗(yàn) 2人/組:每種糖分別接種大腸桿菌和酵母菌 2. 淀粉水解試驗(yàn) 2人/組: 接種酵母菌、黑曲霉；枯草芽孢桿菌 3.明膠液化試驗(yàn) 2人/組：接種枯草桿菌，大腸桿菌 4.過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面接種枯草桿菌、大