1、實驗三、微生物數(shù)量的測定,一、實驗?zāi)康模?掌握使用血球計數(shù)板進行微生物顯微鏡直接計數(shù)的方法 了解微生物數(shù)量測量的幾種方法、原理及其應(yīng)用,二、實驗原理,常用的微生物細胞數(shù)目的檢測法 血球計數(shù)板法 平板菌落計數(shù)法 干重法 比濁法等,干重法 將一定量的菌液中的菌體通過離心或過濾分離出來，然后烘干至恒重(干燥溫度可采用105、100或80)、稱重。一般干重為濕重的10%20%。 注：該法適合菌濃度較高的樣品。,比濁法,在一定范圍內(nèi)，菌懸液中的細胞濃度與混濁度成正比，即與吸光值成正比，菌數(shù)越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度計，在一定波長下測定菌懸液的光密度，就可反應(yīng)出菌液的濃度。該法適合測定大量的細

2、胞。,顯微鏡直接計數(shù)法 利用血球計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)是常用的一種微生物計數(shù)法 優(yōu)點：直觀、快速 缺點：誤差較大，不適合細菌計數(shù)（太?。?其原理與計數(shù)板的構(gòu)造有關(guān) 每塊計數(shù)板上有兩個計數(shù)室 （正方形），蓋上蓋玻片后容積是一定的（0.1mm3），深為0.1mm，邊長為1mm，其上面有精確的刻度。,其刻度一般有兩種規(guī)格,16個中方格，每個中方格分25個小格 1625,25個中方格，每個中方格分16個小格 2516,計數(shù)室,我們采用的是2516的，計數(shù)時查5個中方格的總菌數(shù)。如圖： 計算：1個計數(shù)室的總菌數(shù)=A/525B 1g（ml）樣品中的總菌數(shù)=A/525101000B =50,000AB個,5個

3、方格的總菌數(shù),稀釋倍數(shù),三 實驗器材,1.菌種 酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌懸液(已稀釋100倍) 2.器具 顯微鏡、血球計數(shù)板、吸管、蓋玻片。,四 實驗方法,1.檢查計數(shù)板 檢查計數(shù)板是否有破損。 2.鏡檢計數(shù)室 在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進行計數(shù)。,3加樣品 將清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用細口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣點一小滴（不宜過多），讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自行進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。,4.顯微鏡計數(shù) 靜置幾分鐘，將計數(shù)板放在顯微鏡下，先用低倍鏡找到計數(shù)室，再換成高倍鏡進行計數(shù) 5.清洗血球計數(shù)板 計數(shù)完畢，將計數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈后自行晾干，鏡檢觀察每小格內(nèi)無殘留物為止。,注意事項 1、加樣時先搖勻菌液，計數(shù)室中不可有氣泡產(chǎn)生； 2、菌液濃度以每小格有5-10個菌體為宜。 3、計數(shù)時，格線上的菌體只數(shù)上方和右邊線上的； 4、如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，作為兩個菌體計算； 5、清洗計數(shù)板時切勿用手或硬物刷洗。在水龍頭上用水柱清洗，直到洗凈為止。 6、一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均值來計算。,特別注意,血